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    G-CLONE  回复了帖子 求助:PCR问题 18小时前
    你的体系只能用mix,要用酶的话还需要dNTPs,而且只有2x mix才是10ul体系加5ul的。酶的话不会加这么多。时间设置上退火一般30-60s,没什么问题。延伸的时间根据酶的扩增速率决定。
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    G-CLONE  回复了帖子 求助:引物如何摸索退火温度 18小时前
    引物的标签上应该有个Tm值的,自己可以大致算一下退火温度(AnnealingTemperature)是指引物和模板结合时候的温度参数,当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。它是影响PCR特异性的较重要因素。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度:Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T)复性温度=Tm值-(5~10℃)在Tm值允许范围内,选择较高的复
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    G-CLONE  回复了帖子 冰冻切片 1天前
    一般不建议放太久的。有条件最好是-80度。
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    G-CLONE  回复了帖子 百分之1的DEPC水用来泡提RNA的器械,能重复使用吗? 1天前
    不建议用,一般都说depc在水中的半衰期只有半个小时。
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    G-CLONE  回复了帖子 求助:引物稀释问题 1天前
    一般引物标签上都有标注加多少水的。按照标注溶解后按比例稀释到你需要的浓度就行。至于液体的应该也有标注好的浓度吧
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    G-CLONE  回复了帖子 怎么用Krebs溶液配置不同渗透压? 2天前
    尽量参考一下文献。Krebs的渗透压主要是氯化钠调节的。可以试一下氯化钠的浓度
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    G-CLONE  回复了帖子 大神帮忙看一下这个转子放多大的离心管 2天前
    看着像1.5ml的
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    G-CLONE  回复了帖子 DH5a转化 2天前
    加水都长的话,建议直接将感受态摇起来,直接涂板子看看。是不是有污染。另外可以看一下你的到平板的时候是否温度过高,抗生素失效了。
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    G-CLONE  的帖子被加了1分 3天前

    回复: 碳酸钠-氢氧化钠缓冲液配方

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    G-CLONE  回复了帖子 碳酸钠-氢氧化钠缓冲液配方 3天前
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    G-CLONE  回复了帖子 PD-PCR 3天前
    没见过呢,你在哪里看到的呀?
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    G-CLONE  回复了帖子 电泳这是咋的了? 3天前
    蓝色的应该是你的上样buffer吧,指示作用的
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    G-CLONE  回复了帖子 组织多巴染色步骤 3天前
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    G-CLONE  回复了帖子 cck8求解 3天前
    细胞接种前需要计数的。这样铺的板才好掌握生长情况。①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK-8 试剂后的培养时间。②白细胞可能需要培养较长时间。③当使用标准 96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为 1 ,000 个/孔 (100 µL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 ( 100 µL 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK-8 溶液。
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    G-CLONE  的帖子被加了1分 5天前

    回复:求助:PCR条件摸索问题

    实验过程基因与载体器材旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5ml 微量离心管,双面离心管架,台式离心机,干式恒温气浴。试剂T 载体,T4 DNA 连接酶,连接酶缓冲液,无菌dd Water操作步骤PCR产物与T载体直接连接:(1) 事先将干式恒温仪(或冰盒里的水...
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    G-CLONE  回复了帖子 求助!肝癌小鼠建模该用什么品种 5天前
    仅供参考
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    G-CLONE  回复了帖子 小分子抑制剂小鼠给药 5天前
    一般用生理盐水等等渗溶液稀释
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    G-CLONE  回复了帖子 Zeocin造模剂量 5天前
    仅供参考
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    G-CLONE  回复了帖子 细胞处理抑制剂的方法 5天前
    建议用DMSO溶解后,用培养基稀释后进行细胞处理。

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