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  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 LPS造模 37分钟前
    你要测什么东西啊?
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的审稿巨快还不要版面费的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 41分钟前
    不知道你后续是做什么实验,感觉这个LPS刺激的时间有点长,基本上炎症反应那些LPS刺激6小时左右该表达的都表达了,你可以考虑增加密度,有时候细胞太稀了对细胞状态不好
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 发表文章 3小时前
    Authorguideline
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的审稿巨快还不要版面费的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 4小时前
    你这种铺板略微有点稀,考虑密一点,血清有没有灭活过?
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 BMDM和RAW264.7巨噬细胞有什么区别么?检测炎性细胞因子这方面 7小时前
    你就是做mtDNA对炎症小体的影响咯,没必要绕这么大一圈啊,按照你的说法,只加LPS就引起线粒体自噬,你直接在加LPS的情况下再加入线粒体自噬抑制剂不就可以引起mtDNA释放了么,然后不就激活NLRP3炎症小体了么。然而如果你用LPS+ATP的方法再加线粒体自噬抑制剂不就和别人做的一模一样了么,哪来的新意?如果你有特异性清除mtDNA的方法是可以说明问题的。又或者你直接转染mtDNA作为inducer岂不是更好,当然这是设想,mtDNA的获取也有难度。以上是针对你疑问的解答,最后谈谈我的看法。首先以我的了解,双链DNA所激活的炎症小体不是NLRP3而是AIM2炎症小体,所以对于你的假设我就觉得很有疑问,暂时没有相关mtDNA激活NLRP3的报导,如果有,你做了也没新意了。因此还是劝你好好再查
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 LPS造模 9小时前
    这个看个人喜好的,你既可以配置到培养基里,然后每个孔换液,又可以每个孔单独加1-5uL(低于1uL的体积不建议加,毕竟枪加不准的,variation会很大)
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 BMDM和RAW264.7巨噬细胞有什么区别么?检测炎性细胞因子这方面 1天前
    问题的关键是你要做什么实验,要研究什么内容,的确LPS可以诱导线粒体自噬,但是这篇文章是做炎症小体的的,如果你要解释线粒体自噬和炎症小体的关系,必须还要加ATP。如果你不研究炎症小体,只用LPS去刺激细胞就够了啊,为啥一定要和别人做炎症小体的文章一致?
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 请问怎么用微晶尿酸钠(MSU)诱导细胞炎症?我做出来抑制炎症因子表达了…… 1天前
    还真是不听劝啊这位战友,我给你了两篇文献,尤其是后面一篇GW4064的文章,就是在做NF-kB和NLRP3激活的区别。你要认真看看文献,凭战友跟你三言两语虽然方便,但是肯定没有读文章来得详尽,我就再为你解答下吧。LPS只能激活NF-kB,而NLRP3的蛋白表达是NF-kB激活的产物,但是LPS不能激活NLRP3炎症小体。NLRP3炎症小体的激活特征是:1.NLRP3和ASC的相互作用,2.ASC多聚体的形成,3.Caspase-1自身切割激活,4.Caspase-1切割IL-1b前体,5.IL-1b成熟体(p17)分泌到细胞外,上清能够检测到IL-1b。NF-kB激活所产生的前体IL-1b是不能释放到细胞外的,只有成熟IL-1b才能被释放出去,也就是IL-1b的释放一定需要NLRP3炎症小体
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 1天前
    把差不多周龄的小鼠取BMDM之后Mix一下,然后再铺板就好了,就算一批送过来的小鼠也不见得给你的是一窝的小鼠,没关系的,反正是近交系,遗传背景不会差太多
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 sci杂志求推荐 2天前
    分子通路做得多的话可以考虑我之前写的FEBS Letters经验帖子,审稿快不要钱
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 请问怎么用微晶尿酸钠(MSU)诱导细胞炎症?我做出来抑制炎症因子表达了…… 2天前
