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【求助】求助蛋白纯化

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  • wlt728
    wlt728  发布了新帖 研究内容关于 脂代谢,人单克隆抗体适合发什么杂志? 36天前

    我做了一个能促进脂代谢,全人重组单克隆抗体,该抗体或许可以在心血管疾病上用用。 主要工作真核表达抗原,鉴定抗原性,生物学活性正确后。抗体库筛选中和活性抗体 重组表达全人抗体,纯化后。两个细胞实验,一个小鼠实验证明其有中和活性。 我看杂志是journal of lipid research 或者JBC 我自己觉得工作量没有达到以上 两篇杂志要求,请大家给建议投什么杂志比较合适,能更快接受,2分左右。非常感谢。

  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 做实验买不到试剂耗材的尽管问,在线答疑 80天前
      就是这种管,问了,但是价格很贵,请问知道是否有国产的? 
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 做实验买不到试剂耗材的尽管问,在线答疑 83天前
    多谢,主要是原来的工艺是20000rpm离心,光离心就得5-6个小时,现在生产增加了好几倍,所以如果离心的话,光离心就很长时间。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 包涵体复性前后蛋白大小会改变吗 86天前
    大肠杆菌表达的蛋白,填料是GE的。原来的工艺是破碎后用落地式离心机离心,然后上CM填料,穿出有但可以接受。后来因为需要量比较大,破碎后上清就用管式离心机离心。但是上CM柱后,只有第一次收率是最高的,第二次开始收率越来越低,而且相差很多,请问这个是什么原因?如果说是样品前处理不行,但是填料第一次使用时收率很高(填料前后买了两次);如果说填料处理的不行,但是每次使用结束后,都用碱处理,理论上来说应该跟新的填料一样,但是第二次使用开始收率就下降很多,请问这个该怎么解释? 
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 做实验买不到试剂耗材的尽管问,在线答疑 86天前
    您好,请问这种小管有国产的么?大概能装1.6ml左右,是做噬菌体库用的?别人拿过来几支,也没有货号什么的,如果没有进口的也可以。
  • wlt728
    wlt728  发布了新帖 目的蛋白穿出太多,怎么解决? 87天前

    大肠杆菌表达的蛋白,填料是GE的。原来的工艺是破碎后用落地式离心机离心,然后上CM填料,穿出有但可以接受。后来因为需要量比较大,破碎后上清就用管式离心机离心,然后正压过滤。但是上CM柱后,只有第一次收率是最高的,第二次开始收率越来越低,而且差的很多,请问这个是什么原因?如果说是样品前处理不行,但是填料第一次使用时收率很高(填料买了两次);如果说填料不行,但是每次使用结束后,都用碱处理,理论上来说应该跟新的填料一样,但是第二次使用开始收率就下降很多,请大牛帮忙解释一下,谢谢!

  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 做实验买不到试剂耗材的尽管问,在线答疑 119天前
    您好,想问一下,大肠杆菌破碎后,因为没有离心条件,有没有别的设备可以达到过滤澄清的作用?一般的抽滤设备太费膜了。有具体公司么?
  • wlt728
    wlt728  发布了新帖 纯化峰型不对,原因是怎么回事? 145天前

    用protein G填料纯化小鼠腹水抗体,填料才用了4次左右,洗脱的峰型越来越不对,原来是一个峰,现在开叉了,是怎么个原因? 

  • wlt728
    wlt728  : 我在丁当抽奖抽中了2丁当,获得2.0个丁当。你也来试试手气吧:http://dxy.me/fUf6Zj
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 iND申报 251天前
    IND不要求,但是有最好了。1期临床不清楚。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 [求助]比较冷门的蛋白,等电点去哪查询 261天前
    没有序列么?可以软件预测一下!
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 纯化出的蛋白但总有一条与之相关性较强的杂蛋白除不掉(有图) 261天前
    如果跑过还原和非还原型电泳,确定不是二聚体,那就用分子筛试试,差这么大应该是可以分开的,或者试试疏水的柱子。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 电泳加样漏样问题 261天前
    三种方式:1不怕浪费,多配制一些电极缓冲液,加满;2找合适的瓶子,可以沉到底部的,占体积比较多的。放进去使电极缓冲液漫上来;3直接换配件。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 单抗项目CFDA IND阶段包材相容性研究 269天前
    没有硬性要求做。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 HPLC C18检测问题 276天前
    看蛋白质分子大小,我们用的都是C18
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 国内生物制品原液制备好后,原液灌装在可否在另一个地方 277天前
    好像除了胰岛素,其他的生物制品原液和制剂都要在一个地方生产。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 37岁考博又失败了 309天前
    如果为了梦想,努力!
  • wlt728
    wlt728  发布了新帖 原液或制剂影响因素试验 310天前

    请问一下,生物制品原液或制剂的影响因素试验(光破坏,热破坏),考察的时间点和次数如何选取?1234天?还是1234周?

  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 大肠杆菌DH5α质粒发酵培养 310天前
    如果就是要扩增质粒,用LB培养基就好。不需要补加其他东西。
  • wlt728
    wlt728  回复了帖子 大肠杆菌DH5α质粒发酵培养 310天前
    DH5α是克隆菌,不适合于表达目的蛋白。

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