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  • happness
    happness  回复了帖子 血液病细胞形态学诊断图谱(高清版) 119天前
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  • happness
    happness  悬赏2丁当求助 1499天前

    单酶切载体构建 CIP 处理后 不长斑

  • happness
    happness  回复了帖子 有关fish的问题 1920天前
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  • happness
    happness  回复了帖子 graphpad prism 5.0 软件*** 2032天前
    楼主好人!
  • happness
    happness  加入了调查派 2099天前
  • happness
    happness  回复了帖子 SW620细胞脂质体转染效率非常低 2259天前
    不会啊,620还好吧。你这样,提个RNA,检测下质粒所携带的目的基因的mRNA水平。你先试试!
  • happness
    happness  回复了帖子 流式细胞图求解 2304天前
    每次流式检测,必须有做一个空白对照,然后根据空白对照设门,你这张图应该是实验组的吧?所以最好同时上传对照组图!左上象限代表细胞碎片,左下是正常细胞,右下是早期凋亡指标,右上是坏死或者晚期凋亡细胞。
  • happness
    happness  回复了帖子 Western Blot一抗二抗问题 2314天前
    如果我眼睛没花,貌似第二张还是有条带啊!只是很淡,是不是洗膜时间太久,蛋白洗掉了?缩短洗膜时间!还有你上样量是多少?如果你的目的蛋白表达量本来就很少,建议加大上样量,这样保证洗膜后还有足量的蛋白!我平时做p-stat3和P-STAT5 P-JAK2 都只上30ug,能洗4次膜,表...
  • happness
    happness  回复了帖子 Western Blot一抗二抗问题 2320天前
    我是用thermo的,用量很少的!每次曝光完,先TBST洗1次,然后洗膜,按照说明书的时间洗,然后再TBST洗3次,每次10 min,最后才封闭!你那个一团黑,是不是洗过头了?或者你二抗浓度加太高了?我一般上样量是30ug,一张膜能退膜4-5次,就是出4-5个抗体指标。建议你要不...
  • happness
    happness  回复了帖子 关于mRNA的问题 2321天前
    我是直接看看引物的熔解曲线,还有跑胶条带是否唯一清晰
  • happness
    happness  回复了帖子 关于mRNA的问题 2321天前
    楼主的意思是,正常细胞mRNA表达,癌细胞有的高有的低?那这样的结果可以考虑是有特异性的,不同组织癌细胞差异表达!首先,我觉得楼上的说内参基因这个可以比较,也可以通过同一标本正常癌旁组织的比较看看表达情况!还有人体内有的蛋白是以前体形式存在的,在收到调节信号,可以通过适当剪切或修...
  • happness
    happness  回复了帖子 关于mRNA的问题 2321天前
    我没看明白楼主的问题,你问题中说无论癌细胞还是正常细胞都是mRNA低表达,但是在回复中说有设置内参基因对照的mRNA都是高表达,那到底是mRNA是高表达还是低表达?
  • happness
    happness  回复了帖子 慢病毒载体的构建 2321天前
    楼上说的对,无图无真相,要质粒结构图,提供载体及片段信息!还有我实验室的慢病毒都是有辅助病毒的,辅助病毒也是一个因素;包病毒的时候,细胞状态如何?这些都可能影响你病毒的表达!
  • happness
    happness  回复了帖子 急求质粒构建方法 2321天前
    就是普通TA克隆实验,原理就是蓝白斑筛选,就是利用乳糖操纵子序列编码的β-半乳糖苷酶作用特异性底物,筛选克隆!现在生物公司已经做成了成熟的试剂盒,买个kit就可以了,很方便的!至于野生型和突变性的目的序列,这个就要你自己获得相应的标本模板,PCR扩增即可!要是你无法获得所需要的突...
  • happness
    happness  回复了帖子 Western Blot一抗二抗问题 2321天前
    还是建议洗膜!你的stripping buffer 怎么了,为什么效果不好?我现在一张PVDF膜,上样量30ug, 一般能洗膜5次,就是做5个指标,你这目的和内参挨得近,不好弄的,还是建议洗膜!
  • happness
    happness  回复了帖子 我用北京索莱宝质粒小量提取试剂盒提的质粒,电泳图 2321天前
    没事,实验做不出来是很苦逼的事,所以,能帮就帮啦!哈哈
  • happness
    happness  回复了帖子 我用北京索莱宝质粒小量提取试剂盒提的质粒,电泳图 2323天前
    1. 5ml 菌液提小抽会不会太多了,我一般就2ml菌液提小抽,如果菌液太多,裂解不彻底,很影响最后的抽提结果 2. 我的条件是3ml LB+AMP,摇菌过夜,小抽提2ml 3. 我用的是AXYGEN的试剂盒,还可以,如果你怀疑你的试剂盒,可以换个试试,反正小抽也不贵! 4.看胶...
  • happness
    happness  回复了帖子 染色体畸变 姬姆萨染色 2324天前
    其实做染色体最重要的是胰酶消化的时间和胰酶消化液的PH值,非常关键!
  • happness
    happness  回复了帖子 染色体畸变 姬姆萨染色 2324天前
    背景太深,是因为你的染色时间和染液的浓度造成的!我这边是吉姆萨染液工作液是染料原液1:7用PBS稀释的,平铺在玻片上染10min,条件很稳定!
  • happness
    happness  回复了帖子 western 曝光求助 2327天前
    1.那你说的是膜在ECL上条带是看得见的,问下你在拿进去曝光后条带是否还能看得见? 2.还有就是显影定影位置没换错吧? 胶片我也是用柯达的,显影定影还有二抗我都是用联科的!我觉得WB关键还是一抗! PS:今天我要骂人了,黑心的公司卖给我假CST,浪费了我2天时间!靠……

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