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【专题讨论】细胞培养及应用讲座(在北京)

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【求助】请问上海哪家公司有fibronectin(粘连蛋白)出售?

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  • beijing1982
    beijing1982  回复了帖子 脐静脉内皮细胞的形态学观察和鉴定 181天前
    都可以的,选那个都行,都属于内皮细胞标志物
  • beijing1982
    beijing1982  回复了帖子 求人肺动脉平滑肌细胞 450天前
    原代细胞最好是4到6代做实验
  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 胎牛血清与新生牛血清的三大区别 458天前

    胎牛血清是实验室里细胞培养中用量最大的天然培养基,因为胎牛从未接触过外界,而使得其血清中所含的抗体和补体几乎没有对细胞有害的成分。并且高质量的胎牛血清含有的丰富营养成分可以满足细胞生长需求,在应用于动物细胞的体外培养中发挥出重要作用。那么为什么人们一定要用胎牛血清而不用新生牛血清呢?想知道两者之间都有哪些区别不妨看看以下小编归纳的几点内容:1、来源不同胎牛顾名思义就是指还在母牛身体里的小牛,所以胎牛血清的采集工作,便是先从怀孕中的母牛身体里取出胎牛。之后人们在未发育完全的胎牛的心脏进行穿刺取血,完成采血的工作以后便再通过一系列的工艺处理获得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集自已经出生一段时间的小牛,而且它们的发育相对于胎牛而言更加完全。2、组份与比例不同虽然胎牛血清与新生牛血清的成分并不存在很

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 使用胎牛血清的三大注意事项 471天前

    如今已经成为各大实验室“常客”的胎牛血清,是一种采集自新鲜的牛血液的优质血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子,有效避免细胞贴壁受到机械的损伤。如此看来胎牛血清确实发挥出非常大的作用,那么为了让其充分发挥最大的价值该注意哪些事项呢?1、注意避免沉淀加入培养液添加胎牛血清的时候要注意避免把沉淀加入培养液,因为如果培养液有沉淀的存在,会使得其中培养的细胞产生大量的黑点,除此之外,细胞的表面还很可能会覆盖一层油状物质,总之出现这样的情况会极其不利于细胞的正常生长。那么为了最大程度减少血清的损失,可以把所有有沉淀的血清进行收集并做离心处理,之后便可将上清液加入培养液中使用。2、注意解冻的方法再高质量的胎牛血清也要在使用的时候坚持谨慎的原则,因此在解冻血清的时候,要细心地

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 细胞培养基的主要成分有哪些 491天前

    细胞培养基作为愈加重要的一种培养基,受到广泛的认可。科技的飞奔,使得这种培养基的种类愈加丰富、成分愈加复杂。以下是结合各种可靠的实验数据总结出来的四种主要的成分,希冀以此来帮助大家培养并且筛选出有口碑的培养基。1.形态各异的氨基酸种类繁多的细胞对氨基酸的要求各异。然而,有几种特殊而另类的氨基酸:细胞自己的代谢不能合成,却又不得不依靠培养基提供。譬如:谷氨酰胺是核酸和蛋白质的关键成分。故而,各种细胞培养基成分中都富含谷氨酰胺。2.品质一流的碳水化合物优质的碳水化合物是细胞生长主要能量来源,甚至是合成稳定性好的蛋白质和核酸的成分。譬如:可靠的葡萄糖、品质好的核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等物质都是培养基的重要组成部分。3.独具特色的无机盐靠谱的培养基中无机盐的功效:帮助细胞维持渗透压平衡。此外,

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 如何获取高质量的显微镜照片 492天前

    在原代细胞培养过程中,一张好的照片胜过千言万语。优质的照片可以传递细胞的形态、健康状况、纯度和密度。如果同时使用不同类型的2维显微镜技术,如相差、浮雕对比和荧光显微镜等,可以为你所培养的细胞提供有价值的认识。 相差显微镜通过将细胞的厚度转化成灰度级,增强了对比度。细胞的较厚区域,如细胞核,比细胞浆等较薄的区域更暗。这种技术对于评估细胞形态和培养中的纯度观察很有用。它也可以指明细胞的健康状态,如细胞质变暗,提示细胞可能受损或死亡。 图1相差显微镜下人的角质细胞、内皮细胞和成纤维细胞形态的不同之处。 浮雕对比度显微镜(也称为霍夫曼调制对比)呈现了一个阴影伪浮雕效果,它也可以用来评估培养的细胞的形态和纯度。 它特别有助于区分那些不同的细胞类型,如更扁平的细胞(如成纤维细胞)与更厚的、更圆

