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丁香客

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  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 动物组织与细胞涂片的油红O染色技术(个人总结) 40天前
    请问下图中的HepG2细胞染色成功了吗,步骤是:4%甲醛固定20min,PBS洗两遍,60%异丙醇浸洗20s,油红O工作液染色10min,60%异丙醇分化10s,蒸馏水洗两遍,苏木素复染1min,蒸馏水洗两遍拍照
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 40天前
    失落的kelly skey-li     最近又做了ROS检测,发现上次是因为曝光时间太长了,缩短一些曝光时间就可以了 请问是孵育了多久时间的荧光探针呢? 20分钟
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 HepG2油红染色 44天前
    想问一下正常的HepG2细胞可以染上颜色吗
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 肝细胞脂肪变模型建立及油红染色经验总结 44天前
    我在lucky中 我用楼主的方法干预了hepg2细胞,油红染色是没问题的,实验组细胞的脂滴明显比对照组的要多,但是我做qPCR的时候Srebp1c、Fasn这些基因的表达量都没有上去,不知道啥原因,做了三次独立实验了。 你好,请问你是用玻片做的吗,封片液可以用抗荧光猝灭封片液吗,实验室没有甘油明胶
  • skey-li
    skey-li  发布了新帖 GES1细胞MTT检测数值很低 48天前

    最近在做某药物对ges1细胞的毒性检测,浓度设置是0.02,0.04。。。10个浓度梯度稀释,96孔板细胞加入某药物24h后显微镜观察细胞形态基本无变化,数量也没什么变化,但是测MTT数值很小只有0.2-0.4,某药物有挥发刺激性味道,同培养箱的细胞有几瓶变圆死亡,有几瓶形态不变但是消化时细胞也不皱缩变圆,传代后细胞死亡。因为要测24,48,72h三个时间点,所以96孔板细胞60%时就加了药物,三个时间点的结果也没大的差别,怀疑96孔板中的GES1细胞加药后就已经死亡,这样的药物是不是不能用来细胞毒性检测。

