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    ysjin  发布了新帖 非编码RNA——国自然基金中的热点研究,你该如何出彩? 5天前

    非编码RNA(miRNA、lncRNA、circRNA等)虽然不参与蛋白编码,不能直接行使功能,但是它可以通过多样化的调控方式参与众多的通路和生物过程,成为生物医药领域非常重要的一种调控分子。但是LncRNA相对于编码基因难做,原因众多,有的认为目前的LncRNA数据库是残缺的,注释不全面,且很多没有全长信息等等,这些极大限制了我们科研的想象力;好不容易找到一个跟临床问题紧密相关且信息比较全面的LncRNA,又突然发现该LncRNA定位于细胞核,这就意味着想要效仿编码基因的RNA沉默方式很难达到效果。种种的困难,使得LncRNA的研究更加珍贵,更有价值,这也是为什么历年来国自然对LncRNA的研究资助呈上升趋势。如果您也有LncRNA研究方面的问题,并想了解更过关于“非编码RNA的热点研究“

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    ysjin  发布了新帖 盘点∣∣∣慢病毒、腺病毒和AAV在动物不同组织系统中注射参数和参考文献 57天前

    由于动物实验更能模拟人类的生理和病理条件,所以在科研上,其实验结果比体外实验更具有说服力。在某个通路或某种疾病的研究中,通常会人为地将外源基因用病毒载体注入动物组织,检测其对其他基因和通路、组织器官、动物行为等的影响。但这类动物实验条件的摸索和优化,是一个难点。如何选择注射的部位、选择何种病毒、注射多少体积、以及注射后什么时间去检测等实验条件都需要摸索。在实际应用中,可根据实验目的来挑选合适的工具病毒,如:(1)工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;(2)工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;(3)工具载体对在体组织的转导是否足够高效。AAV 病毒的体积最小,因此载体的容量最小,但是正因为其体积小的特点,AAV 病毒的扩散效果好,病毒滴度高,因此,在载体容量、观察时间可以满足

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    ysjin  发布了新帖 慢病毒的纯化和浓度 69天前

    慢病毒是逆转录病毒的一种,基因组为双链RNA。不但可感染分裂或非分裂细胞,还可将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达,又很少引发机体免疫反应。被誉为“细胞实验首选、体内实验必备”工具病毒。具有感染能力强、表达时间长、安全性高、免疫原性低的优势,并且作为基因载体在治疗各类遗传性和后天性的人类疾病中倍受欢迎。慢病毒在包装和应用过程中,您可能会遇到这样的问题。慢病毒滴度检测的方法有哪些?慢病毒浓缩纯化的方法有哪些?慢病毒纯化工艺,依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是有以上方法的一种或几种方法组合在一起完成。对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说我们推荐超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞

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    ysjin  发布了新帖 慢病毒使用过程中常见问题 82天前

    1.什么是 MOI?MOI,复感染指数, 是病毒对细胞的能力,MOI越高,细胞难被感染。通常把某株细胞有 80%被感染时所用的 病毒颗粒数和细胞目比值作为该株被感染时所用的MOI 。2. 如何确定向细胞中加入慢病毒的最佳时间? 慢病毒感染细胞后需要4天的时间才能观察到慢病毒携带的基因表达,应在细胞汇合度20~40%时且细胞状态良好时加入慢病毒,确保在感染后4天时细胞增长达到90%~100%的汇合度。3. 用于慢病毒感染的细胞接种量是多少? 根据细胞增殖的速度调整接种量,以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。针对大部分细胞系:传代周期在2-3天,感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右,则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右;针对某些原代细胞:由于细胞增

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    ysjin  发布了新帖 启动子的选择和预测 84天前

    启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特性。常规启动子以二型为主,核心序列包含TATA box和CAAT box,这两部分组成的序列含有基础转录活性,也就是具备启动子特征,但是表达水平很低,此序列紧挨着转录起始位点TSS,一般位于编码基因5UTR(不是ATG哦)上游的300bp之内。 研究启动子,其实不是研究核心启动子,而是研究启动子在细胞不同状态下表达活性的差异性,这种差异由启动子临近基序调控,研究较多的是增强子、甲基化、转录因子,这些基序位于核心启动子上游居多,所以,常规取包含核心启动子及其上游共计2kb进行研究。根据启动子的转录模式可以将其分为 3 类:组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子。&n

