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【求助】拒稿后可以再投同一个杂志吗?

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【求助】NIH postdoc

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【求助】关于SDS-PAGE溴酚蓝的问题

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  • proteochen
    proteochen  的帖子被加了1分 344天前

    回复:什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加?

    xuecheng1986 非常感谢大家的讨论!大部分是氧化造成的!正如我之前所猜想的,确实是Met氧化导致碱性峰增加^_^。另外,加两句题外话:1)从化学角度来看,Met氧化并不会导致抗体净电荷的变化。碱性峰增加的原因,其实是由于Met氧化导致分子构象的变化,与CEX发生相互作用...
  • proteochen
    proteochen  的帖子被加了1分 344天前

    回复:什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加?

    jackieustc提醒的对,对这个东西的鉴定要非常注意,容易处理引发鉴定不准确,确实有多个文献提出防止再变化。    别的PTM可能还好,但对于Asp形成5元环的鉴定要特别注意过程变化带来的影响,另外就是N端Q的问题,要防止酸性过程中变成pE带来的假相。欢迎...
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 天平内部校准需要遵循国家计量规程吗 966天前
    这个比较复杂,应为涉及到GMP阶段、实验室内控标准、工艺重要性等,你可以咨询天平厂家。对于一般QC实验室来讲,一个简单的办法就是直接设定误差为0.1%,一般问题不大,后续再进行改进。但日校、月校和季校的项目会有不同。上图是日校,所用砝码需经计量局检定,W1和W2需要全覆盖实验室试剂称量范围,误差为0.1%。月校的话,还会涉及灵敏度、偏载、线性、重复性等项目,可查询国家相关指南。
  • proteochen
    proteochen  的帖子被加了1分 967天前

    回复:天平内部校准需要遵循国家计量规程吗

    《中华人民共和国强制检定的工作计量器具明细目录》:“凡有于贸易结算、安全防护、医疗卫生、环境监测的,均实行强制检定。”QC实验室用的天平属于国家强制检定器具,必须由有相应资质的国家机构或者授权机构按照计量规程进行检定。检定具有法律效力,是强制性的,没得商量。pH计、压力表、密度仪...
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 分享生物类似药新书:Biosimilars and Interchangeable Biologics 967天前
    感谢楼主分享!
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 天平内部校准需要遵循国家计量规程吗 967天前
    《中华人民共和国强制检定的工作计量器具明细目录》:“凡有于贸易结算、安全防护、医疗卫生、环境监测的,均实行强制检定。”QC实验室用的天平属于国家强制检定器具,必须由有相应资质的国家机构或者授权机构按照计量规程进行检定。检定具有法律效力,是强制性的,没得商量。pH计、压力表、密度仪等也属于这个范畴。仪器校准的对象一般是属于强制性检定之外的测量装置,包括自校、外校,或自校加外校相结合的方式进行。对于天平来讲,实验室进行的内部校准一般包括日校、月校、季校,只是作为日常确认天平是否符合实验室要求。因此,楼主需要:(1)找国家计量局进行检定;(2)找厂家定期进行校准和性能确认(每半年或一年);(3)实验室也需要日常内部校准(每日/周/月/季度)。
  • proteochen
    proteochen  的帖子被加了1分 971天前

    回复:单抗药物强制降解实验

    首先,强制降解还是比较容易导致产品不合格的。比如对于一般抗体来讲,40℃条件下放置2周,一般聚集体可达到2%左右。对于方法开发来讲,一般建议接近产品不合格,这样才表明你的方法具有一定的代表性,即特异性/范围/精密度等符合“不合格产品”的实际情况。处方筛选就无所谓了。对于预测降解途...
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 977天前
    哈哈,使劲砍呗。基线到基线,或者峰谷到峰谷。一般后者有利于使纯度比较高。。怎么选择,想就知道怎么回事了。。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 单抗药物强制降解实验 977天前
    首先,强制降解还是比较容易导致产品不合格的。比如对于一般抗体来讲,40℃条件下放置2周,一般聚集体可达到2%左右。对于方法开发来讲,一般建议接近产品不合格,这样才表明你的方法具有一定的代表性,即特异性/范围/精密度等符合“不合格产品”的实际情况。处方筛选就无所谓了。对于预测降解途径,因需要制备比较多的杂质/降解产物用于鉴别或其他目的,可考虑适当增加强制降解的时间,以便制备足够的样品。但不建议超过5-15%。附上WHO的一般建议:
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 978天前
    正如我之前所猜想的,确实是Met氧化导致碱性峰增加^_^。另外,加两句题外话:1)从化学角度来看,Met氧化并不会导致抗体净电荷的变化。碱性峰增加的原因,其实是由于Met氧化导致分子构象的变化,与CEX发生相互作用的表面电荷发生了改变。2)楼主如果有意深入研究的话,容易发生Met氧化的位点是:IgG1 Fc (Met252, Met358,Met428)或IgG4 (Met249, Met355,Met425),来自个人数据以及文献数据^_^。3)楼主上述的诱导试验应该是用的常见的H2O2。其实也可以改用别的氧化剂,比如tBHP、AAPH等,不同的氧化剂具有不同的氧化特异性和氧化能力。希望大家可以多多补充关于抗体氧化研究的宝贵经验,谢谢。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 病毒灭活/去除的灭活流程 992天前
    请教一下,你提到的原材料检测,指的是用于中试申报样品的生产用的原辅料(比如发酵纯化用的试剂),都要进行病毒检测?貌似不太现实。对于国内企业来讲,能乖乖做完理化检测就不错了。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
     同意这个理解,按照这里理解看文献没问题。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
    发的文献相当经典,学习了,谢谢。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
    怎么感觉看着有点晕乎?这个论文是不是有的地方写错了?
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
    说的非常有道理。确实分析样品的处理过程导致artificial modification,容易引起假象。比如在碱性条件下,Asn容易变为Asp,所以现在很多研发机构建议酶切pH由8.3 (NH4HCO3)改为pH 6.0(我们目前还是依旧用NH4HCO3,哈哈),以防止脱酰胺假象,再者也可稳定上述的succinimide,便于质谱检测。但带来的问题,如你提到的pE问题。但是从另一方面也说明,如果蛋白容易发生因样品处理而导致artificial modification,是否意味着这个蛋白本身就不太稳定?不是一个很好的candidate?
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
     嗯,succinimide是个过渡态,会按照3:1变为Asp和IsoAsp。目前多个文献报道succinimide能在弱酸性条件(pH=6)稳定存在,还是能检测的到的。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
    期待楼主后续的更新。
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加? 993天前
     你猜楼主应该说的是Asp脱水形成succinimide,导致碱性峰增加。Asp发生Isomeration(IsoAsp)本身不会改变电荷形式。
  • proteochen
    proteochen  的帖子被加了1分 993天前

    回复:什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加?

    亲身经历告诉你,很大可能是氧化造成。解决办法:1)重新开始处方筛选,加入Met或者其它抗氧化剂。2)氧化处理这个样品(如H2O2),以增加氧化比例,利用LC-MS确定各个氧化位点的发生比例,找出Top易氧化位点。3)考察氧化是否影响活性和/或PK,以确定Oxidation是否为C...
  • proteochen
    proteochen  回复了帖子 生物制药CRO和CMO收集汇总 993天前
    金斯瑞,做过人源化,成功过1个,另一个正在弄。相比国内Wu*i,收费还算合理。

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