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【专题讨论】有关Akt和p-Akt的Western Blot 结果分析与讨论

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【原创】real-time PCR结果分析及讨论

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【招聘】招聘实验室负责人

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  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤 18小时前

    石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15-20min-二甲苯Ⅱ15-20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗(冬天脱蜡时间稍微延长)。2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K储存液用PBS 1:9稀释)覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。3、 破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 细胞感染实验步骤(以慢病毒感染为例) 1天前

    细胞感染是指通过病毒载体将外源分子导入真核细胞。因病毒可以通过自身的侵袭作用进入宿主细胞后,可以利用细胞中的物质和能量以及复制、转录和转译的能力,按照自身核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。利用这种特性,去掉病毒的致毒基因并将外源基因片段插入制成病毒载体,进而将目的片段转入受体细胞,使目的基因可以表达,甚至将基因遗传给后代稳定的表达。目前常见用于转染的病毒有,慢病毒,逆转录病毒,腺病毒等。细胞感染实验步骤1、转染前一天,取2-3×105cells/well的细胞接种在6孔板上,培养24h后将原有培养基弃去,加入2mL的细胞完全培养基。2、置于CO2浓度为5%的培养箱中于37℃培养至细胞汇合达到40-60%。3、细胞换液,将病毒液与终浓度5μg/ml polybrene加入新鲜培养基

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 细胞克隆形成实验 1天前

    1、实验简介当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,称为集落或者克隆。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。因此克隆形成率也反映细胞群体依赖性和增殖能力这两个重要形状。细胞克隆形成可以通过平板克隆形成及软琼脂克隆形成两种方式实现,前者适用于贴壁生长的细胞,后者适用于非锚定着依赖性生长的悬浮细胞,如骨髓造血干细胞、悬浮肿瘤细胞等。2、实验步骤(1) 细胞悬液制备:取对数生长期的单层培养细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,离心后用完全培养基重悬,制成细胞悬液。(2) 细胞种板:将细胞悬液作梯度倍数稀释,以每皿5

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 番红固绿染色(骨组织)染色步骤 2天前

    番红-固绿染色(软骨)在涉及关节软骨及软骨下骨的形态学研究中,常需要联合使用多种染料以显示其组织学结构。其中,起源于上世纪60年代的番红O(safranin O)-固绿(fast green)染色因可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构而备受青睐。软骨呈红色,成骨呈绿色。一、染色步骤:1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、固绿染色:切片入固绿染液5-10min,水洗去多余染液,至软骨呈无色,分化液稍浸泡,自来水稍洗。3、番红染色:切片入番红染液15-30s,三缸无水乙醇快速脱水。4、透明封片:干净的二甲苯透明5min,中性树胶封片。5、显微镜镜检,图像采集分析。二、染色结果软

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 组织芯片应用领域及优势 2天前

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  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 Transwell 细胞侵袭实验步骤 2天前

    实验步骤1、配制结晶紫染液: 取结晶紫0.05g溶于甲醇制成0.5%的结晶紫溶液,用时用PBS溶液1:5-8成0.1%的结晶紫染液。2、transwell侵袭孔的制备:将BD matrigel和 无血清培养基以1:8的比例稀释,吸取80μl加入transwell的上室中,放置于培养箱中至少3、细胞离心:将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成5×105个/ml 的细胞悬液。4、下室加培养基:Transwell板中加入500μl 含20% FBS的完全培养基,将小室放入板中。5、上室接种细胞:在transwell小室中加入200μl 的细胞悬液,将Transwell板37℃下于CO2 (含量5%)培养箱中培养48h。

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 TUNEL实验原理及实验步骤 3天前

    一、实验原理:细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下结合荧光素 (FITC) 标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。二、实验步骤:1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。(冬天应该适当延长脱蜡时间)2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织,37度温箱孵育25min。将玻

