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丁香客

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  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 多抗制备出现问题啦,求高手解答 2829天前
    11个氨基酸才1kd多点,基本没什么抗原性吧,抗体效价上万,也就是才10的4次方,个人不觉得这可以算作抗体
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 免疫荧光背景很深,什么原因? 2830天前
    这应该不是背景光,而是细胞荧光太弱,为了能看见细胞,使用的曝光时间较长所致。也就是说根本问题在于你的抗体抗原结合差,实验条件还需优化。比如一般对比两张片子某特定蛋白的表达,荧光强弱不同的基础上,还要看背景光的强弱,因为曝光时间长荧光强度肯定强,而背景光也会强一些,所以有专门软件可...
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 MCF-7,怎么了? 2830天前
    MCF7培养是要加牛胰岛素的,而且推荐使用MEM(ATCC/中科院细胞库)否则细胞很快会变异,MCF7倍增时间29h,要是以你目前这样的培养方法,很快就会变得长的飞快的
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 我的目的基因已经表达,但是连的是gst标签 2830天前
    当然有影响,最后阳性克隆筛选的时候需要加个其他带GST标签蛋白的对照组就好
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 如何把人间充质干细胞MSC养好?求细节帮助!!! 2846天前
    排除实验条件的问题后,你的培养基选择是否适合MSC,MSC是干细胞,增殖分裂会比较快,但是后期增殖停止,有没有可能是培养条件使细胞分化了,细胞的外形是否有改变,选用的培养基和添加剂是否和主流、可信的文献报道一致?
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 免疫荧光看过转的荧光融合蛋白,染DAPI前是否需要透化封闭? 2846天前
    单染DAPI可以不用透膜,DAPI可以自己穿过膜,但如果要染其他的胞浆胞核蛋白,就需要透膜了
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 腺病毒转染海马神经元后,能否再免疫细胞化学? 2854天前
    首先是确定蛋白有表达了再去做荧光,转染后因为腺病毒是瞬转,所以最好用转染后2,3天的细胞去做,可以先做个Western看看表达量。然后就是操作过程中注意避光,如果是胞浆或核内蛋白,记得固定的时候要用丙酮或者Triton透化,最后照荧光的时候动作快点,别让荧光在显微镜的光源下时间太...
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 求助关于WB一些问题! 2854天前
    这种事你在这里问不出来结果的,问你身边的人比较靠谱
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 pEGFP-N1构建 2854天前
    最好是哪边都别连,如果一定要连,试试连N端的和不连的蛋白功能有没有差别,C端别碰,尤其这种会2聚化的,一般都是输水相互作用,连上东西肯定失去二聚化能力,丧失一些功能。
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 四医大招生名额 2860天前
    目前招生指标上级并没有确定,劝各位不要冒险
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 类风湿关节炎 2862天前
    您没有权限阅读该帖子
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 载体构建的问题 2862天前
    标准的鉴定是双酶切鉴定,PCR都是辅助的,酶切没影子,再PCR也没用。谁知道引物搭在质粒的哪一段了
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 急!请高手帮小弟分析流式测细胞周期问题 2862天前
    这个要找做过相关实验的人,看看他们手里的细胞增殖速度,细胞形态什么的和你这个一样不一样
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 细胞大面积污染,求什么类型的细胞污染 2865天前
    换无双抗的培养基继续培养,如果浑了,必然是污染,有时候抗生素杀不死细菌,只是让细菌不太长,但是细胞同时也增殖很慢
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 急!请高手帮小弟分析流式测细胞周期问题 2865天前
    流式测周期的细胞样本固定后,一般在4度最多放2 3个星期吧,你还经过冻融,应该对结果会很有影响。还有一种可能,是细胞本身状态的问题,细胞状态不好的话,增殖本身就很慢,所以绝大多数细胞处于G1期,即使施加外界干预也对增殖影响不大。应首先确定细胞状态是否合适进行试验,再按流式细胞样品...
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 细胞培养联合用药 2865天前
    个人觉得每种药物都需要一个浓度梯度,联合用药也一样,两种药总浓度可以和单独用药设定一样的梯度,但这其中还要包括两种药物的比例,A:B=1:1/ 2:1/ 1:2,等等,组必须设置的全面一些,最后综合起来才比较有说服力
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 我的WB条带很奇怪,请教高手 2871天前
    必然是抗体,尤其是二抗结合时间过长,一方面造成背景高,另一方面造成条带结合二抗过多,局部HRP浓度过大,底物(ECL发光液)消耗过快,就会出现这种样子,你的实验条件只给出了稀释度,没有作用时间。看来楼主是个新手啊
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 求助pet42a载体~ 2871天前
    拿你的空载体去测序,看到底是不是空载体,连接不进去也不见得就是载体的问题
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 求助:PDTC抑制NF-kB信号通路原理 2871天前
    自己做实验验证,不是什么文献都能信的
  • szszsz
    szszsz  回复了帖子 质粒转染是否需要酶切 2872天前
    常用的转染方式就是质粒直接转染、慢病毒或腺病毒转染,质粒直接转和腺病毒都不会直接将基因片段整合进入宿主细胞基因组,在细胞分裂一定次后会丢失质粒,所以是瞬时转染。而慢病毒是艾滋病病毒,可以把基因连入细胞基因组,这样的话目的基因就不会在细胞分裂后丢失,所以是稳定转染。

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