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  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 还原性电泳一直有杂带 69天前
    IgY_fellow 那就建议你考虑,增加loading buffer中的还原剂,比如再加入倍量的DTT或者b-ME; 延长蛋白沸水浴时间到10-15min。看看是否能解决问题。另外根据你的分子量,哪一条是预期的条带?如果分子量变小了,那么需要考虑是否有蛋白不稳定,或者修饰发生脱落的可能。 分子量小的是目的条带 我们的 loading buffer直接购买还原型的,不用直接加DTT的 下次试试延长沸水浴时间,谢谢
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 蛋白质电泳实验技术下载 69天前
    很好。
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 还原性电泳一直有杂带 69天前
    IgY_fellow 1. marker的形态来看,凝胶还是可以。你的marker 没有高分子量marker 吗?为什么凝胶上半部分,很干净,没有条带,而且背景也很清晰?是不是染色不充分? 2. 从照片看,你没有加入浓缩胶,因此有可能目标蛋白会出现带型压缩不充分,连续拖尾情况 3. 如果可以排除还原剂的问题,加入loading buffer的变性时间,通常需要煮沸10min. 你的样品只处理了3min. 有可能是蛋白变性不充分,亚基或者多聚体分离不彻底。 4. 建议加入一个阳性对照标准品,比如:血红蛋白,作为参照,看看电泳以及样品制备过程是否会导致会出现所谓杂带现象。 这是小分子量的marker,2-40kd的,我的样品是只有32个氨基酸组成的小分子多肽,里面含有一个二硫键。 凝胶的
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 还原性电泳一直有杂带 69天前
    IgY_fellow 看着像绕口令。 有照片吗?不知道你所谓的杂带,是什么样的,不好做判断。 不过既然你的marker表现正常,那基本可以排除凝胶配制方面的问题。建议检查一下你的样品loading buffer. 用于还原性SDS-PAGE的loading buffer,含有高浓度还原剂。b-ME 或者DTT。有时因为放置不当,或时间长了。还原剂发生氧化,失去了还原效果。导致蛋白不完全还原,就会出现各种还原态的蛋白。就会在SDS-PAGE上表现出多条条带。半胱氨酸残基越多的蛋白,可能出现的各种还原价态的蛋白就会越多,在电场中表现的泳动行为就会多样化。 loading buffer 有换过新的,但是情况没有改变。 loading buffer是5x的,样品处理方法是取样品30ul,加
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  : 我在丁当抽奖抽中了2丁当,获得2.0个丁当。你也来试试手气吧:https://dxy.me/re6vUj
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 还原性电泳一直有杂带 69天前
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  回复了帖子 还原性电泳一直有杂带 69天前
    下面是图片,还原的全都有杂带
  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  悬赏5丁当求助 75天前

    还原性电泳一直有杂带

  • dxy_il91rxre
    dxy_il91rxre  发布了新帖 SDS-PAGE还原性电泳一直有杂带 76天前

    最近做SDS-PAGE还原性电泳一直有杂带,包括标准品,可是marker和非还原性电泳又很正常,以前同样的方法都是可以的,想问下大神是什么原因。就从重新换配胶溶液开始,有可能是配胶溶液的原因吗,还是有其他原因。同样的配胶溶液marker和非还原性电泳又是正常的。

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