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 荧光定量PCR实验流程及结果展示 3天前

    一、实验原理荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。二、实验流程1、样本接收:组织、细胞、血液、其它2、实验检测:引物设计、合成组织匀浆-RNA提取-RNA浓度测定—逆转录—荧光定量PCR-数据分析3、数据整理:完整项目报告(扩增曲线、数据分析、引物信息、实验报告)三、实验结果武汉赛维尔生物科技公司专业提供病理检测实验、动物实验、细胞实验、HE染色、免疫组化、分子与蛋白检测实验外包服务,欢迎您前来咨询。

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 CCK-8实验步骤及实验注意事项说明 3天前

    一、实验原理活细胞中的脱氢酶能与CCK-8反应形成蓝色或黄色甲瓒化合物。甲瓒化合物的量与活细胞的数量成正比。通过酶标仪读取吸光值。细胞增殖越多越快,则吸光值越高;细胞毒性越大,则吸光值越低。可以计算细胞存活率、增殖率、抑制率,反应细胞增殖,药物对细胞的毒性等。CCK-8的应用范围包括:细胞生长曲线绘制,药物筛选,细胞增殖测定,细胞毒性测定,肿瘤药敏试验。二、实验步骤1、细胞种板:将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化,配制成细胞悬液,每孔加入100 μl,使每孔细胞密度1000-5000个,边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2,37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。3、处理结束后,每个孔中分别加入10 μl CCK-8溶液,轻

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 双荧光素酶报告基因实验 5天前

    报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。本实验采用荧火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)和海肾荧光素酶(Rellina Luciferase)组成双荧光素酶报告基因实验系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通过加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应过程中会发出生物荧光,然后可以通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物荧光,从而比较不同组间基因表达的差异。 一、实验流程(1) 重组质粒

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 Transwell细胞迁移实验步骤 5天前

    常用8.0、12.0μm孔径的膜,上室种细胞(一般为肿瘤细胞),下室加入FBS或者某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室迁移。对进入下室的细胞进行计数可反映肿瘤细胞的迁移能力。Transwell 细胞迁移实验步骤(1) 配制结晶紫染液: 取结晶紫0.05g溶于甲醇制成0.5%的结晶紫溶液,用时用PBS溶液1:5稀释成0.1%的结晶紫染液。(2) 细胞离心:将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成1×105个/ml的细胞悬液。(3) 下室加培养基:Transwell板中加入500μl 含20% FBS的完全培养基,将小室放入板中。(4) 上室接种细胞:在transwell小室中加入200μl 的细胞悬液,将Transwell板37℃下于

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 解析植物番红固绿染色染色步骤 6天前

    一、染色机制:植物组织番红O-固绿染色液中,番红O可使根,茎,叶,花,果实,种子等组织切片染色后细胞核,木质化细胞壁呈鲜红色,角质化细胞壁呈透明粉红色,木栓化细胞壁呈红褐色;固绿使细胞质和含有纤维素的细胞壁呈蓝绿色。其中番红是碱性染料,固绿是酸性染料。二、染色应用:该试剂仅用于科研领域,不用于临床诊断或治疗。三、染色步骤:1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、番红染色:切片入番红染液中染色1-2h,自来水稍洗,洗去多余染料即可。3、脱色:切片依次入50%、70%、80%梯度酒精中各3-8s。4、固绿染色:切片入固绿染液中染色30-60s,无水乙醇三缸脱水。5、透明封片:切片入干净的

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 MTT实验步骤及结果分析 6天前

    一、实验原理MTT比色法是检测细胞存活与生长的一种常用方法,广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。其病例检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝色甲瓒并沉积在细胞汇总,而死细胞无此作用。在特定统计DMSO存在的情况下,不溶的甲瓒沉积物被完全溶解。然后通过酶标仪检测570nm波长处的吸光值。细胞增殖越多越快,则吸光值越高;细胞毒性越大,则吸光值越低。二、实验步骤1、细胞种板:将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化,配制成细胞悬液,每孔加入100 μl,使每孔细胞密度1000-5000个,边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2,37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。2、按实验方案进行加药处理,每个样本浓度设4~6个重复。3、MTT反应:所有孔中分别加入20μl MTT溶液(

