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【求助】重组蛋白纯化

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【求助】Purifier 电导率仪的校正

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【求助】质谱分子量偏大,测序没有信号是什么原因

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  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 mAb DSC图谱解析! 80天前
    对,我们做的都是单抗。之前有篇文献中有人总结过,但是一时想不起来了,抱歉。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 抗体片段在稳定性考察中生成的原因分析 134天前
    这个结果是你们自己做的实验还是有相关文献?可否分享下,谢谢
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 单抗产品,非还原CE下降超快 135天前
    SEC、CE-SDS的结果不完全对应倒是比较正常见的现象,但是像你这种差异太夸张,SEC一点变化没有?贴个SEC的比较叠加图看看?
  • rudy668
    rudy668  的帖子被加了1分 164天前

    回复:迎接2019年,推荐文献活动

    抗体亚型、不同结构域对抗体阳离子层析过程中不可逆聚集产生的影响
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 迎接2019年,推荐文献活动 164天前
    抗体亚型、不同结构域对抗体阳离子层析过程中不可逆聚集产生的影响
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 如何处理上游的坑? 171天前
    结构分析部门以及制剂开发部门及早介入分子筛选过程,通过分析及稳定性评估帮助筛选出高质量、高稳定性的分子是解决问题的重中之重。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 生物制品中病毒清除/灭活验证工艺交流贴 173天前
    目前国内大多数的做法应该都是不加病毒做预试吧,加上病毒的话成本太高了。除非预试的结果可以用于申报,后续的中试样品不再做验证
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 179天前
    现在我们碰到一个问题,IgG4的项目,在阳离子层析和UF/DF过程中,一旦浓度较高(差不多大于20mg/ml)就易产生聚集,尝试了下添加精氨酸有一点改善,但还是不够显著,请问各位大神有没有碰到类似的情况?
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 IgG4单抗,R-CE-SDS检测异常 179天前
    借楼问下,有没有碰到在样品在制备过程中(阳离子层析和UF/DF)聚体增加的现象?是IgG4的项目
  • rudy668
    rudy668  的帖子被加了2分 179天前

    回复:三批收获液是哪个阶段的收获液?

    这个是我们目前几个项目的做法,供参考。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 三批收获液是哪个阶段的收获液? 179天前
    这个是我们目前几个项目的做法,供参考。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 186天前
    这个也是我最近在想的一个问题,我的认为应该还是样品序列或者结构本身的问题,存在易聚集倾向,所以在分子筛选阶段,活性基本确定后,应花更多的时间在稳定性考察方面,及早排除一些不稳定的分子。当然也不排除制剂的处方还不够优化,需要有进一步的调整。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 186天前
    因为这个项目的聚体是非共价产生,关键是还可以恢复成有活性的单体,比较特殊,所以对收率没有太大影响。不过有另外一个抗体项目,聚体20%-30%,折腾了一堆工艺,包括阳离子、疏水等工艺,最终得率确实很低。所以尽可能还是在上游解决,甚至是更上游的构建解决才是根本。
  • rudy668
    rudy668  的帖子被加了1分 186天前

    回复:Fc重组融合蛋白的聚体现象

    聚体产生的两大主要分类楼主已经分析总结的比较到位了,我们之前碰到一个重组蛋白项目(HSA融合的,毕赤酵母表达),表达出来也存在聚体(非共价)比较高的现象,当时由于上游工艺已经确定了,主要从下游进行解决。1.在第一步层析时增加预洗(好像是70%乙醇);2.收集的峰进行42℃水浴1-...
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 186天前
    聚体产生的两大主要分类楼主已经分析总结的比较到位了,我们之前碰到一个重组蛋白项目(HSA融合的,毕赤酵母表达),表达出来也存在聚体(非共价)比较高的现象,当时由于上游工艺已经确定了,主要从下游进行解决。1.在第一步层析时增加预洗(好像是70%乙醇);2.收集的峰进行42℃水浴1-2小时可以进一步将聚体恢复成单体,且活性不受影响;3.调节样品pH值(8.0→6.0,时间久了记不太清)。
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 阿瓦斯汀(Bevacizumab,Avastin)的聚体分析比较特殊,有什么含义 191天前
    明白。那这样的话,是不是外推到每个单抗项目都应该做个这样的验证呢?
  • rudy668
    rudy668  发布了新帖 处方专利咨询 193天前

    求助各位大佬,       咨询一个关于专利的问题。有一个产品是国外某药的类似药,但是新增了一个剂型在国内没有报批,但有处方专利,能否采用专利中的组分但是摩尔浓度不一致,或者在专利处方基础上新增一个辅料,这样算不算侵权?求专家指点。

  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 从国外的一个Avastin生物类似物案例看国内外研究差异 193天前
    这个是不是可以理解为,原研买到手的时候效期已经过去半年,那么做对比研究时,我的样品也要先放上个半年再进行对比研究?期间原研先-80℃保存,作为一个时间冻结?
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 阿瓦斯汀(Bevacizumab,Avastin)的聚体分析比较特殊,有什么含义 193天前
    250μg这么高的上样量分辨率能达到比较好的分离要求吗?我们一般都是50μg的进样量,太多了峰会变胖的吧
  • rudy668
    rudy668  回复了帖子 抗体收获阶段及存放阶段被还原探讨 198天前
    DS颜色异常,有没有分析IEX?酸性比例会不会增高了?如果是的话大多是培养基中的VB和Fe离子含量的影响,可以考虑加点抗氧化剂试试

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