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报考二医硕博研究生的看过来

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【原创】上海交大英语考的如何,进来说说

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  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 2020中国医生薪酬报告出炉!各地平均薪酬是......这里教你医生涨薪秘技! 20天前
    如果一心想赚钱,有很多更好的途径在上海,你不需要大门面,就租个临街甚至弄堂里的房子,就中午卖卖盒饭,如果能把周围写字楼的生意拉一些进来你一个月都不只4-5万的收入,我有认识的朋友就搞这个。但是真的让你去干这个你去吗?你到底想要什么,真的想明白了吗
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 gRNA碱基个数 40天前
    gRNA在细胞里之所以稳定,其空间构向的局部双链结构只是一方面,更重要的是cas9一旦结合上去,对gRNA会起到非常大的保护作用。想要gRNA变得更稳定的办法也有很多,世界上有些实验室专门做这个,我们也做过一些。回到你刚才的帖子,cas9结合不到的部分会被降解,这个说法确实有点道理,但是有个逻辑在里面,就是cas9要先结合上去,那么首先要保证gRNA的3'端的折叠是正确的,如果这一点不能保证,gRNA整条链都会被降解,不是露出来不露出来的问题
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 gRNA碱基个数 40天前
    按照你的说法,长的话只是会降解掉,不影响敲除效率对吧。事实不是这样的,RNA的正确折叠是完全不同于双链DNA或者蛋白的。cas9想要成功结合gRNA,有赖于其3'端的正确构向,而这个构向是受整个RNA链的长度和组成影响的,可以这么说,5'端越长,3'端的正确折叠率越低,换言之,cas9的结合越困难
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 过表达质粒失效 69天前
    flag是融合上去的啊,基因移码但flag正常表达,基本不可能的事情。这个你都不懂吗?他因为是稳转后做的western ,flag及附近序列发生了部分融合倒是有可能,但他用flag抗体得到的靶蛋白的大小是对的,所以可能性很小,通过N端设计引物跑PCR可以鉴别
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 p53 wb请教 88天前
    但总得说来想要P53这样的因子发生变化比较难
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 p53 wb请教 88天前
    如果非想盯住p53的话, 首先可以尝试一下磷酸化P53,另外染色可以看看p53的核浆转位,如果是蛋白水平调控的话可以看看是不是cofacter 结合出了问题。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 p53 wb请教 88天前
    qPCR有差异蛋白水平就应该有差异吗?我们不知道碰到多少次RNA水平有差异但蛋白水平没差异的,转录水平和翻译水平差的远着呢。P53是那么重要的因子,表达水平又高,又不是什么稀奇古怪的蛋白,做不出差异就是没差异,要客观,不能编故事。我们一般就做两次western ,没差异就是没差异了。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 p53 wb请教 88天前
    很难理解,为什么就必须有差异
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 Prime editing:一种为CRISPR编辑增添精确性和灵活性的新技术 111天前
    真的很巧妙,等下看一下全文提两点小问题1. 整体技术还是基于Crispr/cas9, 且不说对PAM的依赖性,有的基因1KB内都找不到一个特异性很好的PAM位点,找不到好的PAM就面临offtarget 的问题。关键逆转录酶的保真性问题在此方法中更加需要严肃对待了,否则在修复的同时又引入新的突变。2. 改良的gRNA比原来的要长,RNA的折叠不同于蛋白,我没有测试它的二级结构,但估计应该不是文中画出来的样子,RNA模板部分有可能无法正常游离出来与DNA互补结合
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 ChlP实验是可以证明某个转录因子可与其靶基因的启动子发生特异性结合吗? 119天前
    那你就把你认为的整个启动子区分成若干段,CHIP后将这些段分别做PCR,可以相对得到你要的结论。转录因子在启动子区的结合大多数并不是一个位点,这个你知道吗?
  • yourpartner45
    yourpartner45  发布了新帖 有做过质谱分析的请指点一下 119天前

