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丁香客

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  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 WB常见问题 41天前

    本人已是科研狗一枚,奈何WB总是跑不好。总是糊掉,思来想去找不到具体的原因在哪里,所以来各位有经验的战友看能不能给分析一下。是胶配的不好了,还是我对我的膜不友好了,还是转膜的问题?谢谢各位!

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个只相差26bp的片段? 114天前
    您好,我想问一下,这个和跑蛋白的设备是一样的是吗?还有配胶的板子和梳齿,多谢啦
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个只相差26bp的片段? 114天前
    Thank you very much.I will try it as your advise.
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个只相差26bp的片段? 114天前
    你好~您说的这个就是用普通的琼脂糖是吗?请教您一下,这个胶大概能配到多大的浓度?我看我们课题组的一般3%差不多就算高的了~
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个只相差26bp的片段? 114天前
    多谢啦,我们实验室是用的琼脂糖凝胶电泳,PAGA电泳我查了一下,是聚丙烯酰胺电泳,设备和琼脂糖凝胶电泳好像不一样了,还有那个配胶用的玻璃板和梳齿,想问一下这个得有专门的一套设备吧?
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个只相差26bp的片段? 116天前

    IRE1a被激之后,其核酸内切酶会剪切XBP1,产生XBP1s,XBP1为473bp,XBP1s为447bp,想证明这个结论。文献中能跑的开。自己尝试过2%的胶,100v,30min;3%的胶,80v,40min,;3%的胶,100v,50min,1%的胶,引物和扩增温度都摸条件了,都没有跑出来。请教大神们,怎么才能跑得开这两个条带啊?我是不是得用那种特殊的琼脂糖啊?还有扩增产物应该稀释一下吗?感觉还是会跑不开。附图如下。

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 DNA电泳条带分不开 116天前
    你好,楼主,请问你换了什么琼脂糖,我的PCR产物只相差26个碱基,之前换了胶的浓度和时间都不行
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 wb孔道里为何有胶状物 139天前
    dxy_zhpkaule 我师姐最近也是,但是她后来排除了一下发现是配胶的时候哪个试剂变质了,然后借了一下别人的重新配之后就没这个问题了,你可以排查一下好的好的~多谢~
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 WB胶孔里有胶块或者胶丝 144天前
    leeyang000000梳子不干净,或者梳子太干,或者梳子变形;梳子插晚了,浓缩胶稍有凝固;板子不干净。自己极少出现这种问题,看到别人出现这种问题,我感觉是制胶太墨迹,插个梳子插半天,插好后不放心总是左右挪或者往下按,导致玻板和梳子之间出现缝隙,胶渗进去然后凝固,导致孔里面出现残胶。 当然不排除试剂出现问题,但是见过第一次孔里出现残胶,第二次同一批试剂重新做,用同样板子梳子不出现残胶。所以个人觉得手法问题可能性大。好类~当时是插梳齿的时候梳齿掉了所以又赶紧吹干插的,但是没有来回晃动,的确应该注意一下~多谢~
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 WB胶孔里有胶块或者胶丝 145天前
    谢谢~
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 WB胶孔里有胶块或者胶丝 145天前

    最近跑ip样品总是遇到孔里不干净的情况,有胶丝或者胶块,用注射器也无法拨不开,想弄清楚这是什么原因造成的。想起以前也遇到过分离胶最顶端出现波浪线的情况,同样不知道什么原因。有大神知道怎么回事吗?

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 wb孔道里为何有胶状物 145天前
    请问楼主您这个问题后来解决了吗?最近跑IP样品总是出现这样的问题,很头疼。是不是AP太久了?
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 双磷酸化蛋白 306天前

    请教各位大神大家好,本人科研小白一枚。有几个问题一直萦绕在心头想不明白。想请教各位大神,希望大神们可以指点一二~1.双磷酸化蛋白的两个磷酸化位点是同时被磷酸化的吗比如MKK4,MKK72.双磷酸化蛋白可以用单磷酸化位点的抗体去检测吗?3.如果双磷酸化蛋白可以发生单磷酸化,那么,用双磷酸化的抗体可以识别到吗?

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 双磷酸化蛋白 306天前

    请教各位大神大家好,本人科研小白一枚。有几个问题一直萦绕在心头想不明白。想请教各位大神,希望大神们可以指点一二~1.双磷酸化蛋白的两个磷酸化位点是同时被磷酸化的吗比如MKK4,MKK72.双磷酸化蛋白可以用单磷酸化位点的抗体去检测吗?3.如果双磷酸化蛋白可以发生单磷酸化,那么,用双磷酸化的抗体可以识别到吗?

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 双磷酸化蛋白的磷酸化位点问题 306天前

    请教各位大神大家好,本人科研小白一枚。有几个问题一直萦绕在心头想不明白。想请教各位大神,希望大神们可以指点一二~1.双磷酸化蛋白的两个磷酸化位点是同时被磷酸化的吗比如MKK4,MKK72.双磷酸化蛋白可以用单磷酸化位点的抗体去检测吗?3.如果双磷酸化蛋白可以发生单磷酸化,那么,用双磷酸化的抗体可以识别到吗?

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 非小细胞性肺癌转染的易行性。 435天前

    之前做非小细胞性肺癌A549和NCI—H460转染效率相差很大,希望找到其他的转染效率较高的非小细胞性肺癌细胞株,查文献有H1975和PC9,有没有有经验的大佬们给点建议~

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 向大家推荐一个四环素诱导表达系统。 684天前
    我想问一下,这种多西环素诱导的表达载体与平常的载体相比有什么优点,谢谢,
  • sharing_lmm
    sharing_lmm  发布了新帖 天然产物药理活性调研 728天前

    一般采用什么方法调研某一天然产物可能的药理活性及作用机制。求大神指点,谢谢谢谢~~~

  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 一个肺癌瘤状物,在检测的时候怎样才能只检测到肺癌组织 729天前
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  • sharing_lmm
    sharing_lmm  回复了帖子 一个肺癌瘤状物,在检测的时候怎样才能只检测到肺癌组织 731天前
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