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  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 常规过碘酸钠标记抗体 20天前
    没人嘛。。
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 常规过碘酸钠标记抗体 20天前
    我标记的是国产的HRP
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 常规过碘酸钠标记抗体 20天前

    常规过碘酸钠标记抗体,流程:过碘酸钠氧化-乙二醇终止-加入抗体-碳酸盐透析-硼氢化钠还原-硫酸铵沉淀-溶解透析。抗体在乙二醇终止时添加,同时做了两种抗体,一种抗体加进去立马出现浑浊,另一种抗体加进去还是澄清透明。现在情况:1继续往下做,忽略沉淀。2重复一次不知道是啥原因导致的沉淀,抗体是用pbs超滤过的。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 单克隆抗体制备 55天前
    第五次亚克隆都阳性了
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 单克隆抗体制备 58天前
    是你呀,我这几天没上丁香园。我都五亚了,明天再检测,看下阳性率如何。
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 单克隆抗体制备 71天前
    顶顶顶
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 单克隆抗体制备 72天前

    请教大家,15株杂交瘤细胞进行亚克隆,第三次亚克隆德时候,有6株全阳性,其余几株都有1到2个孔是阴性(一般有30到40个长了细胞德孔)。然后进行了第四次亚克隆,7柱基本上还是有1-2个孔是阴性的(一株一板子,长了20-30个细胞)。然后现在不知道需不需要做第五次亚克隆。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 零基础精通分子生物学实验技术最新电子书(全5本) 115天前
    楼主,也可以给我一份嘛
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 带his标签的蛋白用镍柱纯化不挂柱 120天前
    小惠惠LJUV 请问您的问题现在解决了吗?现遇到同样问题,挂不上柱! 我也出现这个问题,想问问你解决了吗
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 亚克隆可以半块板子一种细胞嘛 127天前

    最近在制备单克隆抗体,然后,融合后检测。想要筛选出配对的单克隆抗体。然后就想每个细胞都亚克隆。这样工作量对一个人来说,可能有点大。所以想问下可不可以半块板子一个孔。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 亚克隆可以半块板子一种细胞嘛 127天前

    最近在制备单克隆抗体,然后,融合后检测。想要筛选出配对的单克隆抗体。然后就想每个细胞都亚克隆。这样工作量对一个人来说,可能有点大。所以想问下可不可以半块板子一个孔。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 亚克隆可以半块板子一种细胞嘛 127天前

    最近在制备单克隆抗体,然后,融合后检测,阳性孔有十几个吧。想要筛选出配对的单克隆抗体。然后就想每个细胞都亚克隆。这样工作量对一个人来说,可能有点大。所以想问下可不可以半块板子一个孔。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 细胞污染防治的一些建议 165天前
    Yoda1985 如果黑点过夜后并没有变大,那污染的概率不大,两个小时从无到有,过夜却没有变大,是污染的话逻辑上说不通。 谢谢呀。我会继续观察的,到时候在发图上来请教。
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 细胞污染防治的一些建议 165天前
    接200楼,第二天显微镜下看细胞,细胞状态明显变差,感觉贴壁的细胞都改变位置了。应该是污染了
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 细胞污染防治的一些建议 165天前
    我养的的骨髓瘤细胞,今天晚上八点的时候,还没发现这个,十点多一点的时候就发现这个了,不知道是不是污染了。照片上的黑点是飘在培养液上的。可以晃动。而且这次细胞也很奇怪,长得很慢,中间和四周有一定的细胞,但有的位置如图,没什么细胞。求解答
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 求助单克隆抗体制备过程中遇到的问题 176天前

    制备单克隆抗体:第一次亚克隆,计数出现问题,十块板子只有三十几个孔长了细胞,只有两个阳性孔(值在3左右)。重做亚克隆,计数应该没问题,按的是每孔一个细胞算的。四块板子,有三块板子上面都有30个孔左右,有一块板只长了一个孔,elisa检测只有一个阳性孔(值在3左右)。蛮尴尬的,一个阳性孔还就是那块只长了一个孔上的独苗。原孔同时检测都是阳性的,值在3左右。想不明白到底是哪里出现问题了。是亚克隆污染了吗。还是在亚克隆的时候退化了。十分之郁闷。另外想问下,用两只小鼠的脾脏制备饲养细胞,细胞可以混在一起嘛。然后准备再做一次亚克隆。

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  发布了新帖 救救孩子吧 181天前

    制备单克隆抗体:第一次亚克隆,计数出现问题,十块板子只有三十几个孔长了细胞,只有两个阳性孔(值在3左右)。重做亚克隆,计数应该没问题,按的是每孔一个细胞算的。四块板子,有三块板子上面都有30个孔左右,有一块板只长了一个孔,elisa检测只有一个阳性孔(值在3左右)。蛮尴尬的,一个阳性孔还就是那块只长了一个孔上的独苗。原孔同时检测都是阳性的,值在3左右。想不明白到底是哪里出现问题了。是亚克隆污染了吗。还是在亚克隆的时候退化了。十分之郁闷。救救孩子吧。(实验室一名师兄同时做,他的没问题)

  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 蛋白质复性时出现的奇怪沉淀 217天前
    你好,请问你的问题解决了吗。我的蛋白在复性的时候也出现这样的问题的,2mol尿素透析的时候,没什么蛋白析出,换成0x的tris-hcl时就大部分都析出来了
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  回复了帖子 纯化带HIS标签的融合蛋白,蛋白根本纯化不下来,都沉淀在柱子上,怎么办?急,急 ,急! 228天前
    你好,最近我也遇到这个情况了,500mm的咪唑蛋白系脱不下来,我改变ph也洗脱不下蛋白,然后再洗脱液中加入了8m的尿素,才把蛋白系脱下来。但是我是上清表达的蛋白,用尿素洗脱的话,那我还不如做包涵体的。所以想问问楼主最后是怎么解决的,谢谢啦
  • zzz111U5EV
    zzz111U5EV  :请问bandscan在win10上面可以使用吗。我在园子里下载了几个,都不能运行

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