登录| 注册

丁香客

选择模板

更多 最新动态

  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 关于One-way anova的事后检验LSD的咨询 101天前
    感谢回复…那我就放心使用了
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 关于One-way anova的事后检验LSD的咨询 101天前
    感谢回复。主要是想知道自己课题里涉及的这两种情况是否均可以LSD进行差异性统计呢?因为后面要发文章,害怕用错统计方法。
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  发布了新帖 关于One-way anova的事后检验LSD的咨询 101天前

    想求助园子里的大佬们一个问题!我的实验里有如下两个问题。1.我有三组样本,想进行任意两两之间的差异比较,方差齐的时候,可否选用LSD检验两两之间的差异性?2.我有4-5组样本时(A-E),但只进行其中特定的几对两两比较,例如只进行A比B,A比C,B比C以及D比E这四对比较,而其它两两之间不做比较的时候能否也使用LSD检验呢?当然方差也是齐的。请各位大佬解答。谢谢

  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 有大佬事后检验Turkey 与LSD 方法差别 101天前
    老师,我想咨询一下,如果是三组数据间进行任意两两比较能用LSD吗?如果对于三组,但是我只对其中某些特定的两两进行比较也能用LSD吗?谢谢
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 【求助】oncology reports 催稿后的回复,大家帮忙看看是个什么意思? 160天前
    发表意见之前还是自己先查清楚吧
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 wb检测磷酸化蛋白与总蛋白 244天前
    你去多看点后会发现很多甚至大多数都不是同时测
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  发布了新帖 wb检测磷酸化蛋白与总蛋白 247天前

    最近做机制的时候有一个小问题想和大家讨论一下!wb做蛋白磷酸化的时候我看很多文献其实不测总蛋白,只看磷酸化的和内参蛋白…应该是认为当内参一致(即上样量一直的时候),磷酸化只要有了差异,那么不论是通过总蛋白表达变化引发的还是仅仅是活性变化引发的其实都导致活性蛋白的量变化了,所以很多文献测磷酸化的时候并不附带着测总蛋白…但是测总蛋白的时候一旦总蛋白没有变化,就会去测一下磷酸化等形式来证实该蛋白活性到底变没有变!那么我想请教一下,如果某基因的总蛋白通过siRna,shRNA或者上游其它基因表达变化等方式而导致该基因总蛋白表达发生显著变化后,那么该总蛋白对应的磷酸化或其它修饰形式需要检测吗?还是一般默认总蛋白表达变化了,相应后续修饰的蛋白形式一定是同步同样变化的?最近一直在考虑这个问题…希望大家来讨

  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB转膜原理到底是什么? 253天前
    总之就是转膜时候各样本间等比例的,所以只要能曝光出条带,相应样本间趋势结果就是正确的…应该是这个道理吧
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB转膜原理到底是什么? 253天前
    同时marker一般公司卖给我们,我们也不知道它里面各个蛋白条带对应组分浓度什么的,还会受到marker预染颜色的影响,因此marker一般还是起到大小指示作用而已…真正的原理我觉得还是因为各样本间统一蛋白转膜比例一致,因此不会因为转膜不完全或过度影响了结果的趋势变化
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB转膜原理到底是什么? 253天前
    所以我的认为就是不论转过了或者没转完全,但是同一张膜上该目的或内参蛋白在各个样本间都是等比例过去的,因此只要曝光得到了该目的或内参蛋白条带,那么其在样本间趋势就是正确的,不受影响的…也因此可以在内参蛋白基本一致的情况下直接通过目的蛋白条带深浅或灰度值反应各样本间该目的蛋白的变化情况…不知道我这种理解正确吗
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB转膜原理到底是什么? 254天前
    但是marker的颜色就算都在膜上也不代表全转过去了或者有没有转过度…
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  的帖子被加了1分 255天前

