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  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 求助:用鼠杂交瘤方法制备鼠单抗,总是得到亚型为IgM的单抗,何解? 2天前
    我也是两星期一次,但是我免了4次,再➕一次冲刺,筛出来是igm。我感觉也跟抗原的纯度有关
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 请问用超滤管超滤蛋白质溶液时,为什么会有白色沉淀析出?但蛋白浓度却很低 4天前

    之前纯化病毒时,先用硫酸铵沉淀蛋白,然后用pbs重悬并超滤,每次超滤离心后都会轻轻吹一下超滤管的膜以防堵塞,超滤几次离心后发现有白色絮状,可能是蛋白析出了,但是超滤后用BCA试剂盒测蛋白浓度却很低,只有1mg多点每毫升。纯化了几次病毒都是这样。后来,这几天我纯化抗体,用proteinG柱纯化后,用超滤管浓缩抗体并把溶液置换成PBS,但超滤离心几次后发现又有白色絮状沉淀,然后用BCA试剂盒测了抗体浓度,发现1mg/ml都没有。请问为什么会有白色沉淀析出?我的PBS测过PH在7左右。

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 超滤蛋白溶液时为什么会有白色絮状物析出?但测蛋白浓度却很低。 4天前

    之前纯化病毒时,先用硫酸铵沉淀蛋白,然后用pbs重悬并超滤,每次超滤离心后都会轻轻吹一下超滤管的膜以防堵塞,超滤几次离心后发现有白色絮状,可能是蛋白析出了,但是超滤后用BCA试剂盒测蛋白浓度却很低,只有1mg多点每毫升。纯化了几次病毒都是这样。后来,这几天我纯化抗体,用proteinG柱纯化后,用超滤管浓缩抗体并把溶液置换成PBS,但超滤离心几次后发现又有白色絮状沉淀,然后用BCA试剂盒测了抗体浓度,发现1mg/ml都没有。请问为什么会有白色沉淀析出?我的PBS测过PH在7左右。

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 用病毒作为免疫原制备单抗,该病毒需要灭活吗? 13天前
    你可以做个预实验,用不同的硫酸铵浓度沉淀,跑胶验证
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 测TCID50时,请问多少天才能确定所有病变已经结束呢? 36天前

    在测病毒效价时,随着病毒稀释梯度越大,细胞发生病变时间可能延长,那多少天后才能确定最终结果呢?

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 请问在测病毒效价时,多少天后可以结束观察细胞病变? 36天前

    在测病毒效价时,随着病毒稀释梯度越大,细胞发生病变时间可能延长,那多少天后才能确定最终结果呢?

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 空白限,检测低限,分析灵敏度,检出限。还有生物检测限和定量限 43天前

    最近准备建一个elisa检测方法,看到这些词感觉好混乱。上网查了下以空白样品重复检测20次,计算平均值和标准差。以95%置信区间,请问。空白样品的平均值再加2倍标准差 最后所得的这个值是空白限还是检测低限,还是分析灵敏度。还是说这3者是一样的吗?另外生物检测限是某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于空白检测低限响应量,则改样品内含有的分析物浓度为生物检测限。也就是说若该浓度的平均值➖2倍该样品的标准差后仍刚好大于 空白样品平均值➕2倍空白样标准差,那该浓度就为生物检测限。请问生物检测限等于定量限吗?

  • dxy_qaaaago6
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 巨噬细胞 75天前
    教材上也是这样写的,由单核细胞分化而来的,不是吗?
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 融合后几天的细胞图片,不知道是不是污染了? 80天前
    请问为什么会这样的?那些脏东西是什么?
  • dxy_qaaaago6
  • dxy_qaaaago6
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 用病毒作为免疫原制备单抗,该病毒需要灭活吗? 80天前

    想制备针对该病毒的单抗,用该病毒皮下注射免疫前需要将该病毒灭活吗?灭活的效果会更好吗?该病毒不感染小鼠。

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 免疫层析胶体金复溶液 82天前
    我不是做试纸条的,只是我平时看我实验室的同门她们是要加的,基本的配方你自己看一下别人的毕业论文然后根据自己的样品再优化吧
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 免疫层析胶体金复溶液 82天前
    海藻糖,蔗糖
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  发布了新帖 本人在单抗制备出筛中全是阳性,为何?而且后面都转阴了…… 85天前

