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  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  回复了帖子 挑单克隆小摇转大揺按1:50接菌都要12小时OD才能到0.6,请问这种情况正常吗 52天前
    请问您知道为什么不正常,是哪里出问题了呢,做了很多次,都是这样~
  • MrBeanYRRJ
  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 挑单克隆小摇转大揺按1:50接菌都要12小时OD才能到0.6,请问这种情况正常吗 53天前

    原核表达过程中,感受态细胞转化挑单克隆揺菌时,菌一直长不起来,应该也没有被污染,用报纸包扎的锥形瓶口请问大家转化挑单克隆之后,先14ml的揺菌管(4mlLB)小摇12个小时,再大揺(按1:50转入装有100mlLB的250ml锥形瓶中)12个小时OD才能达到0.6的这种情况正常吗??看帖子文献以及身边的人都是小摇6个小时,按照1:100的比例加小摇菌大揺只要三个小时就可以达到0.6-0.8的OD了

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 大肠杆菌中表达蛋白困扰半年的各种问题 54天前

    本人摸了一年的原核表达的方法,始终没有做出任何东西,实验中遇到各种奇怪的问题,实验室也没人做过这方面的实验,现有堆积了很久又没有人能解答的问题,很希望各位高手们能指导一下,1.请问大家转化挑单克隆之后,先14ml的揺菌管(4mlLB)小摇12个小时,再大揺(按1:50转入装有100mlLB的250ml锥形瓶中)12个小时OD才能达到0.6的这种情况正常吗??看帖子文献以及身边的人都是小摇6个小时,按照1:100的比例加小摇菌大揺只要三个小时就可以达到0.6-0.8的OD了,2.按照上面揺菌破菌提出来的蛋白溶液,用荧光分光光度计测了一下激发波和发射波,发现溶液的激发波为300nm左右,发射波为350nm,荧光强度为一两千,我表达的绿色荧光蛋白突变体,绿色荧光蛋白的突变体,绿色荧光蛋白波长一般都

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  回复了帖子 多条引物能一起进行pcr吗 146天前
    谢谢您,我最近一对引物做定点突变,试了好几个pcr程序,pcr和DPNI消化完之后是有条带的,但是重组完之后跑的电泳没有任何条带,请问是什么原因,是重组步骤出问题了,还是pcr的时候就没有扩增出东西
  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  回复了帖子 多条引物能一起进行pcr吗 148天前
    非常感谢指点,再请问一般做突变的pcr程序是要用温度梯度,还是用一个温度比较好,最近用引物一对一对做,好像也没有扩增出来,PCR完之后好像是有条带的,但是DPNI消化原始模板之后跑胶又没有条带了,请问这是什么原因图一孔一是marker,孔二是我的模板,孔三四五是pcr扩增产物图二孔子是marker,孔二三四是加了dpni消化之后的体系,孔五六七是DPNI重组之后的体系,完全没有条带了这些跑出来的条带也不知道是不是扩增产物,这方面不懂,希望多多指教
  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 多条引物能一起进行pcr吗 151天前

    请各位大神能指点一下:我有十来对突变引物,每对引物带有一个突变的位点,想将这十对引物放到一个扩增体系里面,让它随机扩增,然后得到带有不同数目突变位点的质粒(质粒上带有一个突变,两个突变,三个突变……十个突变),如果只是一对一对扩增的话,每个质粒上面就只带有一种突变,现在实验需要的是各种不同的突变,请问这种方法是否可行,不行的话有没有其他可行的方法?希望懂的人能够指导一下,迷茫了很多天,不胜感激!

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 蛋白表达pcr步骤,多对引物一个体系随机扩增是不是可以得到多种质粒突变 159天前

    请各位大神能指点一下: 我有十来对突变引物,每对引物带有一个突变的位点,想将这十对引物放到一个扩增体系里面,让它随机扩增,然后得到带有不同数目突变位点的质粒(质粒上带有一个突变,两个突变,三个突变……十个突变),如果只是一对一对扩增的话,每个质粒上面就只带有一种突变,现在实验需要的是各种不同的突变,请问这种方法是否可行,不行的话有没有其他可行的方法?希望懂的人能够指导一下,迷茫了很多天,不胜感激!

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 新人求互注升级 162天前

    新人求关注升级

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  回复了帖子 发帖升级 163天前
    关注你了请关注一下我,谢谢
  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  发布了新帖 互关升级~ 163天前

    互关升级

  • MrBeanYRRJ
    MrBeanYRRJ  加入了调查派 272天前

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