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 肠道组织三维重构实验说明 7天前

     一个蜡块连续切片50张以上全部做染色或组化或荧光,然后把所有切片进行扫描,用3D重构软件对扫描文件进行三维重构,这就是组织三维重构。以下为部分组织的重构效果:肠道组织脊髓局部实验流程:切片---染色---扫描成像---三维重构。切片所需要超过50张。收费标准:1000元/次,不限切片数量,不含重建前实验费用。注:1、武汉赛维尔生物科技有限公司为所有客户均可免费进行三维重构,不限标本数量与次数,不含重建前实验费用。        2、本活动截止至2019年2月1日止。武汉赛维尔生物科技公司专业提供病理检测实验、动物实验、细胞实验、HE染色、免疫组化、分子与蛋白检测实验外包服务。

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 石蜡包埋实验步骤及注意事项 7天前

    一、实验介绍:新鲜组织经过固定取材脱水透明浸蜡后用特定的包埋模具将前期处理的组织块与融化的石蜡一起包埋成组织蜡块的过程称为组织取材包埋。二、实验流程: 1、样本接收:固定好的组织2、实验步骤:取材-脱水-透明-浸蜡-包埋3、实验结果:组织蜡块三、注意事项:1、新鲜组织尽快放入固定液固定2、固定液的体积至少是固定组织体积的10倍3、组织取材厚度1-3mm四、结果展示:想了解更多关于石蜡切片、石蜡包埋、免疫组化等相关信息可与武汉赛维尔生物科技公司联系

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 HE染色应用及实验步骤说明 7天前

    一、染色机制:易于被碱性或酸性染料着色的性质分别被称为嗜碱性和嗜酸性,而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。伊红是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 关于石蜡切片免疫组化的实验流程 8天前

    一、实验介绍:石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。二、实验流程: 1、样本接收:组织蜡块2、实验步骤:将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片,厚3-4μm。切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 细胞实验中细胞传代、复苏及冻存操作详解 8天前

    细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。对于生物医学方向的基础研究、药物研发等,细胞培养是一项必不可少的技术。细胞培养的基本操作包括细胞复苏、细胞传代及细胞冻存。细胞传代是指去除原培养基,将细胞从原培养体系转移到新鲜的生长培养基中,目的是使细胞得到进一步增殖。细胞传代在对数生长末期时进行,理想的传代频率是1:2~1:4传代,接种密度104~105 cell/ml,每7天传代一次。细胞冻存及复苏是细胞培养中的常规操作,其基本原则是慢冻速融,以便最大限度保存细胞活力。在细胞冻存和复苏过程中,对细胞伤害最大的是冰晶,因此最重要的是要减少冰晶的形成。目前实验室细胞冻存多采用二甲亚砜(DMSO)作为低温保护剂

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 Anti -PCNA Rabbit pAb 9天前

    Product InformationDescription:  PCNA rabbit polyclonalProtein full name:  Proliferating cell nuclear antigenSynonyms: PCNA, ATLD2, proliferating cell nuclear antigenImmunogen: KLH conjugated Synthetic peptide corresponding to Mouse PCNA Isotype: IgGPredicted MW: 33 kDaObserved MW: 33 kDaPurity: Affinity purificationUniprot

  • zhz0477
    zhz0477  发布了新帖 Mitogen-activated protein kinase 14 9天前

    Product InformationDescription:  P38 MAPK rabbit polyclonalProtein full name:  Mitogen-activated protein kinase 14Synonyms:  MAPK14, CSBP, CSBP1, CSBP2, CSPB1, EXIP, Mxi2,PRKM14,PRKM15, RK, SAPK2A,p38,p38ALPHA, mitogen-activated protein kinase 14Immunogen:  KLH conjugated Synthetic peptide corresponding to Mouse P

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