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【求助】关于DBC 测试 上柱后基线上移,载量如何算

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  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 讨论双抗、抗体等断裂位点 4天前
    好的,谢谢。 这种酶促催化在重组蛋白遇到的会比较多,而且如你们所说主要是在细胞培养阶段,一旦纯化后产生的各类断裂,基本都是非酶催化导致的。  另外再想咨询下,你们的经验加酶抑制剂,对表达量影响大吗?
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 讨论双抗、抗体等断裂位点 4天前
    除了酶类引发的断裂,更多的是非酶催化的。 分享的文章讲得是非酶催化的,下图显示的蛋白不同pH时几个主要的断裂位点,D-X和X-S是最常见的。断裂不是断裂在肽键,而是侧链基团进攻氨基酸C原子,引发的氨基酸本身化学键断链。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  发布了新帖 讨论双抗、抗体等断裂位点 5天前

    最近在做一些双抗项目(单抗链接一些细胞因子)以及抗体项目。时常出现断裂现象,包括linker,因子,以及本身单抗分子断裂。这些断裂不只是在常见的铰链区发生断裂。我先分享一篇综述,介绍碎片的形成机理。大家可以分享下自己的经验及问题。再想求助各位战友,有预测断裂位点的网站否?

  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 SEC-MALLS 检测相关问题 16天前
    保留时间不受蛋白形状的影响,可以通过保留时间直观知道分子量大小。 直接SEC检测,保留时间因形态不同保留时间变化会很大
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 求问西妥昔单抗或者曲妥珠单抗中二硫键的打开对单抗的活性有没有影响? 39天前
    我觉得应该是有的,二硫键影响构象的,构象直接影响和抗原等物质的结合。
  • cpu随风而逝
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 81天前

    回复:去岩藻糖修饰的抗体药技术

    其实你已经解答了。GlycoMab  不是敲出原有Fut8基因,还是在细胞系内多导入了两个基因使其能同时表达GnTIII and ManII这两个酶,导致在糖链形成二分型b1-4葡萄糖酰胺,这样一来由于空间效应,导致Fuc加不上,从而与FcrRIIIa结合力提高后提高了...
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 去岩藻糖修饰的抗体药技术 81天前
    其实你已经解答了。GlycoMab  不是敲出原有Fut8基因,还是在细胞系内多导入了两个基因使其能同时表达GnTIII and ManII这两个酶,导致在糖链形成二分型b1-4葡萄糖酰胺,这样一来由于空间效应,导致Fuc加不上,从而与FcrRIIIa结合力提高后提高了ADCC。参考 文献The Carbohydrate at FcγRIIIa Asn-162  AN ELEMENT REQUIRED FOR HIGH AFFINITY BINDING TO NON-FUCOSYLATED IgG GLYCOFORMSCDC主要是跟C1q结合,其报道的活性于重链恒定区CH2序列有关、。Idusogie EE等利用丙氨酸扫描突变技术研究了抗CD20抗体rituximab的C
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 我用弱阳离子柱CM-FF纯化毕赤酵母表达的重组蛋白,刚开始洗脱,就出峰了,而且是宽峰 85天前
    1、根据你的pI值,选择更低的缓冲液pH,是结合更牢。看下缓冲液电导是不是比较高,洗脱液选择更低的盐2、换强离子,增加结合力
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 88天前
    50mM NaAC 体系 电导才0.5ms/cm ? 貌似我的经验里不止这个数啊- -20mM应该就有1.3左右。请问逐步稀释或者换液什么意思?你调直接调pH不是容易产生沉淀,我的意思是加中性缓冲液进行稀释同时缓慢将pH提高,或者就直接去透析换液,让pH转换更温和些。。不过我觉得你一步下来pH是4.5,有点异常。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 89天前
    哦,看错,看到载量0.23mg/mL,觉得很奇怪,,原来就是上样量少的缘故。 用的是50mM的盐,为何洗脱电导才0.4ms/cm? 1、两者的配基肯定有不同的,虽然都是Protein A,但是重组的,不同厂家不同类型,结构域选取的不一样。具体哪块Poros A/20 没找到资料。 遇到过有个项目测Titer 用其他品牌的不结合,最终只有Poros A/20结合、 建议试试Thermo的MabA 填料 同品牌 2、洗脱pH3.5,拉的梯度,4.5就能洗脱,这个结合得也太不牢了吧,,正常3.8左右比较常见- - 通过逐步稀释的方式调节pH或者换液的方式看看是否可行,pH4.5.不是特别低 3、实在捕获不到,可尝试阳离子捕获
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 89天前
    哦,看错,看到载量0.23mg/mL,觉得很奇怪,,原来就是上样量少的缘故。 用的是50mM的盐,为何洗脱电导才0.4ms/cm? 1、两者的配基肯定有不同的,虽然都是Protein A,但是重组的,不同厂家不同类型,结构域选取的不一样。具体哪块Poros A/20 没找到资料。 遇到过有个项目测Titer 用其他品牌的不结合,最终只有Poros A/20结合、 建议试试Thermo的MabA 填料 同品牌 2、洗脱pH3.5,拉的梯度,4.5就能洗脱,这个结合得也太不牢了吧,,正常3.8左右比较常见- - 通过逐步稀释的方式调节pH或者换液的方式看看是否可行,pH4.5.不是特别低 3、实在捕获不到,可尝试阳离子捕获
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 关于重组Fc融合降解问题的疑问 89天前
    检测过两个,在C端某个位点上,第三个还没反馈结果。 考虑过酶降解的问题,但也就该样品就在His6.0里出问题,其他类型没出问题。该样品在其他体系也没出异常,所以还是样品在His6.0的体系里发生了某些反应,不知道His和酶反应有没有相关性
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 89天前

