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    zbxkg  发布了新帖 新型核酸分子荧光探针——分子信标的原理及应用 1501天前

    分子信标(molecular beacon)是一种具有发夹结构的新型荧光标记核酸探针,具有高灵敏度、高特异型,其在聚合酶链反应(PCR)、核酸序列的分析、活细胞内核酸的动态检测、蛋白质(酶)与核酸的相互作用等方面具有广泛的应用。 分子信标的结构 分子信标的结构一般包括三个部分:...

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    zbxkg  发布了新帖 细胞冻存的7个注意事项 1501天前

    、细胞冻存 方法: 冻存液最好现配:按1:3:6(或1:2:7) 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理, 对于贴壁细胞: 1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次 2胰酶消化 3加培养基中止消化,有的细胞是...

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    zbxkg  发布了新帖 细胞转染应该什么时候加抗生素? 1511天前

     细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中,在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转...

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    zbxkg  回复了帖子 各大公司推荐慢病毒包装时各质粒用量不同,如何选择 1511天前
    1.采用EnvirusTM-LV增强后,感染时的细胞融合度对感染效果有影响,建议细胞融合度在50%左右时进行感染实验(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.确定了细胞量以后,建议采用倍比稀释的方法,用不同量的慢病毒(MOI值:1-100pfu/cell)进行实验...
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    zbxkg  回复了帖子 安全有效的EB替代品 1512天前
    EB,即溴化乙锭。EB属于核酸分子嵌入剂,早年间常用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料。EB本身在紫外下不发光,能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。因其廉价且灵敏度高,一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。 想当年,我们实验室用的核酸染料还是EB呢。现在实验室小朋友...
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    zbxkg  回复了帖子 EB替代物 1512天前
    EB,即溴化乙锭。EB属于核酸分子嵌入剂,早年间常用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料。EB本身在紫外下不发光,能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。因其廉价且灵敏度高,一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。 想当年,我们实验室用的核酸染料还是EB呢。现在实验室小朋友...
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    zbxkg  回复了帖子 为什么酶切后的电泳条带歪歪扭扭的? 1512天前
    聚丙烯酰胺凝胶(PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG...
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    zbxkg  回复了帖子 核酸电泳 1512天前
    聚丙烯酰胺凝胶(PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG...
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    zbxkg  回复了帖子 电泳问题交流 1512天前
    聚丙烯酰胺凝胶(PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG...
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    zbxkg  回复了帖子 求电泳结果怎么样啊? 1512天前
    聚丙烯酰胺凝胶(PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG...
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    zbxkg  发布了新帖 RNA提取原理 1513天前

    RNA提取原理 RNA提取时,加氯仿后分三层:水相(含rna,可能还有少量DNA),中间白色薄层(应该是蛋白和DNA),下层有机相(氯仿和蛋白等) 氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从...

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    zbxkg  回复了帖子 RNA提取 1513天前
    RNA提取原理 RNA提取时,加氯仿后分三层:水相(含rna,可能还有少量DNA),中间白色薄层(应该是蛋白和DNA),下层有机相(氯仿和蛋白等) 氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从...
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    zbxkg  回复了帖子 组织提取DNA,求助 1513天前
    碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加...
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    zbxkg  回复了帖子 shRNA和siRNA有啥区别? 1517天前
    如果你想这方面的实验的话,建议你用英格恩的试剂,我们实验室之前用的试剂可贵还不出效果,后来别的同学推荐的英格恩的花费便宜效果还挺好,现在一直都在用真的
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    zbxkg  发布了新帖 实验动物各种体液、骨髓的采集方法 1518天前

    一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中, 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液,此法非常简单,但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液,要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外,即以腮腺导管为中心,切成一直径约2...

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    zbxkg  回复了帖子 PCR产物电泳时泳道拖尾如何解决? 1520天前
    PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是: (1) 模板不纯:纯化模板 (2) Buffer不合适:更换Buffer (3) 退火温度偏低:适当提高退火温度 (4) 酶量过多:适量用酶,或调换另一种酶 (5) dN...
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    zbxkg  回复了帖子 电泳出现了拖尾,求原因 1520天前
    PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是: (1) 模板不纯:纯化模板 (2) Buffer不合适:更换Buffer (3) 退火温度偏低:适当提高退火温度 (4) 酶量过多:适量用酶,或调换另一种酶 (5) dN...
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    zbxkg  回复了帖子 电泳拖尾 1520天前
    PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是: (1) 模板不纯:纯化模板 (2) Buffer不合适:更换Buffer (3) 退火温度偏低:适当提高退火温度 (4) 酶量过多:适量用酶,或调换另一种酶 (5) dN...
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    zbxkg  回复了帖子 琼脂糖凝胶电泳拖尾如何解决 1520天前
    PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是: (1) 模板不纯:纯化模板 (2) Buffer不合适:更换Buffer (3) 退火温度偏低:适当提高退火温度 (4) 酶量过多:适量用酶,或调换另一种酶 (5) dN...
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    zbxkg  发布了新帖 磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤 1520天前

    前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 ...

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