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  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  回复了帖子 试剂盒提取核蛋白 407天前
    但是为什么会出现沉淀还是很疑惑,不知道怎么解决了。
  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  回复了帖子 试剂盒提取核蛋白 407天前
  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  回复了帖子 试剂盒提取核蛋白 407天前
    我用的是生工的提核蛋白的试剂盒,我做的是磷酸化的P65,因为前面和师姐一起在293T细胞中验证过,WB是可以提出核蛋白的,而且抗体和试剂盒是新买的,应该不会出现什么问题。我这次是在3T3诱导成的脂肪细胞里做的提核蛋白,后面跟师姐讨论了一下,她觉得可能是细胞量的问题。她前面咨询了做核蛋白的同学说细胞量很重要,应该用75mm的大皿养细胞,我用的是六孔板,太小了,细胞量不够,所以下次想先用大皿诱导细胞看看吧。谢谢了。
  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  回复了帖子 试剂盒提取核蛋白 407天前
    我提核蛋白的时候会出现加buffer煮沸变性12000r离心出现沉淀的情况,取上清加样结果目的和内参都没跑出来,请问你做核蛋白Western会出现这种情况吗?
  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  发布了新帖 磷酸化核蛋白做western 408天前

    大家好,本人第一次做核蛋白的western,第一天提了核蛋白,第二天加buffer煮沸10分钟,12000r离心2分钟发现每一个管底都有沉淀,没太在意,还是用上清加样,最后曝光的时候内参和目的都没有条带,目前在找原因,是不是因为有沉淀的原因呢,请教下各位。

  • dxy_3soktht6
    dxy_3soktht6  回复了帖子 【献给初学者】western blot操作步骤2012版 409天前
    我前一天提出来的核蛋白,第二天加buffer煮沸变性12000r离心之后有沉淀,开始没太在意,后面做WB就没有条带,内参和目的都没有,是不是蛋白被离下去了,还是我提蛋白没有彻底裂解,现在很疑惑,请问大家有遇到类似情况的吗 ?

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