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丁香客

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  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 求助 耳标打在了耳下皮上 16天前
    这只实验鼠体重日益下降,应该是伤口有炎症影响到了生活,已经提前处理了。
  • xrcheers
  • xrcheers
    xrcheers  发布了新帖 【求助】测肠道细菌总量的绝对定量pcr 标准品序列 16天前

    最近在准备做肠内容物细菌总量的测定,用的是绝对定量pcr。在准备标准品的时候遇到了一点问题想请教一下大家: 测总细菌用16s的pcr产物加质粒构建标准品可以吗?最近查到有的文献里用的是细菌16s通用引物27F某对,扩增产物的目的基因大约1500bp,测总菌是直接用这种1500bp左右的序列结合质粒吗?会不会太长了?也有文献里用的是大肠xl1 blue标准菌株的16s产物,我也在NCBI上查到了这个菌株的16s序列,大约是771bp,但是他的反向引物对应的序列我没有在这段771bp的序列里找到,怎么继续做呢?还要查这个序列吗?设计好的序列在公司结合了质粒后拿回来扩增和跑pcr用的又是什么序列呢?还是之前的序列吗? 对不起我实在是小白刚刚接触这一块实验问题太多了,拜托知道一点的哥哥姐姐们在下面回

  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 每月蛋白版风云战友奖励专用帖 44天前
    十月得票第七 谢谢版主~
  • xrcheers
    xrcheers  发布了新帖 求助 耳标打在了耳下皮上 55天前

    今天给小鼠打耳标,没抓稳耳标夹在了耳朵下方靠近腿的皮肉上,没出血,会不会有什么影响啊?有经历过类似的前辈吗?求助求指导~

  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 62天前
    嗯嗯好我调一下抗体浓度再试试
  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 62天前
    好我会再试试的
  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 63天前
    好的谢谢你~我再试试
  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 64天前
    skyhater1.上样量不均,从内参就能看出,建议检测总蛋白浓度后调节至相同用量如50ug; 2.可能与蛋白变性、凝胶质量、电泳条件、封闭条件、抗体特异性有关,建议调至相同浓度后变性,可进行80、120v电泳,室温封闭2-3h,降低一抗浓度(增加稀释倍数),可降低所用蛋白总量。嗯嗯 谢谢您我再改进一下试试
  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 65天前
    是新买的abcam抗体 之前也用的这个
  • xrcheers
    xrcheers  回复了帖子 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 68天前
    现在是60v 80v跑的 上样量差不多6ul 那可能是今天新配的一抗比例不太合适 谢谢你~
  • xrcheers
    xrcheers  发布了新帖 wb 条带分析 目的蛋白拖尾严 68天前

    做wb几周了 现在越做越难了 这是今天做的actin 条带还挺清晰的但是目的蛋白如下之前也有拖尾但是没有这么严重 看了之前前辈们的建议也没有用 这个怎么办呀求求知道的前辈们帮忙看一下 感谢感谢另外条带中间反白是因为什么呀 一抗浓度过高了吗

  • xrcheers
    xrcheers  发布了新帖 写meta时在cochrane搜到了相关meeting abstract 80天前

    我是准备写meta的研究生,在确定了选题后查询cochrane数据库搜到了一篇发表在Willy上的meeting abstract,但是因为还在做仅仅能查到abstract,搜不到原文。通过sci查询查到了其中两名靠后位置作者的联系方式,并没有搜到第一作者的信息。请问现在怎么办,放弃这篇abstract?还是有什么推荐方法可以找到这位作者?后续的文章?实在是新人,所以求助大家帮忙解答,谢谢。

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