    回复:分析WB条带灰度值时产生了一个疑问

    这就是为什么我去美国交流的那一年发现他们都不做这种统计…必须做到那种肉眼可见的明显变化才认为是有差异的…统计就是认为增加误差!而且不同抗体效价不同,回收以后再用效价更不同,膜的曝光时间,曝光液孵育的量,每次上样的样本量都不一样…没有比值的可比性!实验必须控制变量!因此只有每一批同...
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 【求助】western blot 转膜时胶上有条带,滤纸上也有条带 255天前
    请问您是不是说wb因为多数是恒流转膜,所以各样本间转膜比例是一样的!这样的话不论转过了还是没转完全,同一目的蛋白在各样本间转在膜上得比例都是一致的,那么最后曝光显影出来的趋势和差异就是正确的,不会因此有假阳性或假阴性的结果?因为转在膜上的比例都是一致的
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 【求助】转膜恒压好还是恒流好? 255天前
    想请教您一下,是否是因为wb转膜是恒流或恒压的,认为各样本间蛋白都是等比例转到膜上的…这样不论是否转膜不完全亦或是过度都不影响最后结果中样本间到底有无差异以及趋势变化如何,只要能孵出条带,目的条带的样本间差异趋势就都是准确的?
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB转膜干净么?怎么样才能转干净? 255天前
    我想请问一下,转膜的时候因为不能保证全都在膜上,那么是否是因为恒流转膜所以默认所有的样本的蛋白都是等比例转过去的,所以即便在胶上有残留或者有部份转膜过度都不会影响结果趋势差异?那么这样的话,只要能曝光得到目的条带,样本间该条带的趋势与差异也应该是准确的?不然的话真的觉得wb很不准,都没有做的必要了
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 转膜不彻底,而且滤纸也有Marker,怎么解决 255天前
    hkj710 科学,是不可能有什么百分之百的事情,不要求百分之百转过去,只要膜上面有蛋白质,能适合做WB就可以了,要是胶上还有残余蛋白质,做个考马斯亮蓝染色,还能给你做个对照我想请问一下是不是因为我们恒流转膜的时候默认所有样本的蛋白都是等比例转过去的…所以不论有无残留又或者是是否转过度都不会影响结果的趋势?只要能孵育曝光出相应的目的蛋白条带,目的蛋白得样本间差异趋势是不受影响的?
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  发布了新帖 WB转膜原理到底是什么? 255天前

    本人wb做了多年…基本原理都了解…但是有一点想不通,现在大多数做转膜前后都不会染胶或者染膜看胶上有没有残留蛋白!那么怎么确保实验结果是准确的呢?会不会因为转膜不足或过度等原因造成假阳性或假阴性结果呢?就比如明明A样本该蛋白表达量高,但是转的不充分或者过度导致与B样本该蛋白表达看着差不多甚至还变低了?还是说基本大小一致的蛋白因为恒流转膜,所以转的时候都是等比例转过去的!只要能孵育出相应蛋白,结果趋势不会因为转膜过度或不足而受影响?所以转膜只要转到能孵育出相应蛋白,趋势就基本是正确的,不必考虑转过度或不足的影响呢?烦请大神们解答赐教!

  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WESTERN BLOT 灰度值计算 257天前
    终于看到清醒的人了!一堆人拿灰度说事简直可笑!抗体效价,曝光时间啥的都不一样,比值哪有可比性?唯有同一条带的组间才有可比性!内参看着差不多了,目的出现明显差异才是王道!灰度就是没差异的人非要说差异的耍流氓
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  回复了帖子 WB结果如何统计分析 261天前
    其实美国很多lab的老师认为wb做统计是很无稽之谈的!因为wb本身是半定量,抗体的不同曝光时间也不同,探测机器精准度等等会造成所谓灰度值根本没有在同一变量下获得,那么求比值就没有意义!更重要的是大量实验证实,其实根本没有什么差异的蛋白表达在你进行了所谓的统计后居然也有了些微差异,我自己也深有体会!这种其实根本就没有差别意义!所以wb应该是内参基本一致的情况下,直接看目的蛋白!那种显著到一看就看出来的差异才叫有差异!那种根本没有明显差别的条带非用统计图说问题就是耍流氓!这也是很多wb数据无法重复的原因!
  • joyeiffel8
    joyeiffel8  发布了新帖 磷酸化蛋白完全不能用脱脂奶粉封闭吗? 617天前

    我做了很多western…也有磷酸化蛋白的,每次都是脱脂奶粉封闭,感觉效果一直不错啊!为啥有人说坚决不能用呢?是脱脂奶粉封闭会造成结果假阳性还是假阴性么?或者说只是可能造成背景升高或者目的条带看不到?如果背景不高,目的条带也有的话是不是就可以用脱脂奶粉封闭以及稀释一抗二抗呢?

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客