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【专题讨论】有关Akt和p-Akt的Western Blot 结果分析与讨论

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【原创】real-time PCR结果分析及讨论

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【招聘】招聘实验室负责人

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  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 瑞氏吉姆萨染色方法步骤 55天前

    瑞氏吉姆萨染色液是以瑞氏和吉姆萨为主要原料,通过研磨配制而成。细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程,此过程既有物理吸附作用,又有化学亲和作用,各种细胞及相关成分由于其化学性质不同,对瑞氏吉姆萨染色液中的酸性染料(伊红)和碱性染料(亚甲蓝)的亲和力也不一样,标本涂片经瑞氏吉姆萨染色后,相应各类细胞呈现不同的着色,从而达到辨别其形态特征的目的。经常用于血液和细胞涂片、骨髓细胞涂片、细菌染色。红细胞呈肉粉色,细胞质呈红色,细胞核及细菌呈蓝色,嗜酸性颗粒呈橘红色。一、染色步骤1、样本制备:制作涂片、涂片放置自然晾干;制作甩片、甩片放置自然晾干;石蜡切片脱蜡至水,自来水洗5min;2、瑞士吉姆萨染色:瑞氏吉姆萨染液盖满标本30秒,再加入2-3倍体积的PBS染液1-3min,倾去染液,蒸

  • 病理形态
    病理形态  回复了帖子 求实惠靠谱的英文润色公司? 56天前
    是朋友介绍的,赛维尔生物,说是可以开Elsevier润色的证明  就去试了下,一般7个工作日,加急贵点
  • 病理形态
    病理形态  回复了帖子 SCI润色需要用杂志页面推荐的润色机构吗,还是自己找一个也行? 56天前
    你可以自己找润色公司,最好能开润色证明的,这样不容易别拒,你可以在百度上搜下赛维尔生物,他们可以开elsevier润色证明。
  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 TTC染液使用方法及注意事项 56天前

    产品简介:        TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。保存条件:        4℃避光保存,有效期3个月。使用方法:1. 取材:动物麻醉后立即取新鲜组织(如脑、心脏),不经固定液固定,将组织直接放入-20℃速冻20-30min,如果不急用,可以暂时放置-80℃冻存。2. 组织块切片:将冻好的组织稍解冻,用莱卡刀片手动切片,厚度2-3mm为宜,切面整齐。3. TTC染

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 流式凋亡实验步骤 56天前

    磷脂酰丝氨酸(PS)是一种带负电荷的磷脂,正常情况下主要存在于细胞膜的内面。细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,其变化之一是膜内的PS发生外翻,暴露在细胞膜外面。Annexin V是一种Ca2+依赖性的磷脂结合蛋白,对PS具有高度亲和性。因此可以通过Annexin V与PS的结合检测细胞膜是否完整,以此判断细胞凋亡。流式凋亡实验步骤(1) 收集上清:收集培养液于流式管中(有少量悬浮细胞)。(2) 收集细胞:六孔板中的细胞用PBS洗涤一次,加入1 ml无EDTA 0.25%胰酶,待细胞变圆且有部分细胞悬浮,即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞,使细胞悬浮。收集于流式管中,1500 rpm离心5 min,弃上清。(3) PBS洗涤细胞:加入3 ml&n

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 阿利新蓝染色步骤及结果展示 56天前

    一、染色原理阿利新蓝是一类铜酞花青染料,易溶于水,由于分子内含铜,所以呈蓝色。阿利新蓝为氟盐,带阳电荷,是一个碱性染料,与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根的酸性粘液物质形成不溶性复合物。即染料分子中带正电荷的盐键和酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团结合而呈蓝色,其结合又与pH有关。常采用pH2.5和pH1.0的阿利新蓝液。pH2.5时,含羧基和弱硫酸根的粘液物质染蓝色,强硫酸化黏液物质不着染或淡染;相反,pH1.0时,羧基不能离子化,无法与染料结合而不着染,而硫酸化黏液物质则可与染料结合而呈蓝色;软骨组织中含有硫酸软骨素,同样对阿利新蓝的碱性基团有很强的结合能力。二、染色应用用以区分羧基黏液还是硫酸化黏液物质,常用于黏液性上皮肿瘤的鉴别和证明肿瘤是否含有粘液物质;在骨组织中能有够清晰的标记

