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【求助】JC-1用酶标仪测线粒体膜电位

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【求助】关于高分化的pc12细胞的一些问题!

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  • tingshu
    tingshu  悬赏2丁当求助 1487天前

    求文献一篇

  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 求助! 2687天前
    一种可能是你的蛋白在你的蛋白样品中没有表达,我们之前做过cyto C,分子量和你的蛋白一样,胞浆蛋白做不出来,提取的线粒体蛋白是可以做出来的 小分子蛋白最好用高浓度的分离胶,我们用15% 小分子量蛋白最好用0.22μm的膜,0.45μm的膜可能拦不住小分子蛋白
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 BCA 2687天前
    超过半个小时具体是超多少时间呢,一般短时间内随时间增长,颜色会加深,测出的数值会偏大,但是同一批测的蛋白样品之间是有可比性的,我们一般37℃孵育40min,感觉蛋白测出来更准一点;时间超过一个小时的话,没有做过,不知道会怎样
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 Western blot显影定影后胶片有很多大墨点,怎么办?急啊! 2693天前
    可能是暗盒脏了,或者你的胶片再曝光之前湿了或者污染了,不然你单曝光一下胶片看看
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 做了五六次WB,内参都不出!急!!! 2695天前
    下面是我认为可能出的问题,仅作参考,按照你自己的情况看: 1.你的胶配出来之后可以直接用的,也可以保存一段时间,保存时间以不超过10天为宜,保存方法:用滤纸把胶包好,然后把滤纸打湿,装在密封袋中保持胶的湿润,保存过程中不可以把梳子拿下来。 2.你转膜时是‘转膜,电流110mA,1...
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 大分子转膜 2695天前
    我们这边大分子量转膜一般是恒流,150 mA,2 h ~ 2.5 h,一般转膜会释放出大量的热量,除了加上冰盒以外,还要的冰水浴中进行。
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 【献给初学者】western blot操作步骤2012版 2697天前
    学到了很多,谢谢
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 细胞计数为什么看不清细胞?急啊 2697天前
    没有注意过盖玻片的厚薄问题,好像我们用哪一种都可以
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 细胞计数为什么看不清细胞?急啊 2698天前
    我们都是先把盖玻片盖在计数板上,计数板小斜面与盖玻片对齐,然后把10 微升的细胞悬液通过对齐的地方渗入,如果最后盖盖玻片是会有很多小泡泡的
  • tingshu
    tingshu  回复了帖子 western 电泳时,蛋白样品堵在上样口 2698天前
    是你的RIPA裂解效果太强了,杂质太多,就会出现这种问题,我们组一位同学之前出过一样的问题,建议你换一种裂解液;另外你的buffer如果配制的时间久了也会有同样问题,时间太久溶解性就会降低

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