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【求助】T载体的连接???

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  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncRNA pull down 161天前
    没做过耶,我觉得你研究一下miRNA probe怎么设计,其它的应该一样。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncrna质粒构建目的基因p不出来 258天前
    用5'RACE 或者3'RACE方法试试。很多人说很好用,我没有用过。我是用过最普通的PCR克隆的。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncRNA 258天前
    推荐一家 美国公司,比较靠谱,如果找不到ready to order的FISH probe,可以在在他网站设计并合成。http://dxys.com/OugJmT
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 求助lncRNA siRNA设计原则 306天前
    我用的GapmeR, 你看看这个连接http://dxys.com/nUgDxn把序列粘贴进去,自动给你设计好的。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 双荧光素酶报告基因实验 320天前
    理论上包含binding sites的一个片断就可以,具体多长也取决于附近碱基容易扩增不,其实都没有特殊要求,各加+100bp就可以。很容易的一个试验,也许不需要公司吧。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncRNA与miRNA形成ceRNA的表达关系 326天前
    理论上是这样,但是也不尽然,举个例子。miRNA-34/snail 是一个经典的互相抑制的例子,miRNA-34 target Snail 并且抑制其表达, 反过来Snail binding miRNA-34 gene promoter 从而抑制。如果某个lncRNA X是miRNA-34的ceRNA,这样理论上,miR-34 inhhibits X如果X和Snail是一个正相关或者负相关基因,这样 X上调或者下降,从而调控Snail, 又间接的regulate miRNA-34表达。一己之见哈。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 如何寻找某基因的启动子 326天前
    已发
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 如何寻找某基因的启动子 328天前
    邮箱?
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 circRNA和miRNA 334天前
    对的。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 如何通过生物信息学预测lncRNA与靶基因? 334天前
    打开你多点点,就知道怎么用了。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncRNA pull down 334天前
    谢谢版主的厚爱,谢谢大家支持。
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 怎么批量分析蛋白相关的信号通路? 334天前
    不谢,希望有帮助... ...
  • binglangcha
    binglangcha  的帖子被加了1分 335天前

    回复:慢病毒质粒的使用

    给你个建议把,不管曼病毒包装,或者只是质粒瞬转, 你细胞可以看到GFP,并且可以用药筛。1. 你可以Flow cytometry 做sorting,筛选GFP细胞,96 well plate, single GFP cell/well, 然后培养观察,当你发现每孔只有一个细胞团(...
  • binglangcha
    binglangcha  的帖子被加为精华了 335天前

    lncRNA pull down

  • binglangcha
    binglangcha  的帖子被加了3分 335天前

    lncRNA pull down

    lncRNA最近比较火热,目前的研究已经不局限于研究它和miRNA 的ceRNA功能,更多的开始研究lncRNA binding protein,这就涉及到lncRNA pulldown 的方法。看到论坛里,好多童鞋都在问它的具体protocol,我有时候也回答一些,这里就具体写...
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 lncRNA pull down 339天前
  • binglangcha
    binglangcha  发布了新帖 lncRNA pull down 354天前

    lncRNA最近比较火热,目前的研究已经不局限于研究它和miRNA 的ceRNA功能,更多的开始研究lncRNA binding protein,这就涉及到lncRNA pulldown 的方法。看到论坛里,好多童鞋都在问它的具体protocol,我有时候也回答一些,这里就具体写一下,希望对大家有帮组。lncRNA pulldown,最近比较流行的是有三种方法,分别是Chromatin Isolation by RNA purification (ChIRP), RNA Antisense Purification with Mass Spectrometry (RAP-MS)和Capture hybridization analysis of RNA targets (CHART). 三种

  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 慢病毒质粒的使用 367天前
    给你个建议把,不管曼病毒包装,或者只是质粒瞬转, 你细胞可以看到GFP,并且可以用药筛。1. 你可以Flow cytometry 做sorting,筛选GFP细胞,96 well plate, single GFP cell/well, 然后培养观察,当你发现每孔只有一个细胞团(一个细胞繁殖形成的一托),并且还是GFP的时候,你可以等细胞团长的大,转到24 well plate。。。。2.你把未转染细胞和转染细胞分别加到6 well plate,然后都用摇筛选,理论上空细胞那孔都被杀死后, 你的转染细胞那孔留下的都是阳性细胞,并且还是很高的percentage. 方法1 和2 可以平行的,你可以分别用,也可以合并起来使用。Finger Cross!
  • binglangcha
  • binglangcha
    binglangcha  回复了帖子 长链非编码RNA(lncRNA)干货大全,珍藏! 367天前
    打不开

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