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 流式细胞周期检测分析 59天前

    一、实验简介细胞周期(Cell Cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理:由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI(碘化丙啶)为插入性核酸荧光染料,能选择性嵌入核酸DNA和RNA双螺旋的碱基之间与之结合,结合

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 AB-PAS染色应用及具体操作步骤 59天前

    一、染色机制某些细胞如胃肠的杯状细胞能分泌粘稠的分泌物,含有大量的糖称粘多糖。中性粘液物质含有氨基己糖和游离的己糖基,酸性粘液物质也含有氨基己糖并含有各种酸根。此方法先染阿利新蓝染酸性粘液物质为蓝色,并阻断酸性粘液物质的羧酸分子中的乙二醇被高碘酸氧化生产二醛而着红色。只有中性粘液物质的乙二醇基被高碘酸生成二醛后与雪夫试剂中的无色品红作用生成红紫色复合物。二、染色应用正常粘膜上皮能分泌中性和酸性粘液物质,此染色方法主要用于区分中性和酸性粘液,及二者的比率。在正常胃肠粘液中,胃粘膜的表面上皮、幽门腺、十二指肠腺等主要为红色中性粘液物质。小肠及大肠粘膜的杯状细胞和肠腺主要分泌酸性粘液物质。有些癌细胞可以通过次染色方法进行区分属于什么性质的癌。如肠型胃癌分泌酸性粘液物质着蓝色,胃型胃癌分泌中性粘液物

  • 病理形态
    病理形态  回复了帖子 PCR实验标本收样要求汇总 59天前
    micRNA是(mRNA-interfering complementary RNA)的缩写,能与被调控的RNA或DNA互补的小分子。
  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 PCR实验标本收样要求汇总 59天前

    1、血液标本收集a.将血液收集于EDTA抗凝管中,4°运输,避免剧烈震荡溶血。抗凝血可以放于4℃2-5天,最好是尽快用红细胞裂解液充分去除红细胞,保留有核细胞, -80℃保存干冰运输。至少每管2ml全血。冬天血液常温运输,夏天加冰袋运输。b. 凝固的血液干冰运输(实验效果会差一些)。c.血清或血浆做micRNA,标本量不少于500ul,干冰运输。2、组织标本收集  当从富含降解酶的组织如胰或肠中提取RNA或DNA时,最好将组织立即放入液氮。冰冻的组织块可直接可移至-80℃储存。一般标本量不少于100mg;脂肪或者骨头等RNA含量较少的标本需要200~300mg;植物标本需要200~300mg,植物标本需要客户提供相关引物信息。组织标本干冰运输。3、贴壁细胞标本收集1)用微

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 PAS染色应用及染色步骤 59天前

        一、染色机制:    PAS染色又称过碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合呈红色,定位于胞浆上。    二、染色应用:    随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ,心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ,糖原累积病诊断和研究 ,糖尿病的诊断和研究 ,用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ,还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据。    三、染色步骤:&

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    病理形态  发布了新帖 流式JC-1线粒体膜电位检测 60天前

    一、实验简介线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。其原理是,当线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体基质中,形成聚合物,488nm激发时的最大发射波长为590nm,可以产生红色荧光,在流式上表现为FL1和FL2双阳性;当线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,488nm激发时最大发射波长为527nm,可以产生绿色荧光,形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化,常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。二、实验步骤(1) 收集细胞:细胞悬液转入离心管中,1000rpm离心5min

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    病理形态  发布了新帖 天狼猩红染色应用及染色步骤 61天前

