登录| 注册

丁香客

选择模板

更多 发表的帖子

3324

浏览

【原创】SK-BR-3细胞-交流

回帖:6    收藏:5    投票:2

983

浏览

【求助】北京各细胞实验室求助-硒酸钠

回帖:0    收藏:0    投票:0

728

浏览

【专题讨论】sf9 sf21昆虫细胞替代培养条件摸索

回帖:1    收藏:0    投票:0

更多 最新动态

  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 请问吹散细胞力度过大是不是会降低转染效率? 6天前
    工业使用是加进去就可以,看文献报道还要去除这个成份。很难吹散,您就拿捏轻重,或用低浓度胰酶,细胞离心后加些消化下,看看能否解决。还有个思路在统计验证中(免疫细胞也是这个特性)解决思路是,固定体积下,细胞尽量长满后,细胞会散开(上清回输也有功效。可以拿个12.5的瓶子试下。理由是细胞所需成份紧缺。特别是新传代后,团聚厉害。后面长满后,所需成份饱和。临床免疫细胞培养老师也认可这个方式。您可以试试。要有效果,通知我下,我统计用
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 请问吹散细胞力度过大是不是会降低转染效率? 7天前
    会的,会影响细胞质量,您可以不转染,只进行传代观测。吹打力度大与较轻柔处理差别挺大的。cho有专门的细胞分散试剂.您可以用用看,小规模实验还是建议轻柔处理方法较好。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 求助,哪位有ccc-hel-1细胞 11天前
    这只是协和库做的,最好用他们库全套试剂,代数应该跟他们养的差不多,
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 如何让悬浮jurkat细胞驯化成贴壁培养 15天前
    常见方法费时,慢慢筛出着床快的一代一代的传下去。文献有提到粘连蛋白方式(这个试剂贵,保存负20度)操作难度挺大的,费用高昂,重复实验难度挺大的多聚赖氨酸方式,细胞不代谢,对细胞损伤挺大的,代数有限(固定细胞还可以,筛选细胞不太适合)可以PM我,给您些建议参考。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 悬浮细胞 16天前
    无血清培养基中的一些小缺陷,建议用大牌子的无血清调整。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 流感病毒空斑试验的问题!求助大神! 18天前
    最近统计了下噬斑实验。细胞毒也可以出噬斑,也无需35度提些建议:全部试剂耗材都要进口的,两乘DMEM无酚红琼脂糖一定要低熔点的原装进口的。如果流感病毒噬斑试验对病毒毒株没有要求,仅是用流感病毒作为实验模型,建议使用参考文献中所用毒株如WSN株。TPCK处理胰酶一定进口的,MDCK细胞终浓度建议2ug/ml。浓度1ug与2ug区别在于您细胞细胞贴壁强度是怎样的,促贴壁就是增强细胞贴壁,加强病毒感染细胞。后面才有更好的效果。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 请问有养过Nthy-ori 3-1的吗?不知道哪个公司靠谱,有推荐吗?跪谢!! 21天前
    估计只能找ECACC了,SV40基因转染的细胞特性我们常年统计,细胞要找到了,我们可以交流下培养细节。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 人原代细胞的组织来源渠道有哪些 29天前
    建议ATCC,lonza等大公司来源都还可以,代数有限,细胞量较少。培养成功案例不多,养顺利难度大。费用较高。进口手续繁琐。国内实验室建立我觉得现在挺合适的,技术、设备、方法都很成熟了。需要反复验证。目前从国外技术水平来说,技术应该非常成熟(后面几年估计会有很多国内实验室细胞出来),国内能拿到这些技术难度也很大,整体核心都在国外。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 坐标昆明,求人正常肝细胞 LO2,WRL68,THLE-2,THLE-3任意一种 40天前
    L02鉴定有问题,THLE-3培养过程问题非常多,如果遇到以下问题可沟通(建议细胞来源明确)我们暂时根据THLE-3 细胞公布的信息列出一些注意事项。THLE-3 细胞 原代正常肝细胞经sv40大t抗原感染而获得--几点建议消化:不要有机械力 化学作用让细胞消化散  我们统计胰酶只有少数能达到这个要求 这点不知是否有注意到分析配方建议是:3170+fbs我们在其他几株原代上皮有应用确实能解决问题 ATCC列出这个配方说明他们也存在很难的增殖情况才加血清方案解决关于贴壁:我们意见是这只细胞也是像293T(sv40大t抗原)一样转染的大T抗原 这只也有贴壁不牢的问题 更为严重  所以用很多铺板试剂 类似案例我们解决过LMH(sv40大t抗原)细胞 这只要用明胶 我们替换其他方案解决的,ATCC这
