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  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 千万不要在Abmart定制抗体,简直是骗子! 10天前
    抗体定制请认准武汉戴安生物技术有限公司,位于武汉光谷生物城生物技术研究院,是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业,公司成立于2015年,专注于抗体产品和诊断试剂的研发和技术服务工作。为科研院校及诊断公司提供高质量抗原、抗体及多克隆抗体和单克隆抗体定制,药物阻断用中和抗体筛选等技术服务。武汉戴安生物的单抗制备技术、中和单抗细胞株筛选技术及抗体人源化测序及表达技术在华中地区达到一流水平,技术服务又好,欢迎咨询抗体定制销售经理小冉 service@dia-an.com,谢谢!
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 求帮助,寻找抗体 325天前
    Cse的抗体您参考楼上朋友的就可以,目前能用于免疫组化的抗体是没有的,都是WB和ELISA的,能适用于IHC的抗体需要制备。如您有需要可以联系我,我公司专业定制抗体
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 想给植物基因加3xflag标签 具体怎么加 354天前
    我们就有3xflag的抗体!另外朋友你是不是弄错了,Flag有1x,2x,3x的这三种。氨基酸序列你也可以查查,不分动植物的。每种对应的抗体也是不同的,看你需要那种
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 affinity的抗体真的不要买 354天前
    这。。。。。他们这么吭?这个品牌见的不多
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 IgG纯化后的保存问题 354天前
    可以
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 17KD分子量的蛋白 354天前
    这个是你剪的膜么,条带是可以看到的发现没,背景2太深了,建议封闭不用牛奶用tbs,一抗也用tbs稀释,洗膜多洗一遍,看看能不能有改善
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 小分子WB需要戊二醛固定吗? 354天前
    没试过,小分子也有做呀,用的PVDF膜,其他我觉得还好吧,你把你实验条件说下
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 (急)关于兔源多克隆抗体的制备 354天前
    没懂你的意思呢,你是剂量不清楚还是其他的,重组蛋白质和佐剂是1:1乳化混合的,一定要乳化好,乳化效果检测我们一般放4度静置一夜看是否分层,没分层的OK。至于免疫的剂量每个公司都是不同的,看你实验室之前怎么做,或者问卖给你佐剂的厂家我是做抗体的,有问题可以沟通
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 求助 请问偶联KLH-多肽可以在-40°保存多久呢? 354天前
    看是什么状态的,如果是干粉,放在-40可以保存数年,要是溶解的液体多肽,这个没有冻干粉稳定,最好不要超过1个月
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 请教 叶酸溶于pbs吗 357天前
    ?????
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 求各位大神解答,wb之前一直做的挺好,最近做了4-5次了,都是一个样子,条带白,背景黑 358天前
    看样子应该不是抗体的问题,一步一步来检验哪里出问题了,在做一次转完膜丽春红染色看看有没有转上另外曝光你怎么曝光的,胶片还是电脑系统?反应跟以往做一样吗,上图看看吧,做的时候按照你以往的条件,试剂也不知道那个是不是有问题,新配一个吧
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 WB显影老是有杂带是为什么 358天前
    杂带跟蛋白的处理,还有抗体关系大,你这个靶标的抗体abcam有文献吧?你可以看看别人的结果先,看是不是一样的。 蛋白质的处理你自己看啦,裂解的是否充分,跑page胶检测的呢
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 WB 之 tris8.8 ,tris6.8 傻傻分不清楚 358天前
    在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HC缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而Cl离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随Cl离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。感觉不太妙哟话说你结果出来了吧,看看呀,没加错过
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 WB 之 tris8.8 ,tris6.8 傻傻分不清楚 358天前
    在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HC缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而Cl离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随Cl离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。感觉不太妙哟话说你结果出来了吧,看看呀,没加错过
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 elisa做单克隆抗体亲和力的NaN3可以用什么替代 362天前
    Proclin300用的更多,就是有些贵  硫柳汞也可以,叠氮化钠禁了是挺麻烦的
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 wb求助 363天前
    少了一条,闻所未闻呀,你上样量是不是少了不清楚呀,你加大上样量试试
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 做WB时可以同时检测多种蛋白质吗? 363天前
    你是说你的蛋白样品里包含几种目的蛋白质?现在准备做完一个的在做下一个,是可以的,有种东西叫做一抗二抗去除液,先孵育这个,再正常孵育一抗二抗,不过可能封闭会有影响。方法可试试
  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 求抗鸡FSHR抗体(一抗) 371天前
    楼主找到了么
  • rankaikai319
    rankaikai319  发布了新帖 蛋白质可溶性表达及纯化方法 371天前

    蛋白质可溶性表达及纯化方法1、将测序正确的质粒转化宿主菌(常用 BL21 DE3),过夜培养后,挑取单菌落,于 小试管内进行 IPTG 诱导实验,即 37℃培养至 OD600 为 0.6 后,加入 1mM  IPTG,37℃ 继续培养 3h。将全菌液收集后破碎, SDS-PAGE 电泳检测,选取表达量高的单菌落进 行大量表达。 2、将含少量接种至 200ml 抗性 LB 培养基中,37℃振荡培养过夜, 次日加入新鲜抗 性培养基至 800ml, 37℃培养至 OD 为 0.6。加入 200ul 的 1M  IPTG(28℃或 37℃ ) 诱导培养 3.5h。 3 、离心收集菌体,6000g 离心 10min。将菌体悬浮于相应的裂解缓冲液中,洗涤一次, 6

  • rankaikai319
    rankaikai319  回复了帖子 正在制备二免小鼠的蛋白,纯化一段时间后得到的蛋白浓度测量1.15mg/ml左右,可是检测时候sdspage和wb条带很浅/暴膜没有条带结果很差,这是为什么? 372天前
    我都不会在原来帖子下回复。。。。。那你现在的问题是蛋白呀,机器测浓度挺高的,反应在跑胶上条带却很浅,忽高忽低的????是BCA法测的浓度吧,那个是总蛋白的浓度不是目的蛋白的浓度,原本都会偏高,我们实验室同事都是以跑PAGE胶的为准,你这纠结的。。。关于测浓度你再请假你师兄师姐吧

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