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丁香客

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  • kevinkim
    kevinkim  发布了新帖 circRNA问题 379天前

    有做circRNA的大神吗?我在做circRNA,通过northern blot表明我的circRNA是一个反义转录本,但数据库上显示该circRNA是正义转录本,完全相反,怎么回事?

  • kevinkim
    kevinkim  回复了帖子 定量pcr复孔问题 392天前
    谢谢你。帮我看看,从这结果看,可以说这三个复孔肯定是同一产物吗?溶解曲线不完全重叠啊
  • kevinkim
    kevinkim  发布了新帖 定量pcr复孔问题 392天前

    荧光定量pcr时,3个重复孔tm值不完全一样,比如两个是83.6,一个是83.9。溶解曲线都是单峰,但也不完全重合。三个复孔是从一个加完所有试剂的大mix分出来的三个孔。这情况正常吗?实验结果可用吗?

  • kevinkim
    kevinkim  回复了帖子 荧光定量pcr求助 425天前
    可能我表述不太清楚,是我做我的工作引物的扩增效率的时候,五个稀释度的ct值都是22左右。怀疑是污染了,排除了一圈还没弄明白什么污染。
  • kevinkim
    kevinkim  发布了新帖 荧光定量pcr求助 442天前

    在做引物扩增效率验证时,模板由原倍,进行10倍倍比稀释,稀释至10000倍,共5个浓度。内参GAPDH线性非常好,扩增效率为1.01。但扩的两对工作引物Ct值全在22左右,想不明白什么原因啊。下面附上两对引物的融解曲线和qpcr后跑电泳的结果(融解曲线前两个为工作引物,后一个峰为内参,工作引物融解温度在75至80度间)

  • kevinkim
    kevinkim  回复了帖子 请教northern blot大神 458天前
    我用的是罗氏的NB试剂盒,杂交液是盒子里带的粉末。我试试您的这个杂交液,但预杂交也用你这个杂交液吗?谢谢您的指点。
  • kevinkim
    kevinkim  回复了帖子 请教northern blot大神 459天前
    0.1*SSC,68度洗两次,每次15min。换了3种不同的探针了,也是一样的结果。并且实验室有做northern的同学,也都杂到rRNA,实验室老师说以前从没遇过,突然就出现了。
  • kevinkim
    kevinkim  发布了新帖 请教northern blot大神 462天前

    最近在做northern blot,但总杂到核糖体rna,该怎么解决这问题

  • kevinkim
    kevinkim  加入了调查派 1152天前
  • kevinkim
    kevinkim  回复了帖子 2016年检验主管部分试卷 1298天前
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