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  • wusofa
    wusofa  的帖子被加了1分 212天前

    回复:2017年至2019年指南或专家共识集集帖

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  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 2017年至2019年指南或专家共识集集帖 213天前
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  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 2017年至2019年指南或专家共识集集帖 213天前
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  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 2017年至2019年指南或专家共识集集帖 213天前
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  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 247天前
    大家相互学习,欢迎交流探讨
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 247天前
    RNA转录过程是由启动子开始从5'向3'方向转录的。一次只能从一个方向转录出一条链,转录过程是依赖于启动子的。所有正义序列的启动子是不能用于反义序列转录的。所以要得到两天RNA链,必须要又个启动子。就好一辆北京往返上海的高铁,虽然是同一辆车,但是有两个车次,每个车次有一个始发站
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 248天前
    构建质粒做双酶切比较好吧
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 248天前
    前面的朋友想一个质粒转录2个RNA,所以两边都加启动子
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 249天前
    体外转录是有方向性的,就像您说的有一条编码链,一条模板链。其实这两条链并没有严格的区分,在基因组上就可以看到,就有正向编码的基因,也有反向编码的基因。现在还有很多mRNA有反向非编码RNA,也是这个道理。转录或者说编码链的方向是由启动子决定的,有启动子,才能启动下游序列的转录。那么在做体外转录的时候也需要启动子。目前商业化的体外转录试剂盒中最常用的启动子是T7和SP6,所以一般要获得正义链和反义链需要分别把正义序列和反义序列插入到启动子下面。当然,也可以在序列的两边都装启动子,这样就可以两用了,我们现在有这样的质粒。
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助RNA PULL Down和质谱结果筛选 249天前
    理论上是这样的
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 RIP试验中得到的是RNA 全长吗? 306天前
    无论是甲醛还是之外都有一个人为片段化的过程。所以只能检测峰值附近的序列。但是有一个问题,峰值一般都很窄,可能不大好设计,一对引物用来检测RNA的相对量。建议用非交联的方法去做RIP,这样子的话RNA还是比较完整的。
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 RIP试验中得到的是RNA 全长吗? 307天前
    您做的是RIP还是CLIP?如果做native RIP的话,RNA还是比较完整的,可以设计全长。如果做CLIP,在实验过程中RNA已经断掉了,只能设计引物检测结合部位的序列了
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 RNA pulldown 313天前
    不一定要那么多,可以根据自己的实验目的,蛋白表达丰度调整用量
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 细胞核与细胞核RNA 提取 383天前
    没用过。感觉核浆分离的关键是第一步裂解程度的把握现在很难做到一个试剂盒把常见的细胞都裂好,还是自己摸索比较好
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 孩子出生后,整个产房的人都在找他的眼睛... 406天前
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  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 关于细胞培养...忽然发现细胞有好多小黑点 446天前
    感觉就是支原体污染了,用点药处理一下看看
  • wusofa
    wusofa  的帖子被加了1分 472天前

    回复:是否有数据库可以查到RNA结合蛋白的结合RNA的区域呢?

    静夜的单簧管 请教各位大神,是否有数据库可以查到RNA结合蛋白(RNA binding proteins)是哪一部分结构可以结合RNA呢?多谢啊如果是很明确的RNA结合蛋白,蛋白相关数据库应该都会注明RNA结合的结构域。 有些DNA结合蛋白,可以把DNA结合的结构域当成RNA结合...
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 求助关于RIP 用于RIP的目的抗体有什么特殊的吗 482天前
    RIP实验室也是基于免疫共沉淀,所以做RIP的抗体必须满足第一个条件:可以做IP;同时RIP与IP不一样的地方在于富集RNA,所以要满足另外一个条件:抗体结合的区域不能与RNA结合区域重叠。市面上除了一些经典的RNA结合蛋白外,很少会标注可以用来做RIP。如果是转录因子相关蛋白,可以参考用ChIP级别的抗体,因为这戏抗体可以富集目的蛋白结合DNA,这些蛋白很多时候用相同的结构域结合RNA。如果不是经典的RNA结合蛋白,也没有ChIP级的抗体就选可以做IP的,注意看制备抗体是用的抗原是蛋白的哪一段,如果是单抗一定要避开可能的RNA结合区域!
  • wusofa
    wusofa  回复了帖子 做CoIP的时候,加入的氰基硼氰化钠的作用是什么? 499天前
    您好!您是从哪里要的protocol?我们也做很多Co-IP的,没用过这个试剂。现查了一下,是一个吻合的还原剂,应该是加在反应体系中保护二硫键、维持蛋白正常构象用的。用DTT的会更常见
  • wusofa
    wusofa  的帖子被加了1分 510天前

    回复:核酸技术板块的八月份奖励……

    感谢版主!

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