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丁香客

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  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 如何在分离纯化中保护蛋白质的游离巯基? 1029天前
    楼主你好,很遗憾9年后看到你的帖子,请问你们游离巯基保护的问题解决了吗?
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 用proteinA或proteinG蛋白纯化洗脱时如何快速调节PH会不出现沉淀。 1158天前
    应该不会沉淀的,不知楼主怎么操作的?正常来说只要不跨越等电点和变性蛋白不会沉淀!楼主用proG捕获的是人源的还是鼠源的?我有个项目,鼠源-Fc用proA不能捕获,不知楼主和其他战友遇到过类似的问题吗?
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 proteinA纯化得率不高怎么办? 1163天前
    楼主的上样液质量咋样?不如聚体降解物含量?理论来说pH3.0收率应该100%,你用的什么缓冲体系?
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 融合蛋白中的truncation指什么,有什么造成的? 1163天前
    楼主的问题解决了吗?
  • cysteine
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 抗体酸性异构体去除 1164天前
    关键是细胞株是合作单位购买的,上游同事也进行了酸区优化,而且本项目比较特殊,有一个氧化的杂质在酸区中,此氧化杂质上游培养中一定会产生,所以只能通过下游纯化去除,还是比较纠结的。
  • cysteine
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 抗体酸性异构体去除 1164天前
    是的,我的意思也是筛选buffer,及缓冲体系的浓度。目前好像酸区去除最好的方式就是pH淋洗,我了解的几个项目都是小试到中试酸区淋洗这一步重现性不好。目前中试就是采用的分段收集方式,检测合格后再合并。现在最头疼的就是小试到中试工艺不稳定。
  • cysteine
    cysteine  回复了帖子 抗体酸性异构体去除 1164天前
    我小试都是采用20mL的柱子!这篇文献我也看过,有个想法就是可不可以结合pH和电导一起洗脱,我考虑放大的不可重复性可能是由于淋洗缓冲体系的不稳定,有一篇文献中提到,可以寻找一种线性缓冲体系,打算试试这个方法,就是想请教一下其他战友的经验!
  • cysteine
    cysteine  发布了新帖 抗体酸性异构体去除 1165天前

    小弟在做一个单抗项目,阳离子精纯前酸区含量25%,原研10%左右,目前阳离子中加入淋洗步骤(pH),洗脱采用盐洗脱,但是淋洗步骤的pH很难控制,小试淋洗pH7.2可以满足要求,适当放大后pH7.2不能淋洗下来,稍微提高淋洗pH至7.35才能淋洗,用pH7.35淋洗液进行小试,蛋白全部被洗脱下来。请问战友们原因何在?对于酸区去除有哪些更好地心得及经验!!!!

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