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    ysjin  回复了帖子 腺相关病毒aav2/8 105天前
    aav2/8是2种血清型,并且应用的组织不同。aav2主要靶向感染肝脏、骨骼肌、神经和眼部组织;aav8主要靶向感染肝脏、骨骼肌、胰腺、神经和眼部组织;吉凯基因提供的有AAV彩虹装:适合不同组织的常用血清型套装,1次实验筛选最佳血清型!血清型:1/2/5/6/8/9/DJ/Retro/PHP.eB/PHP.S
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    ysjin  回复了帖子 大家好,咨询逆转录病毒病毒包装问题 105天前
    吉凯基因提供的有悬浮细胞专用的逆转录病毒,可以了解一下http://dxy.me/fXFwiL
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    ysjin  回复了帖子 腺病毒,腺相关病毒,慢病毒的区别和适用范围 105天前
    您可以看看这篇帖子“慢病毒、腺病毒和腺相关病毒(AAV)的区别和应用选择 ”http://dxy.me/JLaTEO
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    ysjin  回复了帖子 慢病毒转染细胞的操作步骤 112天前
    推荐慢病毒使用操作手册内容全面,实用性强慢病毒颗粒使用操作手册.pdf
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    ysjin  发布了新帖 慢病毒、腺病毒和腺相关病毒(AAV)的区别和应用选择 137天前

    慢病毒(Lentivirus)        是逆转录病毒的一种,基因组为双链 RNA。但区别于一般的逆转录病毒,慢病毒具有更广的宿主范围,对分裂细胞和 非分裂细胞均具有感染能力。腺病毒(Adenovirus)        是一种线性双链DNA无包膜病毒,对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力,且具有嗜上皮细胞性。腺相关病毒 ( adeno-associated virus,AAV)         是一类细小病毒,基因组为单链 DNA,对分

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    ysjin  回复了帖子 每月细胞版风云战友奖励专用帖 137天前
    二月再接再励!
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    ysjin  的帖子被加了1分 144天前

    慢病毒感染细胞步骤

    以24孔培养板,贴壁细胞为例Day0: 接种细胞         每孔按5×104个待感染细胞铺板,用含有 10% FBS的DMEM培养基培养;Day1: 细胞感染  &...
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    ysjin  回复了帖子 慢病毒感染细胞步骤 144天前
    完全培养基(Complete medium)是一种在基本培养基内加入生长因子(如血清、抗生素等)而制成的各种营养基,可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要。
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    ysjin  发布了新帖 如何解决悬浮细胞难感染的问题? 145天前

    一般的悬浮细胞         对于悬浮细胞,可采用离心感染方法提高感染效率。如将细胞培养板密封后,用平角转子离心机1000g离心1h,再放回培养箱中正常培养。悬浮细胞专用感染增强液        HiTransB-1:可促进病毒高效感染细胞,且对细胞毒性极低;        HiTransB-2:在 HiTransB-1 基础上添加一种阳离子聚合物,通过抑制细胞膜与病毒间的电荷排斥,显著增加病毒对细胞的感染效率。悬浮细胞专用病毒系列产品&nbs

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    ysjin  发布了新帖 慢病毒感染细胞步骤 145天前

    以24孔培养板,贴壁细胞为例Day0: 接种细胞         每孔按5×104个待感染细胞铺板,用含有 10% FBS的DMEM培养基培养;Day1: 细胞感染         感染前,根据说明书用完全培养基配置感染 液,备用 吸掉旧培养基,更换为感染液; 并参考细胞 MOI值,计算病毒使用量,加入病毒进行感 染,混匀;Day2         病毒感染8-16h后,换回常规培养基,继续 培养;Day3-4: 确

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    ysjin  回复了帖子 细胞划痕全流程怎么做? 390天前
    同问
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    ysjin  回复了帖子 丁香公开课开年献礼: 丁香园创始人李天天《如何做好英文会议报告》三期联播 1238天前
    丁香园通讯员 进入页面:http://dxy.me/AfA7fq 就可以观看所有公开课哦。 标记中,编辑有误。
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    ysjin  加入了调查派 1250天前
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