    因为需要寻找未知作用因子,需要IP后送质谱分析。IP的环节应该是没问题,因为经常做,很熟练质谱分析的环节一直出问题,最近送的样本,IP本身的源蛋白也检测 不出来,结果里都是一些角质蛋白或者核糖体蛋白。不知道哪位有质谱样本准备的经验,请指点一下问题出在哪里。多谢。

  • yourpartner45
    yourpartner45  的帖子被加了1分 122天前

    回复:求助,长链非编码RNA(LncRNA)对蛋白亚硝基化的调控用什么实验方法?

    谢谢邀请1.过表达LNC然后检测相关蛋白的亚硝基化2.敲降LNC,或者mutate后再检测相关蛋白的亚硝基化
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 中国412篇论文或来自一家“论文工厂”!波及几十家医院,数十家三甲 133天前
    为Biomedicine & Pharmacotherapy审过两篇文章,一篇是西安某医院感染科还是病理科主任,有点忘记了,另外一篇是广州某三甲医院的生殖医学科主任,都是做microRNA的,整体研究思路惊人相似,先是拿病人组织做qPCR看和某microRNA的关联性,然后预测和验证下游靶基因,数据排版都非常相似,连western 胶的裁剪都很相似,不同的是研究的器官不同。我让他们提供原始western 图,都可以提供,让他们补复杂一些的实验,他们都以各种理由搪塞。最后还是通过了让他们发表了。真真假假还是让时间去检验把
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 挑克隆能摇出菌但是提不出质粒 147天前
    是慢病毒质粒吗?是的话会经常碰到小抽得率低的现象
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 求助:sgRNA位置选择 153天前
    我个人的原则是,除非你现在的课题非常有价值,达到10分以上的LEVEL,分子机制也需要做的非常深,否则就不要动不动就尝试这种复杂的实验设计,因为很多情况下,简单的过表达就能回答你的问题。劳民伤财的事情优先级要放低。像你这种新手,整个研究生阶段的大部分时间都会耗到敲入模型建立上,而最后的数据又意义不一定大。
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 求助:sgRNA位置选择 153天前
    内源性基因敲入GFP 或者tag还是有点麻烦的,需要经验和一定的技术积累,特别需要当心的是你插入的序列有可能被再次敲除,设计同源重组臂的时候要很小心无论在5'或者3'都是可以敲入的,但是你需要一段合适的linker,从而不干扰内源蛋白的折叠和空间构象。另外,你需要合适的筛选marker一起敲入,当然怕影响功能的话可以加loxp,在拿到稳定株以后将marker去除。敲入tag的目的是为了定位蛋白或者没有好的抗体,所以一般不加IRES,因为一旦加了IRES,敲入的目的就达不到了。整个过程还是蛮考验分子生物学技术的,包括插入片段的整体设计
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 一个大龄土博士从出国到海外行医 ---- 如果我行,你也可以 161天前
    请问这个gap的说法是只有澳洲有吗?因为美国这里我很多同学光备考就有3-5年的,最长的一个考了8年多,现在在美国纽约的长老会医院工作。他们备考期间都不接触临床的呀,没听说有gap一说
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 US菜鸟的第一桶金----Post-doc fellowship 450K! 161天前
    恭喜楼主不过postdoc的grant就可以独立做PI了吗?我们这里如果是外来的必须是K99,如果是自己lab培养的至少要career development这种grant,postdoc的grant很多人都有的啊,你们那里就可以独立了?系里配钱吗?
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 lentiCRISPRV2连接问题 161天前
    lentiCRISPRV2我连过无数次,非常好连,不晓得你为什么这么困难
  • yourpartner45
    yourpartner45  回复了帖子 长片段基因克隆表达问题求大神解答! 161天前
    4000左右BP不能算长片段啊,相对还是容易扩的。关键看引物的特异性如何。

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