    天狼猩红和苦酸都是强酸性染料,易与胶原分子中的碱性基团结合,吸附牢固。偏振光镜检查,胶原纤维有正的单轴双折射光的属性,与苦酸-天狼猩红结合,可增强双折射,提高分辨率,从而区分两型胶原纤维。一、染色应用在各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中,在偏振光镜下,对各种纤维化病变的分型和分级研究有一定帮助。二、染色步骤1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、天狼猩红染色:切片入天狼猩红染液中染色8-10min,两缸或三缸无水乙醇脱水;3、脱水封片:切片再放入干净的二甲苯透明5min,中性树胶封片。4、显微镜镜检,图像采集分析。三、染色结果光学显微镜下胶原纤维红色,背景黄色;偏振光下,

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 活细胞内钙离子成像实验步骤 61天前

    Fluo-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506 nm处被吸收,可以被氩离子激光的488 nm激发光激发,便于检测。Fluo-3在没有同钙结合的情况下,无荧光产生。但是,在与钙结合后,荧光(526 nm)增强至少40倍。Fluo-3/AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3/AM的荧光非常弱,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3/AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506 nm,最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右,发射波长为525-530 nm。实验步骤(1) 用激光共聚焦专用培养皿培养细胞。去除培养基后,用

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 MASSON染色方法及染色结果 63天前

    胶原纤维和肌纤维的鉴别染色是病理组织制片的一个重要方法,它的染色对病理诊断很有帮助。1.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一定的纤维,这些纤维在H-E染色中都染成红色而难以区别。通过用上述方法染色,一般可区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性,还是肌源性,或者是神经纤维源性。对于后者,有时还需加染磷 钨酸苏木素来协助诊断。一、染色方法1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、重铬酸钾染色:切片入重铬酸钾浸泡过夜,自来水洗。3、铁苏木素染色:铁苏木素A液与B液等比混合成铁苏木素染液,切片入铁苏木素3min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 体外血管形成实验 63天前

    一、实验简介血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用。小管形成实验是测量在体外血管生成的一种快速的、可量化的方法。一般做的多的是研究内皮细胞的小管形成。内皮细胞结合条件培养基接种于一定基底上,易形成三维网状结构。然后通过图像分析软件对小管结果进行定量分析。二、实验步骤(1) 将24孔板和1ml的头放置冰箱或冰上预冷20-30min,从-20℃冰箱中取出Matrigel基质胶,将其置于4℃冰箱待其融化。(2) 铺胶:取250 μl/孔Matrigel基质胶加入24孔板中,加入时避免产生气泡,置于细胞培养箱中60min待其凝固。(3) 加入1ml 含EDTA的胰酶消化细胞,待消化完全后,加入含血清培养液终止消化,计数后用培养基重悬细胞并调整细胞密度为2-3×105

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 siRNA/shRNA/miRNA/DNA转染细胞实验步骤(以6孔板为例) 66天前

    细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。主要包括:电穿孔法、显微注射、基因、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、病毒介导的转染等,理想的转染方法是具有高转染效率、对细胞毒性作用小等。其中脂质体转染是常用的简便转染方法。脂质体(liposome)转染方法的原理在于,阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹,形成DNA-脂复合体,被表面带负电荷的细胞膜吸附。再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔通过直接渗透作用,将DNA转运至细胞内,形成包涵体或进入溶酶体。当DNA从包涵体内释放后,进入细胞质,再进一步进入核内实现转录、表达。siRNA/shRNA/miRNA/DNA转染细胞实验步骤(以6孔板为例)1、转染前一天接种细胞于6孔板,5×104每孔,第二天转

  • 病理形态
    病理形态  发布了新帖 细胞划痕实验介绍及实验步骤 67天前

    一、实验简介细胞划痕(修复)法是一种简捷的测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央的细胞,然后继续培养细胞至设定时间(采用无血清或低血清(<2%)排除细胞增殖的影响),取出培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力。通常设定正常对照组与实验组,实验组中添加某些处理因素或药物、外源性基因等,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,判断比较各组细胞的迁移与修复能力。二、细胞划痕实验步骤(1) 先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。   (2

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    病理形态  发布了新帖 分子病理检测在肿瘤个性化治疗意义 67天前

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    病理形态  发布了新帖 石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤 68天前

    石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15-20min-二甲苯Ⅱ15-20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗(冬天脱蜡时间稍微延长)。2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K储存液用PBS 1:9稀释)覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。3、 破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,

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