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  • sourireh
    sourireh  回复了帖子 RNA水平和蛋白水平做出的结果不一致说明什么问题 50天前
    请问一下前辈,蛋白降解问题是什么😳,我最近的结果就是这样,RNA低,蛋白高
  • sourireh
    sourireh  发布了新帖 WB突然不出条带 72天前

    最近做WB,有一次突然有很多非特异性条带,然后就试着改变条件,将封闭时间从一个小时换到两个小时、一个半小时,可均没有出结果,后边有又将TBST配置的一抗改变成TBST-牛奶配置,奇怪的是突然都没有条带了这一周尝试改变条件,又换成之前的条件,换样品、新配抗体等等,还是不出条带,内参一直很好。。路过的哪位大神有没有遇到过这种情况,帮我分析一下啊啊啊,跪谢啊我在怀疑是抗体的问题,也有师姐说可能是样品问题……我不理解为什么和最近的样品有关系吗?

  • sourireh
    sourireh  发布了新帖 WB非特异性条带 78天前

    最近做WB,新买的抗体不到一个月,最近几次发光总会出现特别多非特异性条带,感觉就像立春红染色似的,求大神赐教

  • sourireh
    sourireh  回复了帖子 santa抗体 99天前
    会不会因为我的这个蛋白表达量很低的原因。刚才看一家试剂公司的说明书,说这个蛋白定位在细胞核,可我查文献说在细胞质和粘着班。。好方🙃
  • sourireh
    sourireh  发布了新帖 santa抗体 99天前

    这两天做Weatern,用的santa抗体,推荐稀释比例1:100-1:1000,分别用1:1000,1:500,1:200做了实验,结果都没有条带,内参条带很好很齐😞有没有大神踢教,santa抗体到底咋样?

  • sourireh
    sourireh  回复了帖子 Western 有内参条带无目的条带 99天前
    今天又提高了抗体浓度,看看明天能不能发出来蟹蟹🌹
  • sourireh
    sourireh  回复了帖子 Western 有内参条带无目的条带 100天前
    查文献说这个蛋白是在细胞质,用PCR已经验证有表达~
  • sourireh
    sourireh  发布了新帖 Western 有内参条带无目的条带 100天前

    我的目的蛋白是175KD,跑胶用了80V30多分钟,然后用120V跑40分钟,之后转膜用200mA,120分钟,封闭用脱脂奶粉和TBST配,一抗用的是santa的,推荐比例是1:100-1:1000,我用的是1:500,发光后内参条带有,目的条带没有。有没有大神帮我分析一下?跪谢!

  • sourireh
    sourireh  回复了帖子 【交流】提取的RNA纯度低的原因 122天前
    重新再加氯仿抽题,沉淀溶解,意思是重新再按照步骤来一遍是吗?加氯仿的时候应该加入多少合适?我现在RNA已经用DEPC水加了17ul溶解了的。。大神赐教

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