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【求助】关于DBC 测试 上柱后基线上移,载量如何算

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  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 纯化后蛋白超滤换液会出现沉淀,怎么解决? 4天前
    做TM是不换液,Buffer体系溶剂大,样品浓度高,稀释倍数会很大原buffer体系不影响。  常规换液就用超滤管,温和些就用透析
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 22天前

    回复:纯化后蛋白超滤换液会出现沉淀,怎么解决?

    自由的柚柚 那请问你的沉淀了的蛋白后来怎么处理了?另外初筛缓冲液还是用膜包超滤换液来的吗?针对有沉淀的那些岂不是都没法要了?有用小量筛选的方法吗?比如用超滤管这种直接换液筛选的方法如你所说太费时而且费样品,我们目前给其他客户做的方法通过DSF测定不同buffer下Tm值,可以3...
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 纯化后蛋白超滤换液会出现沉淀,怎么解决? 23天前
    这种直接换液筛选的方法如你所说太费时而且费样品,我们目前给其他客户做的方法通过DSF测定不同buffer下Tm值,可以3小时内完成几十种条件的筛选,通过评价Tm值及峰型,可以评估每种Buffer的情况。 同时微量,大概200ug即可
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 打开重组蛋白非共价键 23天前
    二聚体峰? 多大分子量,估计是单硫键引起的吧, 参考这个帖子去找问题http://dxy.me/dQy5If
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 打开重组蛋白非共价键 25天前
    好的谢谢。 想问下硫酸钠的原理大概是啥? 后两者应该是指都属于离液序列高的物质,破坏了分子间作用力吧
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  发布了新帖 打开重组蛋白非共价键 25天前

    最近在做一个项目,电泳图上出现了一个小分子量的杂蛋白。 尝试了所有方法,离子、疏水、分子筛均不能有效分离。  怀疑存在了非共价导致其结合在一起。 试验变性条件的SEC-HPLC流动相改为盐酸胍,确能有效分离杂蛋白。但是应用到纯化过程时,蛋白遇盐酸胍即发生沉淀。  又试验了其他微变性条件,如2M Urea ,加热到50度、加0.1%SDS、加有机相ACN等,不能使杂蛋白分离,且有大量聚合物产生。 请各位战友支招,是否还有其他可以尝试的条件。

  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 FC融合蛋白单抗的CDR区域怎么查找 25天前
    大概知道你的意思,你的蛋白是个Fc融合蛋白,它不是个单抗--  单抗是有CDR区的说法,因为有对应恒定区等等,有对应的抗原。 一般的蛋白貌似没有CDR区这个说法的,只能说是跟某些蛋白有相应的结合位点, 
  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
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  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 抗体的SDS non-reduced结果 29天前
    最近做一个IgG1的项目也遇到了主峰分叉的问题,回来学习下,看看是不是有新进展。 两个目标分子,仅几个氨基酸区别,但一个主峰分叉。另一个是对称的。 糖型差不多,如果是二硫键引起的问题,该如何去确认?  
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 32天前
    对的,还原非还原即可知道是否是二硫键,在还原状态下是可以打开正常二硫键引起的多聚的。   而变性与否可以判断是否是共价结合,我是这么理解的。
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  的帖子被加了1分 32天前

    回复:Fc重组融合蛋白的聚体现象

    先Mark一下,正好有个项目也遇到了类似问题,高表达量的克隆 聚体偏高几个点。而且形成的是共价结合非二硫键的多聚。    目前还在探索原因,有进展之后再分享。 目前思路从以下两方面考虑,再推测是不是细胞问题。1、培养工艺,如活率、细胞密度等2、纯化,...
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 34天前
    先Mark一下,正好有个项目也遇到了类似问题,高表达量的克隆 聚体偏高几个点。而且形成的是共价结合非二硫键的多聚。    目前还在探索原因,有进展之后再分享。 目前思路从以下两方面考虑,再推测是不是细胞问题。1、培养工艺,如活率、细胞密度等2、纯化,亲和时柱结合浓度及洗脱时浓度相对高导致的低pH 聚集3、克隆本身问题看看还有啥补充 
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 1.1类生物制剂 34天前
    据我所知,应该不能吧,只有那种特需,类似治疗埃博拉疫情这种暂无有效治疗手段疾病的药物,可以边做3期边应用。  欢迎其他战友补充 
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 SEC-HPLC分析单抗有人用双柱串联的方式进行的吗? 34天前
    这个情况遇到过几次倒并未深入研究,除类似版主说的多翻译氨基酸外,,我猜测是不是也有一些碎片和主峰非共价结合导致的共洗脱产生的。  之前看到文章说SEC 测定碎片相对CE偏差大的原因,一部分是分离度的问题,另一部分原因就是某些小分子杂质与主峰、聚体通过共价键共洗脱导致。 
  • cpu随风而逝
    cpu随风而逝  回复了帖子 SEC、CE-SDS等峰出现拐点是否需要砍峰 34天前
    我觉得先去判断是方法问题造成的拖尾还是确实有物质。 前者继续优化,采用更精密准确的,,以及其他分析方法去判断,如HPLC换UPLC。 据做了一些蛋白的稳定性加速实验,这些最初看似拖尾的地方,随着时间的增加,会逐渐出现拐点,直到最后出现能识别的峰,应该是有新的物质产生。SEC的拐点,一般都是一些断裂物质。 然后CE上的LC,可能是类似于有类似于Fd的物质产生,而HC后拐点,也遇到过,至今还没看到文献去鉴定解释,有经验的可以继续分享下。 至于 如何砍才能被CDE接受,等有申报后经验的战友分享了。     

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