    回复:抗体药物的多聚体高

    4楼是一个方法,另一个更简单或者直观的,可以取上清,对比跑胶看下聚体条带的位置及比例是否有发生改变。另外的洗脱时加保护剂 如高浓度精氨酸在看下聚体情况,也可以知道是否是纯化引起去除聚体 离子交换是常用的一个方法,疏水和复合模式有时是去除聚体更有效的方法。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 90天前
    表格单位确认下没有标错? 1、Poros A/20 与Mabselect 系列配基还是有差异的,存在PoroA 能挂柱 Mab系列挂不住,Sure Sure Lx PrismA配基也有差别,结合域也有差异。 Protein G HP 是没有穿透? 那么还是关注下结合域。  类型是G4? 2、收率低还是在于沉淀。 Elution 电导太低- -基本无缓冲能力,抗体不稳定。建议洗脱剂增加至20mM,同时增加稳定剂,可尝试精氨酸。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体药物的多聚体高 90天前
    4楼是一个方法,另一个更简单或者直观的,可以取上清,对比跑胶看下聚体条带的位置及比例是否有发生改变。另外的洗脱时加保护剂 如高浓度精氨酸在看下聚体情况,也可以知道是否是纯化引起去除聚体 离子交换是常用的一个方法,疏水和复合模式有时是去除聚体更有效的方法。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 关于重组Fc融合降解问题的疑问 90天前
    最近遇到几个项目,包括普通单抗和融合蛋白,发现在His 6.0 Buffer中在重链C端出现断裂,换液到其他缓冲体系或其他pH不存在这个问题,目前还未找到共性。有了解的战友可以分享下。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体Fc融合蛋白药物质控做什么? 109天前
    查下日本药局方,信息会多些
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 电荷异质体含量怎么确定 121天前
    新药自己订标准,确定相关杂质不是关键的CQA后,一般都是工艺稳定后,订自己能达到的标准。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  悬赏5丁当求助 124天前

    糖型检测方法验证

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