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【原创】SK-BR-3细胞-交流

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【求助】北京各细胞实验室求助-硒酸钠

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【专题讨论】sf9 sf21昆虫细胞替代培养条件摸索

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  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 为什么我的AGS细胞长得特别慢? 6小时前
    AGS的空泡,及消化注意事项。空泡:排除试剂与手法问题,如果有空泡,建议细心点,操作慢些,避免空泡形成,少量空泡可将空泡吸出消化:避免机械力(上下摇,敲打动作都不要有,对细胞轻柔操作指这株),用低浓度胰酶化学作用力把细胞消化散成单个细胞后传代。如果那个老师有ATCC来源新到细胞,我们可沟通下,ATCC现在上不去,查不了细胞信息。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 国内靠谱卖癌细胞的公司 2天前
    上海库,武汉库保险些,协和的现在邮寄不了,保种试剂用最好的试剂,出现问题会少些,保种也踏实。具体细胞问题在论坛里找下,或来信交流先养好细胞,成瘤也是几十几百只老鼠练出来的
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 KSFM培养基含氯化钙的问题! 11天前
    培养注意:底浓度胰酶消化,不要有机械动作吹散细胞(0.25这株损伤较厉害,建议0.05左右,胰酶不用多少,大品牌必须),很多传代不顺利都是消化这步影响的。冻存建议上清冻存可试试,我们推荐这种方法。有同样效果的老师可PM我,我们统计几个实验室是这样。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 skbr3细胞长出触角 15天前
    上清回输,适合复苏后细胞较少,增殖较慢,也可以试试上清+DMSO冻存,复苏效果应该更好,正在做进一步统计,上清冻存你要试了,效果要突出,回复我下
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 skbr3细胞长出触角 15天前
    是的,消化时,低浓度胰酶,勤观察,变缩就终止。这样消化下来要还是成团成片,也得轻柔吹打成散细胞。理解后应用。上清:是的,有些细胞增殖天数太长的都可按着方法看下趋势。增殖速度有提升,就继续
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 skbr3细胞长出触角 16天前
    大神可不是,喜欢统计这些,说说我的建议您参考,乳腺癌里最好样的算是MCF-7这只了,其他都很难养。血清要能换成更好,或也可加大血清浓度,目的是营养更好一点。今后要都是这类细胞,还是费时筛选一款好用的,如果血清能将这株能养好,其他几株乳腺癌应该就都没问题了(只要是atcc或正规库来源的应该都可以,我目前统计是这样)。降低胰酶浓度,给他最小的损伤,消化时间虽然长些,可后面状态好了,对胰酶消化挑剔的细胞,最好用胰酶作用时间消化,减少敲打培养瓶或吹打习惯,培养条件很成熟后,可随意。这点时间是值得的。难养细胞传代分瓶少些,长满后1:2传,应该能增快长满时间,也可考虑上清回瓶,细胞自分必因子作用,那个有趋势好,就选哪个方案,就是费事,能养好状态的老师都很细心。注意细节关于优化说点小经验您参考,商品化培养
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 NK92细胞培养求指导 16天前
    细胞来源要对,实验室费用要充足,可以用LONZA-vivo-20加白介二替代ATCC方案或GIBCO的AIMV加白介2,没把握就ATCC方案保种后,在用我推荐方案。
  • luke_zhanghy
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 胰酶消化BEWO细胞很慢 16天前
    应该是长的慢的原因,这细胞要是长满特性天数要符合六天,还是耐心点消化(还要消化散),要是生长慢很多,建议培养试剂在筛选下。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 skbr3细胞长出触角 16天前
    生长周期多久?要是时间长,建议先考虑培养条件是否合适。低浓度胰酶,最好的胎牛,培养基新鲜,冻存前状态,
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 我的lncap细胞是变异了吗 16天前
    来源哪里的
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 HT22细胞培养技术难点 16天前
    细胞库是实体瘤或腹水,楼主来源哪里,能问下,腹水与实体瘤取出培养,如何定论是贴壁细胞还是悬浮细胞哪?
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 求助 细胞染菌 请问各位是血清的问题吗? 16天前
    空培养看下
  • luke_zhanghy
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 大鼠骨髓间充质干细胞培养过早老化问题 16天前
    过早老化细胞一碰胰酶就出现老化现象原代老化现象不老化了细胞不增殖大家都有没有解决细胞老化问题就这几个关键词:说说我统计过程中的一些经验在这株细胞中的一些看法。老化:问题能否列下细胞消化详细步骤(细胞长到多少开始消化,胰酶浓度,消化时间,是否敲打,上下旋转,靠吹散打散细胞,还是靠胰酶作用)问这些目的是,推荐靠胰酶作用,低浓度,把细胞消化散,后面状态应该会有改观。轻柔也是处理细胞要注意的地方。图一细胞为例,这个照片密的地方细胞成圆形,散的地方成梭形,如果能将细胞消化散些,均匀些,细胞梭形铺满后应该很漂亮,这种状态下细胞代数应该也很理想(只就操作手法,说说自己的看法)。细胞不增殖:影响情况相当多,主要项列几个参考,样本处理时间:要是时间很长,或不熟练,都会对样本损伤大。方法:potocol应该多篇
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 尼式 nissel 染色遇到很多问题,还有怎么统计,数细胞吗?希望大神指教 16天前
    过早老化细胞一碰胰酶就出现老化现象原代老化现象不老化了细胞不增殖大家都有没有解决细胞老化问题就这几个关键词:说说我统计过程中的一些经验在这株细胞中的一些看法。老化:问题能否列下细胞消化详细步骤(细胞长到多少开始消化,胰酶浓度,消化时间,是否敲打,上下旋转,靠吹散打散细胞,还是靠胰酶作用)问这些目的是,推荐靠胰酶作用,低浓度,把细胞消化散,后面状态应该会有改观。轻柔也是处理细胞要注意的地方。图一细胞为例,这个照片密的地方细胞成圆形,散的地方成梭形,如果能将细胞消化散些,均匀些,细胞梭形铺满后应该很漂亮,这种状态下细胞代数应该也很理想(只就操作手法,说说自己的看法)。细胞不增殖:影响情况相当多,主要项列几个参考,样本处理时间:要是时间很长,或不熟练,都会对样本损伤大。方法:potocol应该多篇
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  的帖子被加了1分 19天前

