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【分享】单克隆抗体药物的质量检测

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  • shayatou1983
    shayatou1983  发布了新帖 抗体药物的多聚体高 36天前

    最近在做的一个抗体项目,细胞株纯化后,SEC-HPLC的检测结果发现高分子量的峰达到了10%,推测是由二聚体和多聚体组成。 请教各位战友,怎么确定多聚体是上游产生的还是下游产生的?目前只是才用了亲和层析一步纯化,是否可以采用下面的阳离子或者阴离子柱去除多聚体?

  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 挺无聊的问题:抗体氨基酸N末端和C末端氨基酸序列 103天前
    高铁上有时间,再来回答自己发的老帖。c末端的氨基酸,不论是什么总有一个要被切掉,所以即使不是K也会被切掉,还不如就保留吧
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 【分享】单克隆抗体药物的质量检测 103天前
    因为你回了老贴,我也翻出来看了一遍。当年的很多问题,现在都不是问题了吧😊
  • shayatou1983
    shayatou1983  的帖子被加了1分 288天前

    回复:大牛们说一说单抗药宿主蛋白检测的事吧

    hmj_nju 问过中检院重组蛋白室的饶主任,他对这个问题的答复是可以使用商业化的试剂盒,但是标准品必须自己制备,标准品的制备,使用空载质粒转化到宿主细胞,按已定的生产工艺进行发酵纯化,纯化不需要走完纯化流程,可以走纯化流程的前几步即可。采用空载体转化宿主细胞中,然后按工艺进行发...
  • shayatou1983
    shayatou1983  发布了新帖 求够或者交换GS系统的载体和dhfr系统的载体 CHO-S细胞或者293细胞 296天前

    老板在外面新开研究所,需要以上载体和细胞  目前我这边有一些Cas9载体,G418和hygromycin 筛选标记的载体,还有HIS 和Myc标签的载体可以交换。  细胞的话有DG44,CHO-GS缺陷型,293,CHO-K1还有SK-BR-3等细胞。

  • shayatou1983
    shayatou1983  的帖子被加了1分 583天前

    回复:请各路大神们看看,这几个抗体相关产品的研发是否有前景

    再进来叹一下5-10g/L的表达量。一般来讲摇瓶的表达量都会比后期的生产工艺低的,毕竟后期的工艺开发一般都会采用fed培养,细胞的生长周期也会更长,细胞密度也会更大。但是之前的经验是,如果细胞的表达量过高的话,细胞的生长速度会比较慢,产生的蛋白翻译后修饰会不完全。所以筛细细胞株并...
  • shayatou1983
    shayatou1983  的帖子被加了1分 583天前

    回复:信号肽酶可以体外切割吗?

    蛋白酶的特异性没有DNA酶特异性这么强的,如果通过体外蛋白酶切割一定会引入更多的异质性。引入新的工艺,整个切割反应条件的控制和验证,别自找麻烦了
  • shayatou1983
    shayatou1983  : 我在丁当抽奖抽中了SCI接收函,获得2.0个丁当。你也来试试手气吧:http://dxy.me/fUf6Zj
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 基因敲出 763天前
    CRISPR/Cas9  毫无疑问啊
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 生物类似药临床试验 765天前
    理论上三期的试验方案需要根据I期试验结果来进行调整,类似药如果I 和II期同时做的话,估计国家局也不会说什么,不过风险自担呗
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 如何用B细胞生成全人源抗体的? 766天前
    分泌抗体的B细胞进行永生化,然后提取RNA,获取抗体序列,再进行体外的表达
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 生物类似药临床试验 766天前
    最近支持公司的临床部门,仔细看了一下在CDE备案的生物类似药临床信息,虽然每个靶点都不一样,但是基本的思路是I期多剂量的受试品PK和PD研究,然后再加一个单剂量和原研药的比对研究。III期临床就是近300多例和原研药的头对头比较试验。比较早的几个靶点,已经有公司做完了I期的研究,III期试验正在招募之中。     虽然类似药指导原则去年刚刚推出,但是指导原则的制定过程中参考了欧洲已有的信息,同时也是和药企进行了多次的沟通,甚至还有很多公司的专家都说过指导原则的初稿都是他们来写的,哈哈。他们制定的临床方案很多时候就是后来企业的标准,指导原则虽然没有详细规定应该怎么做临床,但是基本原则还是参考欧洲那边的,简化的临床试验,不需要做II期。
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 细胞亚克隆问题 828天前
    是悬浮细胞还是贴壁细胞,起码说一下细胞的名字吧。一般细胞亚克隆的克隆率与很多因素相关,尤其是悬浮细胞,无血清条件下单个细胞很难生长形成克隆,方法的话,可以采用半固体培养基或者增加铺板的数量。还有一个公司有一个很特殊的装置,可以通过一个滤网增加饲养细胞,为单细胞生长提供生长因子。
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 信号肽酶可以体外切割吗? 828天前
    蛋白酶的特异性没有DNA酶特异性这么强的,如果通过体外蛋白酶切割一定会引入更多的异质性。引入新的工艺,整个切割反应条件的控制和验证,别自找麻烦了
  • shayatou1983
    shayatou1983  的帖子被加了1分 837天前

    回复:治疗性生物制品的最近几年的发展趋势及分析----征集案例及讨论

    双特异性抗体应该是版主列举的这几种抗体中门槛最高的,其实并不是把看似相关联的两个靶点做成双特异性抗体这么简单,不同于抗体的联合应用,双特异性抗体两个靶点可能处于不同的细胞,如何利用一个抗体来把两个地理位置不同的靶点联合起来,需要用脑袋来从机理上思考。 另外,之前遇到的一...
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 治疗性生物制品的最近几年的发展趋势及分析----征集案例及讨论 837天前
    双特异性抗体应该是版主列举的这几种抗体中门槛最高的,其实并不是把看似相关联的两个靶点做成双特异性抗体这么简单,不同于抗体的联合应用,双特异性抗体两个靶点可能处于不同的细胞,如何利用一个抗体来把两个地理位置不同的靶点联合起来,需要用脑袋来从机理上思考。 另外,之前遇到的一个老师曾经说过,双特异性抗体的体内药效学评价和临床的设计是很有挑战性的,目前一个PD-1靶点的体内药效学都做不好,再加另外一个靶点,真是要崩溃了。另外,临床试验中,有效性比较采用什么做对照呢,分别和两个靶点的单药比较?   不过呢,但从药学角度,我听国内一个很大的CRO说,他们的双特异性抗体抗体的一直进展的不是很顺利
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 抗体原液稳定性研究 841天前
    原液是纯化后放在缓冲液的抗体吗?我怎么感觉应该是加了辅料的的最终制剂液体呢?后面可以直接灌装也可以冻干。原液和制剂的储存容器和条件都不一样,中试的时候是有可能把原液冻存在-80度,然后再一起灌装的。    
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 生物类似药临床试验 842天前
    是的啊,你可以查一下,在欧盟和美国已经上市的类克,在欧盟是做了 I期的PK  和III期的有效性比较研究,而PK是最敏感的。后来在美国上市,先做了一个I期的桥接试验,没有做三期,直接就上市了。中国也是这样的,已经有几个类似药正在进行III期比较研究,也是没有做II期的
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 生物类似药临床试验 842天前
    目前是只要I和III期 ,而且基本上不需要
  • shayatou1983
    shayatou1983  回复了帖子 求助,为什么PD-L1的用量要比PD-1大得多来着? 863天前
    可以先看1期临床的数据,应该会有剂量爬坡的数据,基本上II/III的给药剂量都是在根据I期的结果

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