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【原创】慢病毒方面需要帮助的,请进

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【原创】慢病毒方面需要帮助的,请进

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  • xeoium
    xeoium  的帖子被加了1分 1455天前

    回复:【求助】HIF-1慢病毒转染大鼠MSC转不进去 请各位指点一下啊

    您没有权限阅读该帖子
  • xeoium
    xeoium  : 有认证,有身份。我是医生,我通过了医师认证,拥有了专属身份标识和查看病例帖的特权,还得到了30丁当的奖励。你是医务工作者吗?一起来认证吧,首次通过医师认证还能免费获得价值99元的用药助手激活码http://dxy.me/MNZna2
  • xeoium
    xeoium  加入了调查派 1975天前
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 协和急诊医学(2011 高清版) 2040天前
    好东西,感谢分享,楼主好人啊
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2190天前
    改造过的慢病毒也是来源于HIV,对组织有很强的亲和力,不像腺病毒,会有类似流感样症状
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2554天前
    不好意思,其一,我已不在实验室工作,其二,你要的这个载体我们那边还真没有
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2554天前
    1,国产试剂就可以,你只需要其中的几个离子的浓度对了就可以 2,我给的浓度是终浓度,你只需要其中的几个离子的浓度对了就可以,至于是否是水合物,你只不过是在配的时候按照摩尔数,比如你只有Na2HPO4.12H2O,我现在需要1mol hpo4,那你就要配1mol Na2HPO4.1...
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2554天前
    看我一楼的protocol,仔细看
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2596天前
    包装过程都差不多, 我用的时候没多大差别,
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2596天前
    看我一楼的附件, 浓缩跟测滴度与否看你的要求,如果你的病毒包装比较成功,而且感染细胞也成功了,那这些你都可以考虑不做 如果你的细胞是悬浮细胞啊,还有一些淋巴细胞啊,我建议你先感染试试,不行的话要浓缩
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2597天前
    这些方法都大同小异,只是打开细胞膜,让质粒进入到细胞,lipo2000毒性稍微大一点,就这点区别
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2603天前
    puro是抗生素删选位点 DsRed是类似GFP一类的荧光蛋白 IRES是在同一启动子下面表达你的蛋白跟那个荧光蛋白的必须原件
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2604天前
    那你双染的时候避开GFP的通道即可,GFP激发光波长在480左右,吸收光波长在540左右,我只记得大概,具体你问免疫荧光的老师,他们知道的很清楚,所有你买试剂的时候就要注意了,要么选用低波长的,要么用长波长的,这时候你可以用三个通道观看了,图会相当漂亮
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2604天前
    一般会差2-10倍,病毒滴度低的时候,加点polybrene提高感染效率
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2604天前
    第一个问题,我用的是告诉离心,所有没有发语权 第二个问题,悬浮细胞比较难,自己多尝试,提高滴度永远是最主要的 第三个问题,药物在什么时候加,还真不好说,加完之后多久能测到变化,你的基因对药物有什么作用,在什么时候作用,都是问题,只有自己摸索了
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2606天前
    正常的,钙沉淀而已,没太大关系,你继续收病毒,低速离心一下这些东西就去掉了
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2612天前
    这个还真不好说,你虽然有荧光了,但是跟目的蛋白的量不是对应的,最多只能借鉴而已,还有就是是不是如果你的目的蛋白表达比较少,你的检测方法能不能很灵敏的测到,这也是问题 我建议,你用少一点的细胞,病毒的滴度提高些,然后用嘌呤霉素删选后,做成单克隆,再选取表达比较高的克隆做后续的实验
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2618天前
    感受态不过是帮你提质粒,你提到质粒了没,觉得不放心就再把质粒测序,不花几个钱, 没见到蛋白敲低有很多原因,病毒包的如何,滴度测没,有无对照,你的MOI是否太低,最后你这个细胞系是不是本来就很多这样的蛋白,你moi不够的话,不足以在WB上表现出差异,这些都是问题
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2619天前
    你可以尝试,提高滴度试试
  • xeoium
    xeoium  回复了帖子 慢病毒方面需要帮助的,请进 2619天前
    稳株是一个相对的概念,相对于那些不整合的方法,不整合,几代就丢失了 人的DNA还在进化,只要有细胞分裂,就有突变的概率存在,

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