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  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 six1基因合成 1101天前
    基因到底是否存在,引物、试剂等等全换,是否有结果但没检测到
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 请教反转录失败的原因 1122天前
    1.RT-PCR灵敏度:琼脂糖凝胶中仅有少量或没有RT-PCR产物1-1.起始RNA量不够:1-1-1.增加RNA量,对<50ng的RNA样品,可在第一链cDNA合成中用0.1μg-0.5μg乙酰BSA。1-1-2.HeroGen(创英)RT™ All-in-One Master Mix(G208):新一代逆转录酶EasyScript,灵敏度高,适用于总RNA浓度1pg-1μg、mRNA浓度0.1pg-1μg的逆转录。1-2.RNA降解:1-2-1.组织材料取出后立即液氮冷冻,或直接提取RNA。1-2-2.用良好的无污染技术分离纯化RNA。1-2-3.用变性胶电泳分析RNA完整性。1-2-4.RNA用100%甲酰胺保存。1-2-5.正确处理存放RNase抑制剂,注意加热温度、溶液pH值及DT
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 用trizol提骨髓 1123天前
    后续做pcr/qpcr的话,可以不提取,用直扩法。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 小鼠脚趾直接PCR实验报告 1123天前

    小鼠脚趾直接PCR实验报告

  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 青蒿等直接PCR实验报告 1123天前

    青蒿等直接PCR实验报告

  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 粪便、血液直接qPCR染料法实验报告 1125天前
    标题打错了,应该是探针法。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 求助~分子实验小白,求帮忙看看提基因组DNA电泳图 1128天前
    2.出现非特异性条带2-1.引物设计不合适:2-1-1.有非特异性扩增或引物二聚体,引物特异性不好。2-1-2.引物特异性的好坏可在NCBI比对得知。2-1-3.降低引物浓度,调整退火温度。2-1-4.重新设计引物。2-2.模板污染:重新制备模板。2-3.反应条件不够优化:2-3-1.用热启动PCR,如HeroGen(创英)热启动PCR Mix(PR136)。2-3-2.出现比目的条带小的杂带,可提高退火温度、减少循环数。2-3-3.出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、减少循环数。2-3-4.用HeroGen(创英)优化PCR Mix(PR1234)进行优化实验。2-3-5.用递减PCR(Touch-down PCR)。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 唾液直接qPCR的SNP基因分型实验报告 1129天前

    唾液直接qPCR的SNP基因分型实验报告

  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 粪便、血液直接qPCR染料法实验报告 1129天前

    粪便、血液直接qPCR染料法实验报告

  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 请各位帮我看一下我的琼脂糖电泳图 1136天前
    可以减少上样量试试
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 请各位帮我看一下我的琼脂糖电泳图 1137天前
    2.条带模糊或拖尾2-1.DNA上样量过多:减少凝胶中DNA上样量。2-2.DNA降解:避免核酸酶污染。2-3.DNA样品中含盐过高:电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。2-4.DNA变性:电泳前不要加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。2-5.电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱。建议经常更换。2-6.电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链,温度<15℃。2-7.蛋白污染:电泳前通过酚抽提去除蛋白。另外,是什么染料?
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 求助,为什么我的条带不在同一个水平线 1139天前
    这种染料会改变分子量和marker条带大小
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 PCR拖尾怎么办? 1140天前
    2.条带模糊或拖尾2-1.DNA上样量过多:减少凝胶中DNA上样量。2-2.DNA降解:避免核酸酶污染。2-3.DNA样品中含盐过高:电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。2-4.DNA变性:电泳前不要加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。2-5.电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱。建议经常更换。2-6.电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链,温度<15℃。2-7.蛋白污染:电泳前通过酚抽提去除蛋白。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 PCR片段回收后可以用原引物继续扩增吗? 1144天前
    可以,效果可能更好。我们有这种经历。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 求指教,各位大神,这是我今天跑的胶 1144天前
    PCR常见问题+原因+对策1.不出现条带1-1.模板质量差:1-1-1.用阳性基因引物扩增,以检测模板质量。1-1-2.重新纯化模板DNA,去除Taq酶抑制剂等。1-1-3.电泳检测模板DNA的完整性。1-1-4.HeroGen(创英)优化PCR Mix(PR1234),针对未纯化样品、低模板等艰苦PCR设计研发,有效解决疑难问题,提高扩增效率。如用PR1234还是不能解决问题,可99.99%断定PCR实验不可能成功了。1-2.GC含量高:1-2-1.高GC会导致DNA双链难以完全打开。1-2-2.HeroGen(创英)高难度PCR Mix(PR9113),针对高GC/AT、有特殊二级结构、未纯化样品等高难PCR设计研发,有效解决高难问题,提高扩增效率。1-3.靶序列变异:1-3-1.靶序列
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 提完DNA后电泳结果拖带 1145天前
    2.条带模糊或拖尾2-1.DNA上样量过多:减少凝胶中DNA上样量。2-2.DNA降解:避免核酸酶污染。2-3.DNA样品中含盐过高:电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。2-4.DNA变性:电泳前不要加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。2-5.电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱。建议经常更换。2-6.电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链,温度<15℃。2-7.蛋白污染:电泳前通过酚抽提去除蛋白。
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 急!粪便DNA提取成这样,正常吗? 1158天前
    粪便可以直扩PCR或直扩qPCR
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  回复了帖子 大众SNP分型手段集合 1165天前
    这个题目好!
  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 组织直接PCR+组织直接qPCR 1171天前

    组织直接PCR+组织直接qPCR://d.dxy.cn/detail/13030408

  • tinayuhgb
    tinayuhgb  发布了新帖 组织直接PCR/直接qPCR 1171天前

    组织直接PCR/直接qPCR

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