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  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 求助western 31天前
    谢谢,不过我是磷酸化蛋白,只能用bsa
  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 快来帮帮我吧 32天前

    western新人,最近跑磷酸化cx43蛋白,分子量43kd。bca定量6到10ug每ul。图一是第一次跑,上样15ul,于是计划加大上样量到25ul,但是我每个ep管就是按20ul分装的,加上5ul的上样缓冲液以后总共就25ul,蛋白煮沸以后发现管底下有沉淀,为了上样够25ul所以把沉淀也一起加到泳道里,结果目的条带就跑的不好了,如图二。图三是把图二目的蛋白抗体洗脱以后跑的内参GAPDH。一抗二抗浓度应该没问题。积层60v40min 分离150v1h 湿转200mA90min一抗过夜,二抗2h。问题一是沉淀加到泳道里会影响目的蛋白的显影吗?如果影响但是我还是想让上样量加到25ul该怎么办?问题二是大家帮忙分析分析是不是因为泳道里有沉淀的原因,还是有别的其他原因,谢谢各位大神

  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 求助western 33天前

    各位师兄师姐,我western做的是磷酸化的cx43蛋白,分子量43。一抗是ab家的,比例是1比300昨天做出来如一,我优化了实验,把转膜从原来200mA 90min,改成了60V 2h,结果如图二,求各位大神的意见,觉得我还需要哪里改进一下,我上样从原来15ul改成了25ul。电泳60V 45min 150v 1h

  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 **HUVEC8000 sciencell公司的 39天前
    师姐丁香园每天聊天限制条数呢,我可以加您微信或者q吗,我想拜托您给我看看条带,谢谢啦
  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 求稀释方案 39天前

    如何把如图的edta溶液稀释成0.5mM呢?谢谢!

  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 做磷酸化蛋白的western blot之我见 41天前
    师兄,还有各位大神,希望你们帮帮我。我做的是磷酸化cx43蛋白,我bca定量是蛋白浓度6到10ug每ul。上样品15ul。一抗1比1000。第一次做出来的如图一,然后同学考虑是一抗浓度太低,我就加到了1比625,但是就出来图二了。今天做的1比2000,压根就没条带,现在也不知道该怎么办了。我封闭用的是百分之5的bsa,封闭2小时,一抗也过夜了,二抗1比2500室温2小时。洗膜都是7分钟✖️3次。曝光10分钟。图三是染过的膜,可以证明我电泳和转膜应该没问题。一抗的说明书就是推荐稀释1比1000,现在低于1000高于1000都试过了,可还是不行,求大家帮帮忙给点意见,谢谢啦
  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 求助啊,** 45天前
    太感谢您啦,我这就用牛奶跑跑
  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 求助啊,** 45天前
    请问磷酸化蛋白也可以用奶粉封闭吗
  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 求助啊,** 45天前
    师兄我今天打算一抗稀释到1500做一次,然后封闭从3小时变成2小时,一抗二抗洗膜都变成3✖️10min,原先都是3✖️5min。您看这样改进一下行吗
  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 求助啊,** 45天前

    各位师兄师姐,我western做的是磷酸化的cx43蛋白,一抗是ab家的,比例是1比1000昨天做出来如图一,然后我以为是一抗的问题,今天把一抗提高到了1比625,结果如图二,求各位大神的意见,我要崩溃了都

  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 试验小白求助各位大神 79天前
    请问大神您ripa pmsf 蛋白酶抑制剂,磷酸化酶抑制剂加的比例是多少
  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 试验小白求助各位大神 94天前
    您的意思就是大鼠静脉给药后,再到心脏取下,心脏研磨做we这个过程要很快是吗
  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 试验小白求助各位大神 98天前

    我今年研一,想用western法测磷酸化cx43蛋白ser368。请问已经做成功磷酸化蛋白的各位师兄师姐,我现在就差提取蛋白这一步了,请问提取蛋白的时候是不是需要加RAPA ,PMSF ,蛋白酶抑制,磷酸化酶抑制剂这四种,是不是缺一不可。谢谢了!

  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 帮忙分析一下心电图 152天前

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  • yangguang041103
    yangguang041103  发布了新帖 求助求助 303天前

    因为做基础实验,需要普萘洛尔注射液,和美托洛尔注射液,但是周围药店都没卖的,请问是否有买过的大神提供一下渠道

  • yangguang041103
  • yangguang041103
    yangguang041103  回复了帖子 纸样儿 541天前
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  • yangguang041103
    yangguang041103  : 有认证,有身份。我是医生,我通过了医师认证,拥有了专属身份标识和查看病例帖的特权,还得到了30丁当的奖励。你是医务工作者吗?一起来认证吧,首次通过医师认证还能免费获得价值99元的用药助手激活码http://dxy.me/MNZna2

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