T载连接成功，菌液PCR鉴定有目的条带，送去测序，回来的结果在NCBI上比对，不会看啊?有几下几点疑问：1、我是要克隆基因，构建表达载体，转染细胞，再表达成蛋白。那么，连T载的测序结果必须与原序列完全一致才能连表达载体吗？2、测序用自带引物好还是通用引物好一些？3、比对结果如图上的这种情况，是怎么回事啊？希望各位高手帮我解答一下，万分感谢！
挑单菌落于3毫升LB Amp培养基中进行培养，37℃200rmp，摇3个小时可以做菌液PCR吗？最短摇多长时间可以保菌？麻烦各位高手指点一下，万分感谢！
胶回收产物连T载之后，进行测序，回来的结果显示测序成功，但拼接未成功，基因原序列和测序结果见附件，怎样进行比对啊？什么样的结果才能用于后续实验？我不会这块，麻烦会的帮我分析一下，万分感谢！
引物带有酶切位点，PCR后有目的条带，胶回收，准备连克隆载体（百式金的），想问以下几点：1、带有酶切位点的引物，PCR后有目的条带，胶回收的产物能直接和T载体连接吗？还是需要酶切后在连接？2、转化：涂板后，在37度过夜培养，大约是多长时间呢？培养时，培养皿用不用封口膜封口？3、长出的单菌落放到LB液体培养基上摇菌，培养基是带抗性的吗？摇多长时间能送去测序？4、一个基因连接克隆载体，一般涂几板带抗性的培养基？挑几个单菌落进行摇菌？如何保菌？还有很多问题都不懂，着急实验，麻烦做过这方面实验的高手能帮我解答一下，万分感谢！
p3XFLAG-CMV-10是真核表达载体，将p3XFLAG-CMV-10-TLR2，p3XFLAG-CMV-10-TLR5，p3XFLAG-CMV-10-TLR9重组质粒转染细胞中，做WB实验，只用带Flag标签的抗体是不是能分别跑出TLR2，5，9蛋白的条带？还是得买针对相应蛋白的抗体？这块实验不懂，希望会的帮我解答一下，万分感谢！
幽门螺旋杆菌加的冷冻保存液运输3天，干冰加少了，这样的菌还能用吗
我有一批胃组织已经取出来了，预计今年六月份做Western Blot实验，组织用生理盐水清洗干净后，剪成小块，是直接保存在-80冰箱还是需要加什么保存液再放到-80保存啊？不知道组织该如何保存？麻烦各位帮我解答一下，万分感谢！
Western Blot需要内参吗？内参的作用是什么？RT-PCR扩增基因，需要设置内参吗？内参的作用是什么？需要各位高手指点一下！万分感谢！
您好，我是做大鼠胃组织的Western Blot，提TLR2蛋白，得六月份才能做这部分实验，组织是这样处理的：组织离体后，用生理盐水清洗干净，直接将整个胃组织放入-80冻存，这样做蛋白会不会降解啊？能保存多久？组织是剪成小块冻存好还是整个组织直接冻存好？我是刚接触这方面实验，希望各位高手能帮我解答一下，万分感谢！
2*Power Taq PCR MasterMix是高保真酶吗？能扩增2400-3100bp的片段吗？
限制性内切酶的选择与表达载体是否带Flats标签有关系吗？限制性内切酶 SacI-HF和 限制性内切酶Q.Cut SacI的区别是什么？没太弄明白，各位帮我看看，万分感谢！
