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  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 wb实验,克服不了的黑背景,求助 46天前

    图1是用荧光二抗孵育,曝光的条带图2是用辣根过氧化物酶孵育,ecl发光之后曝出的条带。不知道是哪里出了问题,背景很黑,求帮助

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 62天前
    cheff0412 42kda-68Kda可以一起转的,我们一般是100v, 90min; 也有可能是你样品制备的问题,100℃建议煮10-15min; 有阳性样品的话可以一起跑看看;细胞样品,浓度不是很大,蛋白变性的时间延长会好些么?另外是沸水浴煮蛋白较好还是加热器100℃高温变性比较好呢?
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 62天前
    cheff0412 转膜时需要低温环境,以免温度过高导致甲醇挥发而影响转膜效率; 可以在电泳槽里放一个冰袋,然后将整个电泳槽置于冰浴;注意不要将碎冰弄到电泳槽里; Marker转不充分,是大分子量的marker转不完全吗,这应该是由于转膜时间较短或者转膜效率低导致; 不过考虑到你目的蛋白只有68kDa,可能影响不大,只要分子量大小接近68kDa的Marker带完全转过去就好; 另外转膜液最好现配现用,使用次数不要超过两次。转膜黑面和白面 海绵上各铺三张滤纸可以么?最近出现了marker转花的现象,转成一条红线或者蓝线,样品的位置也出现了一些marker的颜色
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 62天前
    把转膜液放在-20℃保存,电泳之前取出,转膜的时候转膜液里面还有很多没融化的碎冰
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 77天前
    cheff0412 42kda-68Kda可以一起转的,我们一般是100v, 90min; 也有可能是你样品制备的问题,100℃建议煮10-15min; 有阳性样品的话可以一起跑看看;最近又出现了一个问题,转膜始终有一点marker转不过去,100v,1h这个条件之前用没什么问题,最近两次都转的不太成功,师姐说可能由于温度太低,我的转膜液里面有很多碎冰,外面也加了冰袋包裹,可是转膜得低温吧,请您给些建议,谢谢
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 77天前
    cheff0412 42kda-68Kda可以一起转的,我们一般是100v, 90min; 也有可能是你样品制备的问题,100℃建议煮10-15min; 有阳性样品的话可以一起跑看看;最近出现了一个问题,转膜始终有一点marker转不过去,100v,1h这个条件之前用没什么问题,最近两次都转的不太成功,师姐说可能由于温度太低,我的转膜液里面有很多碎冰,外面也加了冰块包裹,可是转膜就得是低温吧,这个问题让我比较困扰
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 80天前
    请问您用的是哪种二抗呀?荧光二抗还是HRP呢?丽春红染色之后能看到的条带特别浅是为什么呢?42kda-68Kda的蛋白转膜可以一起转吗?大概多久呢,我真是刚接触这个实验,不会的特别多,问了好多问题,希望您不要介意谢谢😊
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。 82天前

    细胞样本,RIPA强裂解液低温裂解,BCA测蛋白浓度按上样20ug计算上样体积大概在5-10ul,用的4×的上样缓冲液,100℃变性5min,10%,12孔的胶,每孔上样20ul,100v恒压电泳到溴酚蓝到达底部,低温转NC膜100v,1h。丽春红染色,之后洗膜,封闭液封闭1h,过夜敷一抗,敷荧光二抗,然后除了marker啥也看不到求帮助

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 AD动物模型是选择大鼠还是小鼠呢? 82天前
    请问是成模快还是有什么特殊之处呢?
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 细胞线粒体膜电位染色怎么拍照? 313天前

    对给药后的癌细胞进行线粒体膜电位的检测,试剂盒说明书上讲会有绿色和红色荧光,绿色变强红色会相对变弱吧,用荧光显微镜拍出的绿色荧光特别清晰,红色荧光上面就有很多黄色的圈呢?绿色和红色结合的颜色么?好奇怪,求经验人士给讲解一下,谢谢

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 多重荧光一定要用共聚焦显微镜才拍吗? 313天前

    进行了多重免疫荧光染色,一抗孵育,二抗探针染绿色荧光,而后又进行hoechst染蓝色荧光,同一个视野下想要拍出蛋白表达和凋亡的效果,普通带荧光的显微镜是不是做不到?有了解共聚焦显微镜的没?麻烦给科普一下呗,多谢多谢

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 免疫荧光图怎么拍才标准呀? 313天前

    用hoechst染色,是不是亮蓝色代表凋亡?还拍到个心形视野,染色多久合适呢,说明书有说5min,也有20min的,我都试过,感觉荧光强度都挺强的,多少倍的合适?怎么拍比较标准?

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 细胞侵袭与迁移 313天前

    做了次细胞侵袭,胶擦的也算干净,计数是数紫块儿还是紫点儿呢,还有空圈,该怎么计数呢?用多大倍数的显微镜拍合适呢?求指点

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 患者听不到,也不识字,配合很困难,有啥好办法沟通 345天前
    您没有权限阅读该帖子
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 细胞划痕实验详解 347天前
    没有看懂是怎样进行划痕滴,先在六孔板背面画线,每孔大概五条线,想请教楼主,孔板里是按照mark笔画在背面线的印迹开始划痕吗?还是垂直于背面的线划痕?如果每孔五条线,成片生长的细胞划痕很容易把细胞连起来呢
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 AD动物模型是选择大鼠还是小鼠呢? 350天前

    查阅文献AD模型用大鼠造模的居多,小鼠的也有,造模一般多久会成功,是不是要反复用水迷宫进行验证呢?

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  回复了帖子 求chemdraw安装包,谢谢 351天前
    优秀,谢谢
  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 求chemdraw安装包,谢谢 353天前

    我就没找到一个可以成功安装的版本,试了那么多次,都在最后安装的时候出现各种问题,求好心人帮忙,分享个安装呗,感谢感谢😊

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 LPS诱导之后的细胞形态,怎么像是污染了呢? 360天前

    LPS用DMEM溶解稀释,之前加没滤的LPS,用最大倍数显微镜观察细胞里面长了像小虫的东西,后来用0.22um滤过lps,培养12h,小倍数看着没什么变化,最大倍数看还是有像细菌一样的东西,有些是会动的,但是培养液的颜色没变化,也没出现浑浊,不明白是哪里出了问题,还请园友指教

  • 可苦可乐A88E
    可苦可乐A88E  发布了新帖 细胞血清,胰酶,双抗及mtt过滤用什么滤膜? 384天前

    过滤除菌用0.22微米的水膜还是有机膜滤?PVDF膜是两相都可以过滤吗?网上查PVDF膜孔径不同,还会吸附分子量不同的蛋白,滤胎牛血清是不是不可以用?

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