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【求助】有关STAT3以及P-STAT3的western blot

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【求助】AO/EB 染色步骤

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  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 C57BJ6小鼠水合氯醛及戊巴比妥钠腹腔注射麻醉方法求助 1天前
    一般动物手术都会禁食。参考临床。临床上禁食的目的应该是防止食物反流引发窒息。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 求教-B细胞活化抑制试验设计 10天前
    没有呢,私聊我的都是类似于委托他们帮我做试验的那种,但是具体怎么做,方案需要自己定,我感觉什么都没有帮助
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 求各位分析一下为什么污染了!!! 42天前
    我指的不是吃,而是自己做包子、馒头之类……
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 human TNFα转基因小鼠 42天前
    问问南模,12年问过,说是需要定制貌似,现在很久不接触了
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 Western越跑越难看,求助帮忙看下,谢谢~ 42天前
    1.首先你得确认你的SDS-PAGE胶跑的没有问题(用染料染下你的蛋白,看看条带是否正常)2.再次一般情况下70KD,200mA恒流湿转电转的话,直接看你加入的loadding BUFFER里的溴酚蓝(6KD左右吧)位置,还有你的蛋白MARKER里面70KD的位置在哪而决定你的电泳时间,差不多一个小时吧。3.电转结束后,可以用再染色下你的电转之后的SDS-PAGE胶,看看里面还有没有蛋白了。4. 还有就是,你的胶、膜、电极有没有弄反(操作上的问题)
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 动物实验样本数求教 42天前
    一般情况下,我们是预实验做3-5只(为了数据统计),如果是为了报批药物,请参考指导原则(小动物数是要求不少于6只)
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 求各位分析一下为什么污染了!!! 42天前
    看了一下你的问题,貌似2次都是发现酵母菌污染,你实验最近是不是有接触包子、馒头发酵之类的酵母菌?之前我们实验室出现过酵母菌污染说是是因为有人最近在家做包子,身上沾染了酵母……后来彻底消毒后就好了……
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 分享专题就送10丁当! 62天前
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 我国人均读书4.67本,你达标了吗?来晒晒你最近读过的一本书 62天前
    搞基础研究的人,目前在读《内科学》,后悔没有早一点接触临床的书
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 药效模型与临床对接问题 78天前
    因为现在我们还没有IND,个人理解在IND前这些研究是都应该要做的,但是由于这样需要很长的时间来检验这些假说为临床实验方案或者临床定位提供基础支撑,对于IND的周期太长,企业可能等不了这么久。同时,非常感谢您回帖和指点。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 PK/PD 动物试验及制剂相关问题讨论 79天前
    非常感谢您的指点,很有实践意义,也很实用。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 PK/PD 动物试验及制剂相关问题讨论 83天前
    非常感谢您的指点!
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 PK/PD 动物试验及制剂相关问题讨论 83天前
    非常感谢您的指点。我的药物是局部起作用的。目前的药效PK数据是支持的。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 PK/PD 动物试验及制剂相关问题讨论 83天前
    感谢您的指点。1.首先,我的药物是希望其保留在皮肤表皮和真皮层中起作用的,目前的PK也证实这点。2.对于乳膏,据我目前所知,是有混悬型的乳膏,也就是您说的乳膏中的药物不溶解,目前是由于我们这个药物在制备乳膏的过程中,水相油相乳化的时候,药物会因为在其中析出(溶解度不够的缘故),但是,理论上它析出会存在多种晶型,所以,在质量控制上存在很多变量和难点。3. 由于我们要配合制剂那边进行确认处方筛选,由于药效学的数据可能不足以量化各个处方之间的优劣,所以个人认为PK应该更适合量化。是不是新处方的PK能达到之前药效处方的PK参数(比如在真皮、表皮中的含量,保留时间)等就可以初步比较哪个新处方更适合?关于制剂稳定性:在研发阶段,稳定性放样是需要时间的,如3个月,6个月这样,那么是不是应该先做各个处方之间
  • szxy1111
    szxy1111  的帖子被加了1分 83天前

    药效模型与临床对接问题

    各位大神:本人涉及一个化药单体的IBD(炎症性肠病)项目新药开发:目前体内药效模型(分别一个CD和UC的急性模型,3-7天给药)证实药物有效,涉及后续相关药理推进问题:1:在临床中,IBD区分为UC(溃疡性结肠炎)和CD(克罗恩病),但是动物模型并不是能完全区分这2种模型:那么临...
  • szxy1111
    szxy1111  发布了新帖 药效模型与临床对接问题 83天前

    各位大神:本人涉及一个化药单体的IBD(炎症性肠病)项目新药开发:目前体内药效模型(分别一个CD和UC的急性模型,3-7天给药)证实药物有效,涉及后续相关药理推进问题:1:在临床中,IBD区分为UC(溃疡性结肠炎)和CD(克罗恩病),但是动物模型并不是能完全区分这2种模型:那么临床定位的时候(拟适应症)是否要将UC和CD区分开,还是合并IBD申报?2:目前各大主流文献(nature和science等)上的急性模型周期均为1周左右(由于模型具有自愈性,所以最长给药周期也就1周多)慢性模型周期也为6周左右。那么,在临床中,IBD的治疗目标:(1)诱导缓解:通常为6-12周,那么目前急性模型是否能代表?(2)维持缓解:通常评估终点的时间为52周,那么慢性模型6周的时间是否能代表?或者(3):即使治

  • szxy1111
    szxy1111  发布了新帖 PK/PD 动物试验及制剂相关问题讨论 83天前

    各位大神,请教:     有一个产品(化合物单体)?目前药效(溶液型皮肤涂抹制剂,50%的乙醇溶液药物后用蓖麻油混匀,最终乙醇含量为15%)证实效果不错(多次试验证明,包括病理切片结果),目前制剂乳膏在稳定性放样期间发现制剂乳膏析出晶体,那么出现一个问题:目前析出的样品可能存在多种晶型(理论上有多种,实际上目前没有寻找到好的检测方法确认),晶体析出的量是否随着时间增长(怎样确认析出晶体的量?)。现在有几个问题请教:1. 如果不更改制剂处方(原处方也做个小鼠药效和猪的PK,证实药效良好,PK暴露符合理论设计):(1)那么怎样确认乳膏中晶体的晶型?(2)如果存在多种晶型,怎样对各个晶型晶型定量,以确保“质量稳定”?(3)怎样对析出的晶体进行定量?显微镜视野观察(要先

  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 注射剂的毒理实验 90天前
    我们是采用缓慢推注的方法大约1ml用2分钟的速度去推注的,GLP的老师说这样也不是恒速,建议使用临床用的注射泵,不过那样动物需要绑定和安定,比较麻烦。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 C57BJ6小鼠水合氯醛及戊巴比妥钠腹腔注射麻醉方法求助 94天前
    我用过10%水合氯醛(5ul/g)进行麻醉,麻醉前禁食不禁水12小时左右,基本上麻醉没有死亡,麻醉后注意体温保温,用红外灯照射,或者是保温板。
  • szxy1111
    szxy1111  回复了帖子 阳思明语||临床试验微故事 101天前
    谢谢您的点评!希望我们这些科研一线的人员能坚守本心,不管上面如何,至少保证手中出来的东西是真实可靠的!

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