    看来你没有搞明白炎症小体激活期间mRNA和蛋白之间的关系,你看看综述吧 Inflammasomes: mechanism of action,role in disease, and therapeutics(2015)Haitao Guo1,3, Justin B Callaway1,3 & Jenny P-Y Ting1,2  已经说过了,加了LPS就会引起NF-kB激活,IL-1和NLRP3的mRNA都是LPS刺激的产物,本来就不是因为MSU引起的。你加LPS不能引起THP-1的IL-1,只能说明你的刺激条件不对,或者THP-1有问题。而且IL-1是否表达不是NLRP3炎症小体激活的表型,是NF-kB是否激活的表型,IL-1是否分泌到培养基里才是NLRP3
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 修回1个半月还在under review,要催稿吗? 2天前
    真心的,我投的FASEB Journal,5分左右的经典期刊,一催编辑就拒了,把审稿人的意见就发过来了,很多时候都是审稿人意见回来了,编辑没空看,你一问就是催他,如果他对你paper没太大兴趣,审稿人回复意见也一般,就会觉得你不耐烦,他就给拒了
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 修回1个半月还在under review,要催稿吗? 2天前
    说实话,如果不是急着毕业就别催了,催了很大概率给你挂,你可以看看我写的投稿经历,催了马上拒信就来了
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 修回1个半月还在under review,要催稿吗? 2天前
    说实话,如果不是急着毕业就别催了,催了很大概率给你挂,你可以看看我写的投稿经历,催了马上拒信就来了
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 请问怎么用微晶尿酸钠(MSU)诱导细胞炎症?我做出来抑制炎症因子表达了…… 2天前
    首先激活炎症小体的方式是,PMA刺激2小时后换液去除PMA过夜,然后LPS刺激3小时,接下来加入MSU刺激3小时(不需要去除LPS),此时上清培养基中会有IL-1b分泌。你加入MSU去做RNA水平的检测是没有意义的,因为引起NLRP3的mRNA升高原因是LPS的加入,而Caspase-1是持续表达,所以,不管你上述这些处理是怎样的,不会有啥变化,加入MSU只是激活Caspase-1的活性,引起Caspase-1切割IL-1b。如果你不加LPS组和加LPS组的的NLPR3 mRNA水平是一样的,那说明NF-kB没激活(当然你要排除是否你的引物有问题,如果引物不对,NLRP3的表达当然没变化),你的LPS处理是无效的,考虑加大浓度。而且提RNA的时间点选择不能太靠后,比如LPS刺激9小时就可以提
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 BMDM和RAW264.7巨噬细胞有什么区别么?检测炎性细胞因子这方面 2天前
    提到这句话的paper是韩家淮院士的paper,DOI:10.1038/cr.2015.139Gasdermin D is an executor of pyroptosis and required for interleukin-1β secretion.你可以查阅一下,results部分第一段就有“RAW264.7 macrophage cell line has no ASC gene expression but it resembled BMDM when ASC gene was ectopically introduced into it.”在体外细胞水平上单独使用LPS只能够引起NLRP3表达,并不能激活NLRP3炎症小体,必须要有第二信号的参与,比如A
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 2天前
    祝好运!
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 SCI一审意见回来,感觉渺茫,请问我是否还要回复? 5天前
    这就是拒稿。。。编辑写了没达到发表要求
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 5天前
    贴壁之后应该不是太细长的,应该三角形比较正常吧,那种钝三角形,不是特别细长,LPS刺激后你就会发现细胞状态变了,感觉像是拍扁了,有触角出来,颜色也会变浅一些,这就说明激活得还不错
  • x7758414
    x7758414  回复了帖子 适合毕业的FEBS Letters(3.6分)投稿经验 6天前
    前面不是说过么,我们的条件是可以一只小鼠的细胞铺一个12孔板,或者3只小鼠铺2个12孔板,这个就是差不多合适的密度,一个12孔板满满的是大概10的6次方个细胞,如果觉得密你可以减少一半

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