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  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:连接T载测序结果分析 15天前

    T载连接成功,菌液PCR鉴定有目的条带,送去测序,回来的结果在NCBI上比对,不会看啊?有几下几点疑问:1、我是要克隆基因,构建表达载体,转染细胞,再表达成蛋白。那么,连T载的测序结果必须与原序列完全一致才能连表达载体吗?2、测序用自带引物好还是通用引物好一些?3、比对结果如图上的这种情况,是怎么回事啊?希望各位高手帮我解答一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助: 单菌落摇菌后保菌问题 19天前

    挑单菌落于3毫升LB Amp培养基中进行培养,37℃200rmp,摇3个小时可以做菌液PCR吗?最短摇多长时间可以保菌?麻烦各位高手指点一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:连T载回来的测序结果看不懂 31天前
    目的片段是2355bp,用普通taq酶p出的条带,胶回收后连接克隆载体,送菌液测序。 M13通用引物测序,由于片段长,中间有几百bp没测通,拼接失败。测序结果及原序列在上面帖子里,我想问的是:1、怎样确定测序结果的准确性?2、通过比对有几个突变,影不影响后续连表达载体,表达蛋白?3、中间有几百bp没测通,影不影响后续连表达载体,表达蛋白?蛋白及核苷酸对比结果如图所示:希望各位高手帮我解答一下,万分感谢!
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:连T载回来的测序结果看不懂 34天前

    胶回收产物连T载之后,进行测序,回来的结果显示测序成功,但拼接未成功,基因原序列和测序结果见附件,怎样进行比对啊?什么样的结果才能用于后续实验?我不会这块,麻烦会的帮我分析一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:胶回收产物连克隆载体问题 39天前
    挑单菌落进行摇菌时用的是带抗性的LB液体培养基吧?80%甘油保菌行吗?800微升菌液加200微升80%甘油进行保菌,这么做对不对?菌液PCR有条带,是不是就可以送去测序了?剩下的菌液放4度冰箱,等测序结果回来,再保菌,提质粒?
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:胶回收产物连克隆载体问题 40天前

    引物带有酶切位点,PCR后有目的条带,胶回收,准备连克隆载体(百式金的),想问以下几点:1、带有酶切位点的引物,PCR后有目的条带,胶回收的产物能直接和T载体连接吗?还是需要酶切后在连接?2、转化:涂板后,在37度过夜培养,大约是多长时间呢?培养时,培养皿用不用封口膜封口?3、长出的单菌落放到LB液体培养基上摇菌,培养基是带抗性的吗?摇多长时间能送去测序?4、一个基因连接克隆载体,一般涂几板带抗性的培养基?挑几个单菌落进行摇菌?如何保菌?还有很多问题都不懂,着急实验,麻烦做过这方面实验的高手能帮我解答一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:Western 抗体选择问题 46天前
    用TLR2,5,9这三个蛋白同时跑电泳,带有标签的抗体能区分出他们各自的蛋白条带吗?我做免疫组化染色,也是检测这三种蛋白,抗体应该选单克隆抗体还是多克隆抗体好?
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:Western 抗体选择问题 46天前
    TLR2,5,9蛋白同时跑电泳,用带有标签的抗体能区分出他们各自的蛋白条带吗?我还想做个免疫组化染色,也是检测这三种蛋白的,选单克隆抗体还是多克隆抗体好一些?希望您能帮我解答一下,谢谢!
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:Western 抗体选择问题 47天前

    p3XFLAG-CMV-10是真核表达载体,将p3XFLAG-CMV-10-TLR2,p3XFLAG-CMV-10-TLR5,p3XFLAG-CMV-10-TLR9重组质粒转染细胞中,做WB实验,只用带Flag标签的抗体是不是能分别跑出TLR2,5,9蛋白的条带?还是得买针对相应蛋白的抗体?这块实验不懂,希望会的帮我解答一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:幽门螺旋杆菌菌液运输 52天前

    幽门螺旋杆菌加的冷冻保存液运输3天,干冰加少了,这样的菌还能用吗

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:Western Blot实验 55天前
    我看有的文章里也没有内参啊,必须得有吗
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:提蛋白的组织保存问题 55天前

    我有一批胃组织已经取出来了,预计今年六月份做Western Blot实验,组织用生理盐水清洗干净后,剪成小块,是直接保存在-80冰箱还是需要加什么保存液再放到-80保存啊?不知道组织该如何保存?麻烦各位帮我解答一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:Western Blot实验 55天前

    Western Blot需要内参吗?内参的作用是什么?RT-PCR扩增基因,需要设置内参吗?内参的作用是什么?需要各位高手指点一下!万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:高保真酶问题 56天前
    用这个酶p出的PCR产物要连克隆载体,和表达载体,不知道用这个酶能不能往下面做
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:高保真酶问题 56天前
    那2*Es Tag MasterMix能扩增2400-3100bp的片段吗
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:冻存组织的Western Blot实验问题 56天前

    您好,我是做大鼠胃组织的Western Blot,提TLR2蛋白,得六月份才能做这部分实验,组织是这样处理的:组织离体后,用生理盐水清洗干净,直接将整个胃组织放入-80冻存,这样做蛋白会不会降解啊?能保存多久?组织是剪成小块冻存好还是整个组织直接冻存好?我是刚接触这方面实验,希望各位高手能帮我解答一下,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:western blot问题 56天前
    六月份做Western Blot,但是胃组织已经取出来了,没剪成小块,清洗干净后直接将整个胃组织放入-80,这么做蛋白会降解吗?
  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:高保真酶问题 56天前

    2*Power Taq PCR MasterMix是高保真酶吗?能扩增2400-3100bp的片段吗?

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  发布了新帖 求助:限制性内切酶问题 56天前

     限制性内切酶的选择与表达载体是否带Flats标签有关系吗?限制性内切酶 SacI-HF和 限制性内切酶Q.Cut SacI的区别是什么?没太弄明白,各位帮我看看,万分感谢!

  • dxy_ukeqbnkq
    dxy_ukeqbnkq  回复了帖子 求助:如何运输幽门螺旋杆菌菌液 57天前
    北京那边培养不了,只能是我这边培养完,到他们那边不培养,直接给鼠灌胃

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