纯化小白一枚，请教纯化问题最近两个月一直在养幽门螺旋杆菌，固体培养基养的，养的很好，但是纯化不好。这是我的尝试：（1）刚开始没有洗菌就直接破菌，离心上清中很多60多KD的杂蛋白，尝试纯化，分子筛（S-200没法分开血清白蛋白、脲酶A等目的蛋白都为25-114KD小蛋白）、60%硫酸铵沉降（20%，30%，40%，50%，60%，70%小剂量试验收集沉淀中，60%在50-70KD不弥散，蛋白不叠加，但是色数和杂蛋白留下沉淀中）、Q-Sephora柱尝试了（设置PH6.5没法完全去除血清白蛋白，也可能我尝试的是小柱子实验不到位）（2）后来洗菌很干净，但是收到的蛋白很少，12个小皿才2mg左右，检测还出现假阳，出现假阳，这是因为这些蛋白没纯化吗？（3）洗菌过程中洗涕上清用条子测效价很高，不舍得扔还
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5厘米长脐带消毒冲洗后，去除动静脉，剪碎1-2mm，1mg/ml胶原酶1用5ml消化过夜，200目滤网过滤，过滤的液体中细胞很少，过滤很慢（胶原很多），过滤过程组织会慢慢消化掉，但细胞都是很少，离心前pbs冲洗很不好冲，只好直接把滤液和组织离心分成很多dish培养，4天后观察没有细胞，2500rpm离心6min也没有收集到有用的细胞。请问大神们，我的问题出在哪里？我邮箱775057036@qq.com，组织块贴壁法也可以给我介绍，求助大神