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 求MCF10A细胞 40天前
    问下上海或协和库吧?难养的细胞公司一般负责不了售后,培养过程中问题可沟通。马血清培养与胎牛有些差别。具体问题具体分析,
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 hFOB1.19细胞培养问题求助 43天前
    不知您能否看懂我的意思:要是没有更好的方法,也可以换算出您培养体系pH 调整下试试Gibco DMEM一直是根据Dulbecco最初公布的配方制成的,含3.7g/L碳酸氢钠If the media formulation contains:NaHCO3 (g/L) 3.5, it needs CO2 at 10% .
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 hFOB1.19细胞培养问题求助 43天前
    Bone CellsAcidosis has an adverse effect on bone, causing an increase in loss of calcium. When blood pH drops below pH 7.35, osteoclast cells become activated and resorb, or destroy, bone. In bone cell experiments, a drop of pH of less than 0.1 doubled the amount of bone resorbed by osteoclasts. During normal bone remodeling, osteoclasts resorb bon
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 hFOB1.19细胞培养问题求助 44天前
    目前细胞贴壁状态不是很好: 像293细胞 建议操作轻柔或用辅助试剂促进贴壁,看看后面增值是否能改观我曾增加了血清浓度:改变不大  血清加大可能不行,建议用部分上清回输看下应该还有易成团特性,293有这个特性,建议低浓度胰酶消化散些,配合促贴壁试剂,回输上清等,摸下那个优化条件有效果Descriptions Cells grown at a permissive temperature of 33.5℃ exhibit rapid cell division(Doubling time of 36 hrs), whereas little cell division occurs at a restrictive temperature of 39.5℃(Doubling time of 96
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 大家帮忙看一下这是什么污染,着急啊!! 49天前
    您要对试剂耗材都有把我,试试轻轻操作能否减少黑点,要是零星几个,应该能有效果,要是大面积,考虑试剂与手法。要是新手,多练习试剂分装
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 组织冻存 49天前
    原代难度大,给您个思路建议,ATCC正常细胞系用DMSO从5-8%都有(倒是查过不少株,一直没找到规律,还在统计中) 具体建议您摸下条件看那个复苏更好 还建议用完全培养基上清也在摸索条件中 我们对难养的细胞有的上清液会复苏更好些,有好结果的能否回复我下,我们统计用,祝顺利
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  : freecell老师好
    • freecell  :最后面的老汉,就是被丁香园禁闭一个月的freecell。厉害了,你的锅。看看freecell一个月老得都不成样子了。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 人脐带间充质干细胞传代后细胞成球了怎么办? 52天前
    考虑胰酶浓度 建议低浓度多消化些时间 试试 应该是前面消化不散形成的后面成团结果
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 TM4(小鼠睾丸支持细胞)培养条件,细胞状态交流学习 54天前
    建议马血清按营养没有胎牛丰富思路,调整培养与冻村。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 不同培养基培养BHK-21悬浮细胞,细胞直径相差4-5微米 54天前
    可以多传几代后看下细胞质量,一两代我觉得不说明问题。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 树突状细胞(DC)培养中的几个问题 54天前
    PM您了

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客