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报考二医硕博研究生的看过来

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【原创】上海交大英语考的如何,进来说说

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  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 求助。。。双荧光素酶报告的问题 12天前
    很正常啊,就是做比值啊。你的问题在哪里啊,直接用ratio做比较就行了呀
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 想验证混合物中哪个成分与目的蛋白结合,该用什么技术 27天前
    混合物是什么,是多肽还是化学分子物?如果是化学小分子物的话,可以pull down蛋白然后打质谱分析。如果是多肽的话其实也可以,不过也有其他做法。目的蛋白又是什么?是膜受体?转录因子?都不是?
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 开贴回复质谱-蛋白质组学相关问题 29天前
    感谢楼主最近我们也在做IP-MASS SPECH。由于初次尝试,core里给的protocol也不是特别精细,就直接煮了beads,把洗脱液送过去了,后来我查了一下,这样做会影响检测结果,因为里面混了大量的抗体,不知道影响多大。另外,由于我们细胞长的慢,10cm盘的蛋白总量只有不到1mg,做好IP后跑电泳,发现考蓝只能染到重链,这种情况如果看不到考蓝上色的话是不是蛋白量太低了。多谢回复。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 有关GFP 表达 29天前
    加KOZAK序列了吗,加终止密码了吗,有无移码突变?另外,很早听人说有些启动子,如CMV在某些细胞系里会沉默,我没有碰到过,不知道你是不是这个问题,换一个细胞系试试。这种可能性比较小。我觉的还是序列本身的问题,移码的可能性比较大。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 质粒突然不表达 30天前
    是共转的GFP还是质粒自带GFP?如果是共转GFP来判断转染效率,这种方法非常不靠谱,因为GFP只有700bp大小,相对容易进入细胞,如果backbone也不一样,那就更加不好说了。你是什么细胞,除了293,其他的细胞系瞬转效率都很低,很多文章里动不动就说百分之几十的转染效率,都是假的。你如果转染效率只有5%不到的话,看不到差异也正常。你应该拿293细胞转染来测试你的质粒。其他细胞的话,只有病毒,别无他法。
  • yourpartner45
    yourpartner45  的帖子被加了1分 56天前

    回复:DH5α感受态细胞转化涂板菌体较小且密密麻麻是什么原因?

