选择模板

更多 最新动态

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 His pull down 的bait蛋白为什么不挂柱子? 347天前
    感谢回复
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  发布了新帖 有关外显子的图 390天前

    请问这个图中外显子之间的折线是什么意思?第一次写文章,也想做个类似的图,但是这个折线不懂什么意思,也不敢随便画。请教各位大神讲解,不胜感激。

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 His pull down 的bait蛋白为什么不挂柱子? 458天前
    确实,蛋白浓度比较低。最开始诱导的时候就发现了这个情况,更换了诱导条件后也没有明显的改善,所以就一直还是用的这个条件。但是浓度低他也不是没有呀,为什么柱子会挂不上呢?蛋白浓度低那柱子不是应该更加容易把所有的蛋白都结合上吗?很奇怪,不能理解。我也打算试试过夜结合看看怎么样。
  • wangdeng4242
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 459天前
    好久没上了,不好意思。我是固定探针1ul,调整蛋白的量。最后的结果蛋白是4ul,量大概在1.6ug
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 有关ChIP实验的细胞吹打问题 627天前
    好的,谢谢您。应该还是细胞量较少,我再培养一批细胞加大细胞量试试。
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  发布了新帖 有关ChIP超声条件 627天前

    最近开始做ChIP实验,想请问下各位大神这个超声条件应该如何改善。这个3,4,6孔道应该是细胞数比较少,导致DNA的量很少,基本看不到DNA。1,2,5孔道是不是还有未破碎的DNA呢?因为我看最上面很清晰的有DNA。1号孔道下面的已破碎的DNA好像还可以,位于200-1000之间。2号和5号下面破碎的DNA为什么有点看不清楚呢?我应该怎么改善条件呢?用的新芝JY92-IIN的破碎机器,5mm探头,破碎10s,间隙45s,功率15%,1-6依次调整超声次数,分别为3,6,9,11,13,15次。求大神指教呀,感激不尽

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 有关ChIP实验的细胞吹打问题 627天前
    老师您好,我买了细胞刮,很轻松就挂下来了,谢谢您的建议。我想问下这是我第一次摸索超声的条件,想请教您一下。这个3,4,6孔道应该是细胞数比较少,导致DNA的量很少,基本看不到DNA。1,2,5孔道是不是还有未破碎的DNA呢?因为我看最上面很清晰的有DNA。1号孔道下面的已破碎的DNA好像还可以,位于200-1000之间。2号和5号下面破碎的DNA为什么有点看不清楚呢?我应该怎么改善条件呢?用的新芝JY92-IIN的破碎机器,5mm探头,破碎10s,间隙45s,功率15%,1-6依次调整超声次数,分别为3,6,9,11,13,15次
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 有关EMSA问题 634天前
    就是碧云天官方的EMSA试剂盒上面写的步骤呀。http://dxy.me/7VRvMr这个是网址
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 有关ChIP实验的细胞吹打问题 644天前
    OK 谢谢老师。这两天生病了没看园子,没有及时回复您不好意思,谢谢您的建议
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  悬赏5丁当求助 850天前

    有关蛋白酶活丧失的问题

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  发布了新帖 有关Bac-to-bac的一些疑问 850天前

    想请教大家一下,bactobac表达出的蛋白存在修饰么?换句话说某蛋白在生物体内可能发生了一些修饰才行驶了它的功能,那我利用bactobac表达出来的该蛋白会存在和体内一样的修饰么?

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  发布了新帖 有关EMSA问题 953天前

    用的碧云天的试剂盒,探针是直接找碧云天合成的。因为实验室没人做过我就先针对实验组进行条件摸索(还没做竞争组实验)。这是我最近一次比较好的结果。1号泳道:阴性对照   2-5号泳道:分别是用不同浓度的纯化蛋白进行的实验。探针的浓度均为1ul。4号泳道上方是迁移带么?为什么它的游离探针不见了?

  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 非放射EMSA实验技术专题讨论 984天前
    楼主,我后来用我们那个仪器做了。有条带是有,但是全是free probe。我对纯化蛋白的浓度已经调整了好多次了还是不行。后来又用核蛋白做,还是没有条带。后来又试着调整探针的浓度,也没有条带。我已经绝望了。但是我看文献的时候,有人做过我这个蛋白的,探针核心序列也一致,人家就做出来了。我想问问是不是荧光标记的探针灵敏度不够呀,我是否需要用生物素在做呢?
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 990天前
    虽然我觉得很残酷,但是我确实觉得最能说明这个结果的结论就是二者不结合。我现在做了多次实验了,从改变蛋白浓度到用不同浓度咪唑洗脱的纯化蛋白做,结果都是只有游离探针。我2 3个月努力的成果啊,就这么没了
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 990天前
    没太明白。是说试剂的厂家么?我买的碧云天的5X结合buffer以及10X无色的loading buffer和10X蓝色的loading buffer。胶自己配的。探针是找生工直接合成的
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 990天前
    1.蛋白应该没问题,我不是从细胞里面提取的,是原核表达后用His标签的柱子纯化出来的2.这个是个我没注意到的点。我做的转录因子是通过在线软件预测到的,我没有仔细去查找相关文献。这个我接下来要重点考虑3.好的,我这次实验延迟至30min试试4.我用的是荧光标签,这个不需要转膜的。跑胶完直接就可以荧光观察条带了,比起生物素标记操作简单点,但是灵敏度可能不如生物素。如果多次实验都不行的话,我再尝试用生物素标记试试看。谢谢您宝贵的意见
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 990天前
    ?什么的牌子
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  回复了帖子 EMSA实验结果分析 991天前
    谢谢您的回复,跟我分析的结果一样。只有游离的探针。我想请问您我接下来应该如何调整实验呢?有什么好的建议么?我第一次做这个,不太懂。谢谢了
  • wangdeng4242
    wangdeng4242  悬赏2丁当求助 992天前

    EMSA实验结果分析

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客