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  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 (求助)鸡IgGFc片段如何分离? 55天前
    sijin2004 从鸡IgG制备Fab和Fc片段的最容易、方便的方法:利用固定化木瓜蛋白酶消化鸡IgG分子为Fab和Fc片段, 酶解后的产物可用固定化蛋白A柱而得到纯化的Fab和Fc片段。具体用什么缓冲液,如何操作请参考以下Protocol. 请问这个木瓜蛋白酶消化的特异性如何?会不会有很多非特异性酶切?
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    Moveeeon  回复了帖子 我想问下检测抗体NR-CE是为了看纯度和小分子含量,检测R-CE的目的是什么呢 200天前
    不是看非糖基化的重链比例吗?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 筛选掉的序列信息是否需要在IND中提交? 243天前
    摘自《临床试验用药物生产质量管理规范(征求意见稿)》,不知大家是怎么具体操作的。
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 关于重组Fc融合降解问题的疑问 270天前
    看到一篇文献,不过他是在His体系里面会降解,PB体系没有降解的情况~
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 蛋白和抗体的高通量纯化! 274天前
    还了解两个设备,TECAN和Protein Maker可以进行高通量纯化。
  • Moveeeon
    Moveeeon  的帖子被加了1分 292天前

    回复:如何处理上游的坑?

    糖型在下游纯化的去除能力极其有限,所以我们上游都是在最初阶段就会考察不同的培养条件,优化得到最佳的糖型比例。关于样品的纯度问题,下游应该尝试各种办法来解决,提高产品的纯度,这也是下游工艺的意义吧。我觉得一个项目确实需要上下游、制剂各个环节的努力,从每个环节都想办法来提高产品的纯度...
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 如何处理上游的坑? 293天前
    糖型在下游纯化的去除能力极其有限,所以我们上游都是在最初阶段就会考察不同的培养条件,优化得到最佳的糖型比例。关于样品的纯度问题,下游应该尝试各种办法来解决,提高产品的纯度,这也是下游工艺的意义吧。我觉得一个项目确实需要上下游、制剂各个环节的努力,从每个环节都想办法来提高产品的纯度、稳定性,共同把项目做好~
  • Moveeeon
    Moveeeon  的帖子被加了1分 295天前

    回复:生物制品中病毒清除/灭活验证工艺交流贴

    做好一个瓶子 楼主您好,请教一个问题。我接触到一些项目都要求纳滤的压力大概在30psi,并且要在4小时内完成纳滤过程。这个要求的依据我一直没找到确切的答案,不知楼主有何高见?同问。并且我看到一些企业做纳滤的工艺优化,会把载量衰减定义在60%或其他一些,我认为生物制品下游的成本纳滤...
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    Moveeeon  回复了帖子 超滤,过滤,层析技术交流及答疑 298天前
    同样希望了楼主讲讲超滤寿命验证的内容。目前法规有无要求一定要进行这项工作?这个工作在什么阶段做合适呢?膜包寿命的验证具体如何开展呢?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 超滤,过滤,层析技术交流及答疑 298天前
    如果吐温会结合在膜上,那下一批次再做超滤,会不会导致最终的吐温偏高呢?还是您在超滤后的清洁中把吐温从膜上去除了?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 生物制品中病毒清除/灭活验证工艺交流贴 298天前
    同问。并且我看到一些企业做纳滤的工艺优化,会把载量衰减定义在60%或其他一些,我认为生物制品下游的成本纳滤膜占了很大的一块,是不是可以在工艺时间上考虑少一些,只要样品可以滤的过去就行呢?另外,有战友可以分享下,一般单抗的纳滤载量可以做到多少?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 重组Fc融合蛋白降解问题 306天前
    请问EDTA、酶抑制剂等是在细胞培养过程中加入的吗?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 Fc重组融合蛋白的聚体现象 307天前
    看了第二篇文献,但是没看明白他们检测不溶性聚体用的方法,另外,可溶性聚体也是未经亲和层析检测的,能否请有经验的前辈们指点?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 酶标仪求助~! 309天前
    普通的96孔板不行,要用UV板,我们用的是Corning的,货号:3635http://dxys.com/VQirzU
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 酸性峰的去除 309天前
    淋洗通过盐梯度来洗还是pH来洗呢?除了载量要控制,上游一旦波动,淋洗条件要跟随载量和上游表达的纯度一起改变,工艺非常的难做啊。
  • Moveeeon
    Moveeeon  的帖子被加了1分 309天前

    回复:去除Protein A纯化步骤中与产品结合较牢固的HCP的洗脱步骤

    黏度吧 想问问大神们 洗杂步骤不是经常会采取高盐来洗杂吗 高盐有利于去除HCP的原理是什么呢我认为是因为高盐可以破坏电荷相互作用~HCP和单抗或者HCP与填料机制的结合主要靠静电作用。
  • Moveeeon
    Moveeeon  的帖子被加了1分 309天前

    回复:抗体收获阶段及存放阶段被还原探讨

    jackieustc  这两个参考文献大家可以找一下研读,找到后请分享上来,谢谢。国外Genetech和Amgen有详细的研究 
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 去除Protein A纯化步骤中与产品结合较牢固的HCP的洗脱步骤 309天前
    我认为是因为高盐可以破坏电荷相互作用~HCP和单抗或者HCP与填料机制的结合主要靠静电作用。
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 请大家帮忙鉴定一下单抗纯化过程中出现的沉淀是否为HCP? 309天前
    我也遇到了这个问题。还没有解决。但是图中35kD的位置有其他检测方法确认就是你的目的蛋白吗?有没有可能是别的杂质呢?
  • Moveeeon
    Moveeeon  回复了帖子 HCP、HCD等杂质去除研究如果做Spiking 研究 311天前
    是不是可以直接用亲和后的料液作为第一步或者第二步离子交换的上样液呢?只考虑HCP、HCD的去除。因为亲和后中间体这些杂质的含量是最多的。

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