    黄zR 是孵育时间过长,导致细胞过多。半小时即可。时间过长用稀释涂布法,涂两个扳。不是的,做的多了你会发现半小时,1个小时没什么差别楼主这种情况90%可能性是杂菌,上面说的转化效率过高什么的都是非常小概率。不相信的话可以随意刮一点下来做colony PCR。浇板子的时候一定要等L...
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 DH5α感受态细胞转化涂板菌体较小且密密麻麻是什么原因? 59天前
    不是的,做的多了你会发现半小时,1个小时没什么差别楼主这种情况90%可能性是杂菌,上面说的转化效率过高什么的都是非常小概率浇板子的时候一定要等LB冷下来,尽量冷,最好是快到室温的时候加抗生素,特别是AMP.卡钠好很多,温度高一点加也无所谓。我碰到类似的事情一般是重新浇板,重新涂板,重新涂的时候适当稀释,百试不爽
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 有人用过NEB公司的phusion 高保真聚合酶吗? 79天前
    Phusion 都P不出来,其他的就算了,出来的也未必是真带子美国实验室,天天用,无敌的酶。PFU才真的是影子酶。楼上各位中国同行,买到的是真品吗?先确定一下
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 两个蛋白之间作用机制的实验设计 81天前
    什么可能性都有,你需要预实验支持。光设想一下可能性是不行的。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 急急急,PCR扩增弥散问题 81天前
    引物Tm值多少,phusion一般7Kb不用7分钟,4分钟足够了我觉的还是引物的问题。酶不要反复冻融。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 药物干预细胞,是采用百分之10的血清培养液,还是低血清培养液,还是无血清培养液? 85天前
    另外如果看48-72小时的长期效应,提前24小时的血清饥饿可做可不做,因为长期的累积效应很容易覆盖掉前期的饥饿拉平效应。个人一点经验。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 药物干预细胞,是采用百分之10的血清培养液,还是低血清培养液,还是无血清培养液? 85天前
    另外如果看48-72小时的长期效应,提前24小时的血清饥饿可做可不做,因为长期的累积效应很容易覆盖掉前期的饥饿拉平效应。个人一点经验。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 药物干预细胞,是采用百分之10的血清培养液,还是低血清培养液,还是无血清培养液? 85天前
    如果是看急性效应,比如加药以后看6小时内(包括几分钟内),我建议全程无血清。如果是看长期效应,就要看细胞系,比如PANC-1,甚至293都是可以长期耐受无血清的,一般不加血清48小时内细胞没什么太明显变化。但有的细胞系,就不行,48小时不加血清,细胞大量凋亡,这种本身的凋亡效应大于药物干预效应。另外对于过表达稳转细胞,稳转本身消耗大量能量,长期没有血清细胞会凋亡明显,建议加血清。总的原则是要先保证细胞的基本生存,然后再谈干预。加不加血清,加多少血清都需要数据支持,我们一般是0%,1%,5%的血清下分别加药,比较3组的最终效果,选择一个条件并沿用这个条件进行其他实验,选择过程相关的数据放paper 的supplementary material。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 线性化的质粒、基因片段转入感受态细胞中能存活么 103天前
    如果你是用比如lipo转的,我认为对于线性和环状并无选择性,也就是说线性DNA应该和环状质粒有相同的机会转人感受态,第一步大家的机会是均等的关键是接下来,线性DNA很快就降解了,所以宿主细胞主动帮助我们进行了筛选。但是,这并不意味着线性DNA不能整合入宿主基因组,当然这是小概率事件,线性DNA在降解前如果整合入基因组,那宿主细胞就获得了抗性。楼主假阳性的结果,我个人觉得还是要先检查一下常规问题,transform这一步有没有杂菌污染,是不是vector切的不彻底,连的也不彻底。但总的说来,假阳性菌落的出现并不少见,大家都碰到过。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 在293T细胞用lipo3000转染质粒,进行慢病毒包装,为什么转染效率一直很低啊?求各位战友指教 110天前
    You can use lipo3000In fact, in our lab we always use lip3000.Usually the bigger plasmid the lower transfection efficiency. 50% is OK for your further experiments I think. Go ahead.
  • yourpartner45
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 Q-pcr 验证CIRC rna 芯片结果 求指教? 117天前
    q-pcr只忠于技术层面,如果你能确定你的引物没问题,哪怕只有一次是确定的,就不用怀疑引物的问题。扩增不稳定主要来源于你的target gene表达量太低,或者病人标本收取过程不够稳定,或者提取过程不够稳定。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 关于Qpcr溶解扩增曲线的问题 132天前
    楼上说的有道理,不知道楼主扩的什么基因,CT值多少,不过从溶解曲线来看有效模板浓度低的可能性不大。单峰还可以,不太像模板浓度低或者表达过低引物扩增产物长度多少,太长的话也到不了平台期,建议不要超过300bp
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 做q-rtpcr 发现组织内参不齐,验证下来基因趋势和芯片结果是相反的,请各位大神指教…… 157天前
    以qPCR为准,如果你的qPCR没问题的话,先看看melt curve是不是单峰以我的经验,芯片非常不靠谱,只能作为线索大致看一下
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 求助~救救孩子吧 160天前
    这很正常啊。因为你的引物是跨外显子的,基因组扩不出,但是cDNA可以扩出来这标题起的,以为是求医来的.另外,你怎么知道你RT获得的条带是你的目的条带?测序了?如果RT是非特异性的产物,也许你的sample里根本没有病毒. 这就是科研,以为跑个PCR就可以发文章的人太多

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