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 什么是血管内皮细胞呢? 497天前

    内皮细胞也称血管内皮细胞,通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮,它形成血管的内壁,具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织,还参与集体免疫活动功能。血管内皮细胞在炎症时高表达黏附分子,与血流中白细胞表面黏附分子相互作用,从而介导白细胞穿越血管壁。亦属一类非专职抗原提呈细胞。用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管,可见到血管内皮细胞,血管内皮细胞较间皮细胞小,排列紧密。内皮细胞或血管内皮细胞是一薄层的专门上皮细胞,由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁,是血管管腔内血液及其他血管壁(单层鳞状上皮)的接口。血管内皮细胞是沿着整个循环系统,由心脏直至最小的微血管。 心室内表面的血管内皮细胞称为心内膜。微血管及淋巴微管是由单一层的血管内皮细胞所组成。血管内皮细胞是分布在脑、淋巴结、肺、肝脏、

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 无血清培养基 497天前

         无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的基本配方为基础培养基及添加组分两大部分。 无血清培养基可避免血清批次间的差异影响,提高细胞培养和实验结果的重复性,减少血清对细胞的毒性作用和血清源性污染,减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰,便于对实验结果的分析。      细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。 ScienCell无血清培养基,是经灭菌的液体培养基,包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 成纤维细胞为什么被关注 499天前

    成纤维细胞如今在医学领域有着不可取代的地位,自其被发现以来就被不断地关注和研究,因为这种细胞对于人体的各方面都有着不可忽视的作用,研究人员也在不停的发掘成纤维细胞的各种类型以及不同的作用,以下就是成纤维细胞被重视的原因。第一个原因:在临床治疗中可以修复细胞损伤近几年来的研究发现成纤维细胞对于细胞坏死以及骨骼创伤等许多方面都有着非常明显的修复作用,尤其是在修复细胞损伤时得到了广泛的应用,值得相信的成纤维细胞在医学领域起到了很大的作用,对于肾脏受到损伤的患者来说也可以使用成纤维细胞进行修复。第二个原因:对皮肤可以延缓衰老成纤维细胞在女性中也非常受欢迎,众所周知对于女性的皮肤来说最重要的东西就是胶原蛋白及网状细胞,而我们所说的胶原蛋白其实就是由成纤维细胞产生的,因此其在抗氧化以及延缓皮肤衰老方面的

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 脐静脉内皮细胞传代培养 505天前

    人脐静脉内皮细胞是科研实验中常用到的内皮细胞,当人脐静脉内皮细胞达到80-90%融合时,需要对人脐静脉内皮细胞进行传代培养。1.准备培养瓶:用纤维粘连蛋白以2ug/cm2包被培养瓶,包被时间为37度一小时或4度过夜。将培养基ECM、胰酶中和液、胰酶/EDTA消化液和无钙镁离子的磷酸盐缓冲液,温度恢复至室温,我们不推荐用37°C水浴加热试剂和培养基。2.弃去原培养瓶中培养基,用10mlDPBS冲洗人脐静脉内皮细胞,然后加入2ml胰酶消化液。轻轻摇晃培养瓶以至胰酶消化液覆盖所有人脐静脉内皮细胞。如果使用ScienCell实验室的胰酶/EDTA消化液,会把胰酶消化对脐静脉内皮细胞的损害减少到最低。3.将培养瓶放入37度培养箱中1-2分钟,在孵化后期,轻轻拍打培养瓶以使脐静脉内皮细胞脱离瓶壁

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 如何选购高质量胎牛血清 507天前

    市场上的胎牛血清种类繁多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨胎牛血清质量的优劣。选购胎牛血清请注意以下几点: 一、外观拿到胎牛血清,最先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要 1、颜色根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。 国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。 进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 成纤维细胞的培养方法有哪些 510天前

    一、分离培养成纤维细胞本身的培养并不是独立化的,我们首先将成纤维组织内部的一些成分进行提取然后将其单独放置,然后经过培养皿或是某些特定器具来进行加工处理,就能够很好的起到分离培养的效果这种分离培养可以很好的扩大起生长范围,是通过其本身的自给自足作用来完成的培养方法深受许多专业人士的认可和使用,在许多情况下成纤维细胞是需要本身的自我生成来完成培养作用。二、原代培养这种原代培养源自时期的培养方式,主要就是通过成纤维细胞其本身母体细胞的培养和生成来完成的一种培养方法,现在为了保持其原有形态保持不变让其进行最为原始的生成,许多人会使用这种原代培养方法,因为这种原始的方法能够保留细胞本身所具有的所有品质及特点,只是将其细胞内部的特点进行分解和作用这种方式的成本也比较低,深受许多专家和大批量进行成纤维细

  • beijing1982
    beijing1982  回复了帖子 原代细胞复苏和传代流程详述 510天前
    经对比离心对细胞的影响要比残留的DMSO要大,所以还是不要离心的好
  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 原代细胞传代培养 513天前

