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【求助】关于DBC 测试 上柱后基线上移,载量如何算

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  • cpu随风而逝
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 23天前

    回复:去岩藻糖修饰的抗体药技术

    其实你已经解答了。GlycoMab  不是敲出原有Fut8基因,还是在细胞系内多导入了两个基因使其能同时表达GnTIII and ManII这两个酶,导致在糖链形成二分型b1-4葡萄糖酰胺,这样一来由于空间效应,导致Fuc加不上,从而与FcrRIIIa结合力提高后提高了...
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 去岩藻糖修饰的抗体药技术 24天前
    其实你已经解答了。GlycoMab  不是敲出原有Fut8基因,还是在细胞系内多导入了两个基因使其能同时表达GnTIII and ManII这两个酶,导致在糖链形成二分型b1-4葡萄糖酰胺,这样一来由于空间效应,导致Fuc加不上,从而与FcrRIIIa结合力提高后提高了ADCC。参考 文献The Carbohydrate at FcγRIIIa Asn-162  AN ELEMENT REQUIRED FOR HIGH AFFINITY BINDING TO NON-FUCOSYLATED IgG GLYCOFORMSCDC主要是跟C1q结合,其报道的活性于重链恒定区CH2序列有关、。Idusogie EE等利用丙氨酸扫描突变技术研究了抗CD20抗体rituximab的C
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 我用弱阳离子柱CM-FF纯化毕赤酵母表达的重组蛋白,刚开始洗脱,就出峰了,而且是宽峰 28天前
    1、根据你的pI值,选择更低的缓冲液pH,是结合更牢。看下缓冲液电导是不是比较高,洗脱液选择更低的盐2、换强离子,增加结合力
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 31天前
    50mM NaAC 体系 电导才0.5ms/cm ? 貌似我的经验里不止这个数啊- -20mM应该就有1.3左右。请问逐步稀释或者换液什么意思?你调直接调pH不是容易产生沉淀,我的意思是加中性缓冲液进行稀释同时缓慢将pH提高,或者就直接去透析换液,让pH转换更温和些。。不过我觉得你一步下来pH是4.5,有点异常。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 32天前
    哦,看错,看到载量0.23mg/mL,觉得很奇怪,,原来就是上样量少的缘故。 用的是50mM的盐,为何洗脱电导才0.4ms/cm? 1、两者的配基肯定有不同的,虽然都是Protein A,但是重组的,不同厂家不同类型,结构域选取的不一样。具体哪块Poros A/20 没找到资料。 遇到过有个项目测Titer 用其他品牌的不结合,最终只有Poros A/20结合、 建议试试Thermo的MabA 填料 同品牌 2、洗脱pH3.5,拉的梯度,4.5就能洗脱,这个结合得也太不牢了吧,,正常3.8左右比较常见- - 通过逐步稀释的方式调节pH或者换液的方式看看是否可行,pH4.5.不是特别低 3、实在捕获不到,可尝试阳离子捕获
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 32天前
    哦,看错,看到载量0.23mg/mL,觉得很奇怪,,原来就是上样量少的缘故。 用的是50mM的盐,为何洗脱电导才0.4ms/cm? 1、两者的配基肯定有不同的,虽然都是Protein A,但是重组的,不同厂家不同类型,结构域选取的不一样。具体哪块Poros A/20 没找到资料。 遇到过有个项目测Titer 用其他品牌的不结合,最终只有Poros A/20结合、 建议试试Thermo的MabA 填料 同品牌 2、洗脱pH3.5,拉的梯度,4.5就能洗脱,这个结合得也太不牢了吧,,正常3.8左右比较常见- - 通过逐步稀释的方式调节pH或者换液的方式看看是否可行,pH4.5.不是特别低 3、实在捕获不到,可尝试阳离子捕获
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 关于重组Fc融合降解问题的疑问 32天前
    检测过两个,在C端某个位点上,第三个还没反馈结果。 考虑过酶降解的问题,但也就该样品就在His6.0里出问题,其他类型没出问题。该样品在其他体系也没出异常,所以还是样品在His6.0的体系里发生了某些反应,不知道His和酶反应有没有相关性
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 32天前

    回复:抗体药物的多聚体高

    4楼是一个方法,另一个更简单或者直观的,可以取上清,对比跑胶看下聚体条带的位置及比例是否有发生改变。另外的洗脱时加保护剂 如高浓度精氨酸在看下聚体情况,也可以知道是否是纯化引起去除聚体 离子交换是常用的一个方法,疏水和复合模式有时是去除聚体更有效的方法。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 32天前
    表格单位确认下没有标错? 1、Poros A/20 与Mabselect 系列配基还是有差异的,存在PoroA 能挂柱 Mab系列挂不住,Sure Sure Lx PrismA配基也有差别,结合域也有差异。 Protein G HP 是没有穿透? 那么还是关注下结合域。  类型是G4? 2、收率低还是在于沉淀。 Elution 电导太低- -基本无缓冲能力,抗体不稳定。建议洗脱剂增加至20mM,同时增加稳定剂,可尝试精氨酸。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体药物的多聚体高 32天前
    4楼是一个方法,另一个更简单或者直观的,可以取上清,对比跑胶看下聚体条带的位置及比例是否有发生改变。另外的洗脱时加保护剂 如高浓度精氨酸在看下聚体情况,也可以知道是否是纯化引起去除聚体 离子交换是常用的一个方法,疏水和复合模式有时是去除聚体更有效的方法。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 关于重组Fc融合降解问题的疑问 32天前
    最近遇到几个项目,包括普通单抗和融合蛋白,发现在His 6.0 Buffer中在重链C端出现断裂,换液到其他缓冲体系或其他pH不存在这个问题,目前还未找到共性。有了解的战友可以分享下。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体Fc融合蛋白药物质控做什么? 52天前
    查下日本药局方,信息会多些
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 电荷异质体含量怎么确定 63天前
    新药自己订标准,确定相关杂质不是关键的CQA后,一般都是工艺稳定后,订自己能达到的标准。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  悬赏5丁当求助 67天前

    糖型检测方法验证

  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体Fc融合蛋白药物质控做什么? 87天前
    新药 or 类似物。 后者可以去FDA  EMA  和日本药局方等等已上市的国家和地区,找申报材料。前者可参考类似药物。   我看下来 和抗体质控标准 类似- - 关注本身蛋白分子的独特之处,一般会增加一个反相检测蛋白本身的纯度。 
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体新药研发流程图 101天前
    楼主,图下载下来后不太清楚,是否发个原图,方便编辑查看。 有几个以下几点补充和几个疑惑和大家一起探讨。1、前期新药发现后主要做的是成药性分析,然后对结构进行进一步优化。同时在这个阶段目前很多公司就开始做药效药代安全性评价了,用瞬转的样品而非用稳转。2、质量分析方法验证 是否应该用中试样品?小试样品做方法开发和确认3、工作标准品的确定,中试后确定一批是肯定的,但分析方法开发时也需要,那前期用哪个阶段的样品比较合适?
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 单抗抗体制剂发黄 119天前
    站里有 直接收标题就行- -http://dxy.me/n6bUni
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 请教非还原与还原CE-SDS 测定NGIgG 和NGHC 差异 127天前
    好的 谢谢您的回答,学到了很多。
  • cpu随风而逝

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