有做circRNA的大神吗？我在做circRNA，通过northern blot表明我的circRNA是一个反义转录本，但数据库上显示该circRNA是正义转录本，完全相反，怎么回事？

荧光定量pcr时，3个重复孔tm值不完全一样，比如两个是83.6，一个是83.9。溶解曲线都是单峰，但也不完全重合。三个复孔是从一个加完所有试剂的大mix分出来的三个孔。这情况正常吗？实验结果可用吗？

在做引物扩增效率验证时，模板由原倍，进行10倍倍比稀释，稀释至10000倍，共5个浓度。内参GAPDH线性非常好，扩增效率为1.01。但扩的两对工作引物Ct值全在22左右，想不明白什么原因啊。下面附上两对引物的融解曲线和qpcr后跑电泳的结果（融解曲线前两个为工作引物，后一个峰为内参，工作引物融解温度在75至80度间）

最近在做northern blot，但总杂到核糖体rna，该怎么解决这问题