    回复:MCF-7细胞刚复苏传了一代形态就发生改变了,求大神指导

    正好统计这株,说些细节大家参考,不对处请指正,ATCC这株图片并不理想,挺丑的,因为统计这块,个人意见是,ATCC不会取最漂亮的图片,服务全球,技术差异应该很大,取这种较合适。国内培养介绍几点大家参考,血清不用说最好的,增殖不好培养基建议单加谷氨酰胺,丙酮酸钠,碳酸氢钠,会有效果...
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  回复了帖子 MCF-7细胞刚复苏传了一代形态就发生改变了,求大神指导 19天前
    正好统计这株,说些细节大家参考,不对处请指正,ATCC这株图片并不理想,挺丑的,因为统计这块,个人意见是,ATCC不会取最漂亮的图片,服务全球,技术差异应该很大,取这种较合适。国内培养介绍几点大家参考,血清不用说最好的,增殖不好培养基建议单加谷氨酰胺,丙酮酸钠,碳酸氢钠,会有效果(增殖好的状态应该能到四天长满,一比二传,生长较快,有些密度依赖,一般实验室要七天左右),养这类细胞这株算是好养的,其他这类细胞更难养,我们在交流细节。还建议底浓度胰酶消化(靠胰酶作用分散细胞,避免敲瓶或吹打)细节还想统计下不扔原液培养,是否有雌性激素依赖促进细胞增殖,难养的都可试试这种方法,还想统计上清冻存细胞,是否对活率由提升,最近几株细胞上清冻,复苏效果挺好的,有兴趣老师可PM我。
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  的帖子被加了1分 19天前

    回复:【图片仓库】鉴定国内HepG2的真实身份

    http://www.atcc.org/products/all/HB-8065.aspx#characteristics经过一些统计用户的描述:有几个特点记住了,细胞很丑。是他特点了。根本就不像个细胞,间距不均匀,很丑长得慢的老师可以列下培养条件,操作手法,我们一起分析下
  • luke_zhanghy
    luke_zhanghy  的帖子被加了1分 19天前

    回复:关于培养细胞的培养基的问题

    可以试试,不过都要要养一段时间,反复冻存复苏后对细胞没有影响才行。一般细胞形态要有变化就不太适合了,给你个案例参考:MDA-MB-231这株我倒见过老师用L15与1640反复交换都可以养的很好。不是所有细胞都适合。这得长期积累下经验。建议交替培养基时最好种子细胞要用正规推荐培养基...

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