  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 58天前
    wx231 skey-li 六孔板的细胞处理后加到96孔板里3个孔或者5个孔,数据分析时是把这几个孔的平均值当做这个孔的数据,也没有改变分组啊 6孔中的每个孔都是一个培养体系,后面的任何检测不能脱离这个体系。原本这个孔里面各种状态的细胞都有,分了就混掉了。懂? 明白了,谢谢
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 59天前
    wx231 有条件可以用流式细胞仪做,多功能酶标仪也可以的。直接就能定量,方便很多 六孔板的细胞处理后加到96孔板里3个孔或者5个孔,数据分析时是把这几个孔的平均值当做这个孔的数据,也没有改变分组啊
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 59天前
    carol1993 请问你这个是加玻片种细胞后做的,还是直接孔板里面做,直接用孔板拍的片子呀 我是直接在六孔板里做的,我试过加玻片但是没做出来
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 60天前
    wx231 skey-li 你好,想请问用多功能酶标仪检测前是否要细胞计数各组细胞量相同,如果加药处理后细胞部分死亡,这时候还要各组细胞量相同吗 还有我看到你的下面有说荧光值小,加探针,洗都要轻轻来,整个过程尽量避光。吸可以用小注射器,沿着边缘慢慢吸。我不知道你知不知道,多功能酶标仪测之前可以设置gain值,适当增大,你的数据也会变大。 我知道可以设置gain值,gain值设置到了100,黑色96孔板看不到细胞情况我第一次做的时候应该是不小心把细胞洗掉了或者细胞铺的有点少,所以我第二次就在六孔板里处理了细胞,上机检测前才加到96孔板里,想问问这样会影响实验结果吗,细胞消化下来后是不是应该细胞计数使各组的细胞量一样,如果有的组细胞死亡了怎么办呢
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 61天前
    给自己取一个好 有条件可以用流式细胞仪做,多功能酶标仪也可以的。直接就能定量,方便很多。 你好,想请问用多功能酶标仪检测前是否要细胞计数各组细胞量相同,如果加药处理后细胞部分死亡,这时候还要各组细胞量相同吗
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 62天前
    dxy_exviyfw0 skey-li     我用荧光酶标仪做了两次,一次直接铺到黑板里,测出来的值只有40多,可能是细胞被洗掉了,第二次先铺到6孔板里,处理后再铺到黑色96孔板里测,测的值在1千左右 楼主你好,用6孔板做的话,是要把细胞装好探针、孵育好之后消化下来再铺到96孔板里吗?酶标仪的波长设定是多少呀? 可以先装探针孵育好再消化下来,也可以先消化下来再装探针(这种孵育时要轻轻晃动使探针装载均匀),激发波长488nm,检测波长525nm,孵育时注意避光,加到96孔里时尽量使各组细胞量一致,至于每孔加多少细胞我也不确定,我上次细胞没有计数
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 63天前
    常景露 我最近也在用这个试剂盒,楼主是铺完细胞-做处理-之后检测前20min再加探针跟阳性对照吗?稀释比例是1:1000? 是的
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 74天前
    我用荧光酶标仪做了两次,一次直接铺到黑板里,测出来的值只有40多,可能是细胞被洗掉了,第二次先铺到6孔板里,处理后再铺到黑色96孔板里测,测的值在1千左右
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 79天前
    我最近又做了两次但是结果不太理想,做不出以前那种很清楚的荧光图片了,准备用荧光酶标仪做一下,如果结果比较好再和大家分享
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 ROS活性氧检测疑问 79天前
    果果happy skey-li     我是在检测前20min加的阳性对照,我的实验组是提前转染的细胞 检测前20分钟加入阳性对照试剂,那么请问探针什么加入呢。对于6小时以上的刺激,探针加入以后多久就可以用荧光倒置显微镜检测了呢,谢谢 我是把阳性对照试剂和探针一起加入的,探针孵育20-30min就可以了
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 慢病毒如何从293T细胞中释放? 94天前
    我认为是从293T细胞中分泌,转染48h后收集病毒的时候细胞还是完好的,而且只收集上清
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 16HBE细胞培养问题 94天前
    张小蕾NPEX 我的16HBE也是,DMEM 胎牛培养基,刚开始复苏的时候很多细胞有没有贴壁,最终就零零星星几个细胞贴壁,养了两周了,比楼主的细胞还少。也是很难消化。这是什么原因呀 复苏的时候细胞贴壁太少可能是细胞没有冻存好,密度太小的时候细胞长的会比较慢,可以考虑把细胞传到六孔板的孔里,等长起来了再传回培养瓶中
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 transwell迁移如何拍出好看的图 109天前
    dxy_e9jzj0zw skey-li     我也还在学习做这个实验,我一般是把混匀的细胞悬液加到小室里之后轻轻摇晃几下,再把小室拿起来在孔中加培养基,一般24h之后固定染色,12孔的transwell板每个小室加100ul细胞悬液,50000左右个细胞,如果细胞侵袭能力比较强可以少加点细胞。染色前擦去细胞容易把下面的细胞也擦掉或者擦的膜不平整,染色后再擦很容易擦不干净,我现在还没解决这个问题。 楼主,请问您现在解决了这个问题了吗?如何擦拭细胞?还没开始做实验,先来学习学习,请前辈赐教! 我没有解决,还是擦不好,下图是我做的比较好的了,但是还是没擦干净,膜也有点不平整了,图里那些黑色的就是没擦掉的细胞
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 细胞转染siRNA后western检测蛋白表达没变化 116天前
    我也遇到了这种情况,楼主怎么解决的呢
  • skey-li
    skey-li  回复了帖子 慢病毒感染细胞后,目的蛋白没有变化 116天前
    skyhater 如果是和内参的比值依然没有变化的话,做个rt-pcr看看吧,如果这都一样,也只能说明目的基因转染失败,失败的地方在于质粒中没有被启动表达,只有荧光蛋白表达吧~~ 你好,我的细胞用慢病毒转染筛选后做rt-pcr表达量有降低,但是做wb蛋白没什么变化,是什么原因呢

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