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  • dxy_02hcd924
    dxy_02hcd924  发布了新帖 简单也不简单---CCK8与MTT 123天前

    是什么CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8,也就是进行细胞计数的一个盒子。那它的用途也就大致可以猜到,和细胞增殖、细胞毒性相关的实验都可以。CCK8的原理在CCK-8试剂盒中,最主要的化学药品是WST-8,化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的核心基团和MTT是一样的,是MTT的升级版本。在电子耦合试剂(也就是细胞是活的,有呼吸,有能量代谢)存在的情况下,可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多,产生的Formazan就越多,颜色也会越深。     所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,

  • dxy_02hcd924
    dxy_02hcd924  发布了新帖 如何设计国自然热点circRNA研究路线 123天前

    1)国自然热点    国自然课题热点中 circRNA、LincRNA、circRNA、ceRNA项目呈逐年增长趋势(2)了解circRNA的研究技术路线前期实验设计思路:先讲miRNA→再讲mRNA→最后circRNA→细胞模型+大鼠模型→IVDDStep1:选择细胞模型和动物模型发现临床问题后,确定细胞和动物模型,在细胞、动物模型中来建立临床问题和科学假说的直接联系。    可以取组织或者器官最丰富或者最重要的细胞系或者原代细胞,进行传代培养Step 2:先从哪个分子着手呢?miRNA!先从miRNA入手吧,上可找circ,下可寻mRNA。呵呵,没钱测序?GEO里有啊那接下来就是一顿围绕miRNA的操作了:Q

  • dxy_02hcd924
    dxy_02hcd924  发布了新帖 血管生成实验的简单分享~相互学习进步 123天前

    血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速,因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且适合研究药物对这一过程的影响。

  • dxy_02hcd924
    dxy_02hcd924  发布了新帖 双荧光素酶载体构建 123天前

    双荧光素酶载体构建实验原理荧光素酶报告基因表达的转录调控常被用来研究培养细胞的生物学特性。荧光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通常,报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响,共转染的“对照”报告基因会作为内对照,为试验提供一基准线。实验报告基因经过内参照的处理可以减小细胞活性和转染效率对实验的影响,因此双报告系统减少了外部干扰,使得实验数据更可信。实验中报告基因和对照基因的酶没有种源同源性,萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶对应不同的反应底物,反应中没有任何的交叉干扰。双荧光素酶检测通常用于验证lncRNA、基因、启动子中与miR的靶向结合位点;验证某一基因对另一

  • dxy_02hcd924
    dxy_02hcd924  回复了帖子 我的e-CTD进展14:后续追加参考文献! 151天前
    我觉得说的挺好的

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