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  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA标曲OD值整体低可能是什么原因? 21小时前
    混样(板子,标准品,DA,HRP)或是盒子的问题
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA空白组和标准品组OD值一样 1天前
    这要做,挺麻烦但应该可以做出来的,不是二抗的问题。问题一旦出现哪怕是PH可能都是问题。Blocking液,标准品等浓度,稀释液等。建议买个盒子。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 western和elisa的区别 2天前
    蛋白质加热变性的目的是为了破坏高级蛋白质构象,血清中的蛋白做elisa一般不用变性,有特殊的样本与特殊指标需要特殊处理的,另一般elisa 的抗体特异性优于WB。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 elisa间接法 3天前
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  • longlue
    longlue  回复了帖子 elisa间接法 3天前
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  • longlue
    longlue  回复了帖子 双抗体夹心法包被多抗还是单抗以及有关封闭液的问题 6天前
    1.包被多抗单抗都有,目的不同,厂商不同,操作等均有差异;2.Elisa试剂盒是为定量而作,但灵敏度60%多的盒子很难达到较好的可测效果,如有对照组对比,定量数据看起来更具有意义些;3.同一;4.是的,我见到的大多不是同源的;5.理论是的,与抗原决定簇有关。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 Elisa. 血清解冻 7天前
    正常室温就好,想快点就手温下,有时间就冰上梯度慢慢融,都可以,影响不大。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 明天我想问一下全自动生化仪和ELISA做出来的肌酐值会差很多吗 7天前
    我见过的数据中差非常非常多,估计也没多少像我这样无聊的人交叉原料尝试,原料特异性差异非常大,当然具体的东西具体对待。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 明天我想问一下全自动生化仪和ELISA做出来的肌酐值会差很多吗 7天前
    一般情况下全自动生化仪测中最重要的是双抗和标准品不同于ELISA试剂盒,其灵敏度结合效率普遍高于普通ELISA试剂盒,除可测率等问题,使用极其方便,同样特别的贵,贵在原料。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA试剂盒常见问题与解析 8天前
    试着回答,可以讨论一下,血清溶血对研究指标影响不一,没见到什么特别好的办法。组织一般是要pbs清洗一下,称量切块匀浆,稀释至pbs中的。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 elisa的问题咨询 9天前
    可以讨论一下,楼主说的是HRP,不是HRP-SA,HRP可能不是你想的那种特异性,只是有较亲密的结合效果,SA可以理解为信号放大器,HRP还可以连其他小分子。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA试剂盒常见问题与解析 9天前
    各试剂中有过期的情况或活性丢失,上样孵育混样量出现误差,显色时间不足等原因
  • longlue
    longlue  回复了帖子 双抗体夹心法ELISA遇到了问题,求大神瞅一眼 15天前
    相当于自己包板实验不是试剂盒,结果为空板,这个出现问题的可能性太多了,1.各个抗体的结合效果足够么;2.标准蛋白的抗原决定簇适用么;3.板次的固定效果达标么;4.酶的效果可以么;5.孵育的方式时间合适么。。。。。问题太多,建议买试剂盒吧。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA 检测IL-1β 15天前
    TNF类为早期分泌表达的炎症因子,IL类为相对较晚表达,早些年看到Mouse TNF-a在细胞上清液中的表达有这样的时间差异,我猜测可能样本时间培育差异有点问题,阳性组或给药条件上调一下看看,同理在楼主的问题,可能也有相应的问题。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA测得样本OD值偏低问题 20天前
    品牌一点的价格也相对较贵,RD,PeproTech,eBio,Raybiotech和Abcam这是国外的,华美等国内的也可以,各有优势,缺点不能说,容易得罪人。样本浓缩是个偏方,将多管液态样本,真空泵抽干,多管合起来,使用对应的稀释液溶解,后面的正常操作,对照做好。感觉到你迫切想做出数值,但本身不大可测的指标变得非常可测了,就各种问题了。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 ELISA测得样本OD值偏低问题 20天前
    1.这款试剂盒我确实没用过,标曲范围8ng/ml有点大,在不可测的情况下,你的灵敏度值高,可测性就会更低,换个好点的吧,现在国内外成熟试剂盒比这好的不要太多;2.你上药实验组可能真的有点问题,需要回顾一下实验细节了,低的太多跟阴性对照似的;3.IL-6的指标在各类样本间正常样本确实都很难,因此才有了高敏类试剂盒;4.Tnf-a也是难测指标,说明你在设计实验室木有注意难重点啊,可以适当的浓缩样本,效果会稍好些;5.血清样本试剂盒在组织中其实理论也可以尝试使用的,不过效果怎么样,做2个孔试试就知道了;6.组织中加PBS匀浆是为了避开干扰,可以不用BCA总蛋白测定。简单回到一下,加油吧
  • longlue
    longlue  回复了帖子 elisa法 质控 图和参数 22天前
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  • longlue
    longlue  回复了帖子 TGF-b1的ELISA试剂稀释问题(10倍低100倍高200倍次高) 24天前
    有个小想法,可以听听看,样本可以无限稀释么,样本5*稀释在标曲可测且恰在中段,那么10*稀释一般也在标曲内,为什么说明书会建议稀释倍数与条件呢?因为产品出来需要指标,说明稀释液,各类样本种类的使用,标准品等,在一定稀释条件下是否仍在标曲范围种真实,所以,如果一定需要稀释,抛开说明书,各类指标需要重新论证尝试。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 如何确定ELISA实验中标准样品的稀释倍数 24天前
    看你需要做哪个蛋白了,如果没什么要求且转录本相近表位相同(可是一般不一致,IL类为例,常用的就20多种),当然可测的才是你最想要的吧。样本稀释倍数,线性,回收率适宜了,就可以了。
  • longlue
    longlue  回复了帖子 间接法ELISA测定抗体,样本都要稀释吗? 24天前
    不一定,要看指标数据的,建议找几个厂家说明书看看就大致明白了。另一般不稀释的很少,跟样本有关。

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