    细胞培养过程中,传代是非常重要的环节,若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害,原代细胞因其培养难度高且传代次数有限,细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。美国ScienCell公司根据其丰富的原代细胞培养经验,总结出一套细胞消化的方法,有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家:1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。2. 提前准备好多聚赖氨酸(PLL)或纤维粘连蛋白(BPF)包被好的培养瓶。3. 将完全培养基,胰酶/EDTA),胰胰中和液(TNS)和不含钙镁离子的DPBS)加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。4. 用DPBS冲洗细胞。5. 以T-75培养瓶为例,向培养瓶中加入8mlDPBS,然后加入2ml胰酶/EDTA消

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 细胞培养中包被液你了解多少? 514天前

    在培养原代细胞时为了促进原代细胞贴壁需要对使用的T-25/T-75等耗材进行包被处理,常用的包被液有多聚赖氨酸和纤维黏连蛋白、明胶,其中ScienCell研究实验室研发的包被液就包含上述3种产品。其中包被液多聚赖氨酸是一种合成化合物,是带正电荷的氨基酸,通过改变培养基质表面的电极来促进细胞贴壁。在细胞培养中广泛用于包被物促进细胞贴壁。除了促进细胞贴壁生长,包被液多聚赖氨酸包被后能提高原代细胞的存活率和促进神经突长出。Sciencell出售的包被液多聚赖氨酸PLL是原液,分子量是70000~150000。包被液多聚赖氨酸以1-2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。可将1mg/ml的包被液多聚赖氨酸以灭菌双蒸水稀释100倍,T-75培养瓶中加入10ml左右,37度孵箱1小时或4度冰箱过夜,用包被液包

  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 原代细胞复苏和传代流程详述 519天前

    一、实验前准备工作:1、培养瓶的包被:包被液如多聚赖氨酸或纤维粘连蛋白,以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。37度孵箱1小时或4度过夜,从包被好的培养瓶中回收多聚赖氨酸,并用无菌水洗涤培养瓶2遍。包被好的培养瓶不要放置超过24小时,其中的包被液可吸出重复使用2-3次,注意不要污染。2、完全培养基的配置:以内皮细胞培养基为例,把配套的胎牛血清、生长因子和双抗加入基础培养液(ECM,ScienCell品牌,货号1001)中。重新贴好标签,并混匀培养基。二、原代细胞复苏方法:1、从液氮中取出原代细胞冷冻管,迅速投入37~38 ℃水浴中,其间可以轻轻转动细胞,加快融化速度,大约需要1分钟时间。2、5分钟内用培养基稀释至原体积的10倍以上,加入培养瓶中,再用1ml培养基洗涤细胞冻存管,保证

  • beijing1982
    beijing1982  的帖子被加了1分 538天前

    细胞消化知识你知道多少

    无论是原代细胞还是细胞系或癌细胞,细胞长满瓶后,需要对细胞进行传代或将细胞收集起来用作其他实验。贴壁生长的细胞必须要做的一步便是消化过程,下面便对细胞消化、中和、洗涤等过程做个简单介绍。1、绝大部分细胞消化的时候是只需用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留胰酶附着在细胞表面在37度...
  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 细胞消化知识你知道多少 539天前

    无论是原代细胞还是细胞系或癌细胞,细胞长满瓶后,需要对细胞进行传代或将细胞收集起来用作其他实验。贴壁生长的细胞必须要做的一步便是消化过程,下面便对细胞消化、中和、洗涤等过程做个简单介绍。1、绝大部分细胞消化的时候是只需用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留胰酶附着在细胞表面在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,这样连续传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。2、什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙状移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,就应该停止消化,不要

  • beijing1982
    beijing1982  回复了帖子 脐静脉内皮细胞的形态学观察和鉴定 539天前
    我说的这个细胞是原代细胞不是细胞系,原代细胞三代以内传代时间一般是2到3天,三代以后得细胞传代时间一般4到6天,包括你说人主动脉平滑肌细胞传代时间基本也是这样。
  • beijing1982
    beijing1982  发布了新帖 脐静脉内皮细胞的形态学观察和鉴定 541天前

    人脐静脉内皮细胞的形态学观察及鉴定:细胞换液后直接在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特征,并作相差摄影,同时进行常规HE染色观察并摄片。鉴定采用DAB免疫组织化学法,在6孔培养板中放置载玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的细胞悬液,待细胞贴壁后,取出载玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS冲洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室温孵育10min,PBS冲洗3次,每次2min,以消除内源性过氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相关抗原多抗工作液,放入湿盒内4℃过夜,同时另一盖玻片不加一抗作阴性对照。次日,用PBS冲洗3次,每次2min,滴加辣根酶标记的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS冲洗3次,每次2min,用DAB底物混合工作液显色,显微镜

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