    我是用自己养的病毒经过硫酸铵沉淀然后免疫的。融合前效价大概5万左右。我融合后初次检测,所有孔几乎都是阳性,而且od值都很高,超过3的一大片。我初检前两天是有进行换液的,然后我再检测了一遍,还是阳性。 我把第二次检测od值高于2的孔进行克隆,克了20几个阳性孔,每个孔克一块96孔板,但是检测一克板是都是阴性的,将阳性原始孔转移后也是阴的。 这让我很不解,为什么初检几乎都是阳性,这个现象我觉得好奇怪。但是都克不出来。我之前有筛过针对其他抗原的抗体,都没遇到过这种现象。

  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 【交流】单抗讨论小组话题之二:如何提高单抗细胞融合中的融合率和阳性率 85天前
    您好!我有个问题想请教。我是用自己养的病毒经过硫酸铵沉淀然后免疫的。融合前效价大概5万左右。我融合后初次检测,所有孔几乎都是阳性,我初检前两天是有进行换液的,然后我再检测了一遍,还是好多阳性孔,而且很多od值都很高,但没有几个孔的od值是高过第一次检测时的od值,都是和初检时od值差不多或者降低一点点。我把第二次检测od值高于2的孔进行克隆,克了20几个阳性孔,每个孔克一块96孔板,但是检测一克板是都是阴性的,阳性原始孔几天后也阴了。这让我很不解,为什么初检几乎都是阳性,但是都克不出来。我之前有筛过针对其他抗原的抗体,都没遇到过这种现象。
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 【进展】号外:单抗制备技术新进展(你真的需要关注哦) 85天前
    各位前辈,我有个问题困惑了很久,想不明白,请各位不吝赐教。我是用自己养的病毒经过硫酸铵沉淀然后免疫的。融合前效价大概5万左右。我融合后初次检测,所有孔几乎都是阳性,我初检前两天是有进行换液的,然后我再检测了一遍,还是好多阳性孔,而且很多od值都很高,但没有几个孔的od值是高过第一次检测时的od值,都是和初检时od值差不多或者降低一点点。我把第二次检测od值高于2的孔进行克隆,克了20几个阳性孔,每个孔克一块96孔板,但是检测一克板是都是阴性的,阳性原始孔几天后也阴了。这让我很不解,为什么初检几乎都是阳性,但是都克不出来。我之前有筛过针对其他抗原的抗体,都没遇到过这种现象。
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 【进展】号外:单抗制备技术新进展(你真的需要关注哦) 85天前
    您好!我有个问题想请教。我是用自己养的病毒经过硫酸铵沉淀然后免疫的。融合前效价大概5万左右。我融合后初次检测,所有孔几乎都是阳性,我初检前两天是有进行换液的,然后我再检测了一遍,还是好多阳性孔,而且很多od值都很高,但没有几个孔的od值是高过第一次检测时的od值,都是和初检时od值差不多或者降低一点点。我把第二次检测od值高于2的孔进行克隆,克了20几个阳性孔,每个孔克一块96孔板,但是检测一克板是都是阴性的,阳性原始孔几天后也阴了。这让我很不解,为什么初检几乎都是阳性,但是都克不出来。我之前有筛过针对其他抗原的抗体,都没遇到过这种现象。
  • dxy_qaaaago6
    dxy_qaaaago6  回复了帖子 (请教)单抗制备过程中阳性率较低 85天前
    你好,我有个问题想请教。我是用自己养的病毒经过硫酸铵沉淀然后免疫的。融合前效价大概5万左右。但我的情况跟楼主相反,我融合后初次检测,所有孔几乎都是阳性,我初检前两天是有进行换液的,然后我再检测了一遍,还是好多阳性孔,而且很多od值都很高,但没有几个孔的od值是高过第一次检测时的od值,都是和初检时od值差不多或者降低一点点。我把第二次检测od值高于2的孔进行克隆,克了20几个阳性孔,每个孔克一块96孔板,但是检测一克板是都是阴性的,阳性原始孔几天后也阴了。这让我很不解,为什么初检几乎都是阳性,但是都克不出来。我之前有筛过针对其他抗原的抗体,都没遇到过这种现象。

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