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【专题讨论/原创】关于实验思路方面的讨论

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【专题讨论】In cell Western

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【专题讨论】有关异源表达的讨论

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  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 求个文献,谢谢 1379天前
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  • SmallDonkey
    SmallDonkey  发布了新帖 求个文献,谢谢 1380天前

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  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 免疫细胞荧光,两种不同的蛋白趋势一模一样? 1660天前
    先确定单标结果,如果单标没有问题,再考虑这位战友的建议,把二抗换了(二抗应该不贵,楼上的说得对,即使分开标也没用的,换吧,但需要先确定换什么荧光,可能需要deep red才行)。
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 免疫细胞荧光,两种不同的蛋白趋势一模一样? 1660天前
    不知楼主所说单标效果和双标差不多具体指哪方面?如果是我理解的这样: 单标绿色荧光的细胞在红色荧光通道下也能看到信号,那结论就很清晰了,需要仔细比较两个荧光抗体的spectrum,然后调节合适的laser和filter,根据对照把荧光信号彻底分开才行 如果楼主不是这个意思,请...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 帮忙分析下CD4+CD5+表达比例流式图 1661天前
    d1+d2+d3+d4是细胞总数 d2+d4是Cd4+总数 另一个对了
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 免疫细胞荧光,两种不同的蛋白趋势一模一样? 1661天前
    单标对照结果如何?在另一个波长下(非单标抗体对应波长)能否看到荧光?
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 帮忙分析下CD4+CD5+表达比例流式图 1663天前
    同意楼上的:D 也就是看D2,G2,H2 分别占各自细胞总数的百分比 不过说实话,这个结果看起来不是太好看,细胞总数差别太大了。。。
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 免疫细胞荧光,两种不同的蛋白趋势一模一样? 1663天前
    信息不全,分析难度比较大 两种蛋白分别是什么荧光标记的?Ex/Em应该是在什么位置?有没有比较spectrum看看overlap大不大? 荧光显微镜如何设定的?什么laser?用的什么filter? 另外最重要的,有没有作对照?分别单染,然后两个通道都照看是否有信号,这个是...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 流式检测细胞相对大小及数据分析 2128天前
    这个大概是个数学问题吧,不是很好解释,不是说哪个参数就一定比其他参数好,这和你如何设gate,细胞分群等等都有关系 简单说,如果你的细胞只有一个峰,而且还是正态分布的,那么mean, GMean, 中位数应该是一致的; 还是一个峰,但是不是正态分布,那么mean代表平均数,不一...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 流式检测细胞相对大小及数据分析 2136天前
    应该可以分析比较两组细胞之间的大小了 比较FSC就可以,先设定gate, 当然如果你每次都只有一种细胞不设gate直接分析也行 然后就需要比较两组细胞FSC大小就可以了,一般来说GMean或者中位数更为常用,你给出来的数据是mean (In gate A, FSC x-mea...
  • SmallDonkey
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 辅助型T细胞体外诱导相关 2139天前
    信息不清,实验目的是什么?如果只是为了体外诱导,除了CD3/CD28,还有PHA,PMA等等方法,为什么选择抗体? 另外打算用可溶性抗体还是beads?抗体是打算coat到plate上还是可溶性的在细胞管里诱导? 所有这些都可以成功诱导,但是结果是不同的,比如如果试验目的是做...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 求教关于免疫组化阳性对照的问题,谢谢! 2139天前
    首先,对你的实验目的不明白,既然是不在乎有无表达(据楼主表述因为文献已经证实有表达),你打算检测表达量的多少,那么为什么不做Western? 在定量方面比做染色要好吧,虽然也是半定量,但是可行性和可重复性都比染色要好。 当然,如果楼主试验目的是除了定量以外,还要看定位,那当然就...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  的帖子被加了1分 2152天前

    回复:【求助】ELISA

  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 提取中性粒细胞 2154天前
    关键是你的100%的percoll是如何配置的。 我们用的方法是直接在购买的percoll里面加氯化钠(0.9%),得到100%percoll,然后从这里开始用生理盐水配55%和73%的percoll 还有实验室用PBS配100%percoll,或者直接用买来的percoll...
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 小鼠腹腔巨噬细胞实验 2154天前
    同意peng1985fei战友的意见,建议不要注射肉汤,直接用健康小鼠,除死后直接取腹腔巨噬细胞,虽然量会少很多(但是一只小鼠足够铺一个6孔板),但是理论上这个是没有高度激活的,可以被LPS诱导(本人没有做过LPS,但是做过oxLDL,确定可以用此方法) 祝好运!
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 ELISA 2154天前
    实验仪器、技术方面有问题的时候,首先要确定是否做好了对照(空白对照、阴性对照、阳性对照等等),在所有对照都有的前提下,才好分析问题在那里 比如这个ELISA, 是否做空白孔了?是否做标准曲线了?是否做不加样品只加显色剂等等对照了?结果都是怎样的? 这些信息都有了,别人才好帮你...
  • SmallDonkey
  • SmallDonkey
  • SmallDonkey
    SmallDonkey  回复了帖子 求助_科研中的统计学应用 2321天前
    基础之基础: Excel 初级入门: GraphPad Prism 中级进阶: SPSS, Origin 高级高手: SAS 根据自己的水平,根据实际的实验目的选择合适的统计软件。 比如就需要2个组比较个有没有统计差异,Excel足够了,要是这也非要用SPSS实在没啥意义。。...

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