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【求助】菌液PCR鉴定

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【讨论】启动子的研究

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  • luoqq1985
    luoqq1985  的帖子被加了1分 851天前

    回复:【求助】什么软件可以预测调控某基因的miRNA?

    如果你只做3‘UTR区的现在的在线软件大多都是针对3’UTR的(TargetScan、miRANda、pictar、miRbase、Microcosm Targets)等,但由于针对的位置有出入,和分析算法不一样,你会发现预测出的结果还是有差异的!!我现在也在做分析某一个基因的可...
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 小鼠原代肝细胞分离与培养 1268天前
    你好,楼主,找了半天终于找到一个成功的例子。恭喜你,我的问题不是不贴壁,而是percoll离心完后沉淀很少,或者几乎不沉淀。我也是半年前做了这个原代取材,当时看别人做了一次然后就自己按照步骤摸索着做。记得很清楚,当时做了3只老鼠,前2只都是灌流失败,第三只成功了,用percoll离完,底部都是沉淀,当时种了6块6孔板。第二日看形态如你的照片,甚是欢喜。可是。。。。。。。。。。。。这就是昙花一现,后来再也没有这么多细胞,有时候percoll离完,底部几乎没有沉淀,全漂在上层,我所有的东西材料都没有换。当时想可能是冬天,天气冷,酶温好了拿出来就降温了,心想那就等天暖和点再做,最近又开始做了,还是一样的问题,percoll离完后沉淀特别少,一只老鼠的肝种一块6孔板就谢天谢地了。真的很折磨人,不知道
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 肝细胞 PERCOLL 1268天前
    你好,我也是遇到这个问题半年了。半年前,第一次摸索着做,做了三只老鼠,第三只成功了,percoll离心后细胞都沉淀在底部,当时种了6块板子。。。。。非常完美。后来就再也不行了。。一般也就一只鼠种一块了,有时候percoll离心完,底部一点细胞都没有。不知道哪里出了问题,是消化过度了吗???为社么离心后都在上层。我做的过程中感觉只要沉淀不是很紧实,基本percoll离心后就没什么沉淀。请知道的大侠出来给指导一下,我搜索技术贴都没找到满意的答复。
  • luoqq1985
    luoqq1985  : HL-7702正常肝细胞系与肝癌细胞的区别 http://dxy.me/bUf6Bb 本人是做缺氧的,由于肿瘤细胞在低氧下有一定的增殖,对实验产生了一定的影响。所以想寻找一个能够不受低氧影响的正常细胞株。之前用的是HepG2,最近听朋友推荐说肝的正常细胞株HL-7702可以试试,...
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 chip-seq 2743天前
    我觉得 没有必要了
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 求解cdna 的pcr结果 2743天前
    测序问题排查过没有???因为800以内的测序是比较准的,以上就难说了,是不是在测序的时候打散的问题??所以最后拼接时出了问题???多测2家看看
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 ubiquitinate应该怎么翻译? 2743天前
    泛素化,说的是蛋白降解过程中的必要的一步,就是要给被降解的蛋白在连接酶的作用下连接上泛素,才能被降解。
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 有关miRNA Real time PCR的问题 2743天前
    我也是刚涉及做miRNA,不过对PCR倒是很熟了,如果你担心是因为U6的反转录引物与目的miRNA的特异颈环引物有竞争的话,可以试着降低U6的浓度,升高特异的miRNA的颈环引物浓度,但是二者的度就需要试验去探索了。这样就可以解决分开做又担心转录效率不一致了。
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 做了5个月WB,什么结果也没有——是不是很悲催 2743天前
    GAPDH做不均的话,应该是你蛋白定量不准或是你上样太粗糙了。至于目的蛋白做不出的话,可能是抗体原因,也可能是你发光液的问题或是显影的问题,任何一步出问题都直接影响最后的结果,建议好好检查自己所用的试剂,精化步骤。
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 为什么转膜蛋白总是转不上去 2743天前
    检查PVDF膜的激活情况,检查转膜缓冲液是否新鲜,PH值对不对,再者看你转膜蛋白的分子量,是否时间太短?还有转膜时的温度。
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 pvdf膜不用甲醇处理行不行 2743天前
    不行,甲醇是激活PVDF膜的,这样才可使膜带上正电荷,在转膜时通过与蛋白的负电荷异性相吸的作用使蛋白结合到膜上。
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 RNA-seq 的基本原理 2744天前
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 请问有做过基因芯片的朋友吗 2744天前
    我也准备做呢,这个找生物公司即可了。我想你做的大概是要比较转录组的表达差异吧??很简单,联系一家生物公司,选择好物种的芯片,目前人和鼠的芯片应该是比较全的,然后自己处理自己的细胞,按照要求提取样品,寄往公司即可啦。
  • luoqq1985
    luoqq1985  : 特异性磷酸化CREB的Ser-133的试剂 http://dxy.me/Eze6nm 本人想研究高表达pCREB对目的基因上CRE的结合活性,目前已获得CREB高表达质粒和含CRE的报告基因质粒。但是CREB必须磷酸化才有活性,目前知道PKA、PKC等均可磷酸化CREB,但是没有...
  • luoqq1985
    luoqq1985  : 特异性磷酸化CREB的Ser-133的试剂 http://dxy.me/rmeEVj 本人想研究高表达pCREB对目的基因上CRE的结合活性,目前已获得CREB高表达质粒和含CRE的报告基因质粒。但是CREB必须磷酸化才有活性,目前知道PKA、PKC等均可磷酸化CREB,但是没有...
  • luoqq1985
    luoqq1985  : 特异性磷酸化CREB上Ser-133的试剂 http://dxy.me/FRbiaq 本人想研究高表达pCREB对目的基因上CRE的结合活性,目前已获得CREB高表达质粒和含CRE的报告基因质粒。但是CREB必须磷酸化才有活性,目前知道PKA、PKC等均可磷酸化CREB,但是没有...
  • luoqq1985
    luoqq1985  回复了帖子 什么软件可以预测调控某基因的miRNA? 2756天前
    如果你只做3‘UTR区的现在的在线软件大多都是针对3’UTR的(TargetScan、miRANda、pictar、miRbase、Microcosm Targets)等,但由于针对的位置有出入,和分析算法不一样,你会发现预测出的结果还是有差异的!!我现在也在做分析某一个基因的可...

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