登录| 注册

丁香客

选择模板

更多 发表的帖子

11197

浏览

【求助】细胞冻存关于DMSO级别问题

回帖:8    收藏:6    投票:1

4464

浏览

【求助】GS扩增系统 MSX的配置

回帖:6    收藏:0    投票:0

3624

浏览

【求助】细胞培养出问题了,是支原体污染吗?

回帖:10    收藏:1    投票:0

更多 最新动态

  • 906003500
    906003500  的帖子被加了1分 2167天前

    回复:【求助】DMEM/F12与DMEM的区别

  • 906003500
    906003500  回复了帖子 WB相关问题 3031天前
    首先page电泳,只需普通化学试剂,资金少量,但预染marker较贵,可买小包装,小鸡300元, 转膜,只需普通化学试剂,消极50元, 一抗二抗孵育,显色剂较贵,可买小包装,约数百元, 显影定影液及胶片可在照相馆买,数百元。 共计大几百元。 我也说不了准确价格,因为同种试剂,不同...
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 WB电泳还没到分离胶就调到90V会有什么影响? 3031天前
    没事的,只是压胶的效果会差一点点,到时条带会相对有多弥散的感觉,但这种现象不明显,其实120v从头跑到尾也行。没多大关系。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 WB相关问题 3031天前
    不知道你有没有所需的仪器。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 neo基因 3031天前
    当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 构建质粒过程中设计引物 一般都带有酶切位点 这会不会影响PCR的特异性 3031天前
    不会有非特异性扩增,你只要有15bp左右与你的目的基因互补即可,引物的5'段可以加你的酶切位点基因,这仅仅是几个碱基,很难发生因为这几个碱基的原因发生非特异性结合。
  • 906003500
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 质粒线性化问题 3034天前
    判定酶切效果,你可以将线性化的质粒转化大肠杆菌,看长斑情况,越多,效果越差; 质量不是称重得到的,而是用紫外分光光度计测量浓度得到的; 10ul左右去离子水即可。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 SDS-PAGE电泳的一些问题 3038天前
    这个不是蛋白没分开,是因为那个蛋白浓度太高。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 关于PCR产物目的条带遇到的棘手问题 3038天前
    基因组本来就是一个非常复杂的模板,设计的引物不仅扩增你的目的片段,往往也可以和其他位点dna结合产生扩增。你可以尝试加入终浓度1%的DMSO提高扩增的特异性,针对条带较弱的问题,你可以使用touch up pcr程序扩增。 但从另一个方面说,非特异性扩增其实对你的实验没有太大影响...
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 质粒线性化问题 3038天前
    线性化载体选择限制性内切酶的选择要考虑到: 1、重组载体上仅有一个位点而不是多个, 2、不能讲一些功能基因片段切断,比如启动子,自己的目的基因。 基本上就这2个条件,不能随便选择酶切位点。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 分泌表达的上清如何作用细胞 3040天前
    最好纯化得到浓度较高,纯度90%以上的目的蛋白,然后用细胞培养基配成合适浓度作用细胞。 或者不做纯化,进行简单浓缩,透析(降低盐离子浓度),然后用未转化的细菌培养上清做相同处理,作为阴性对照,作用细胞。看细胞生长情况。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 如何浓缩提取的基因组DNA 3040天前
    纯化DNA 去除DNA溶液当中的酶类和蛋白质,经典的方法是使用氯仿抽提,或者是1:1的苯酚氯仿,或者是苯酚。两种有机溶剂混合使用要比使用单独的一种更好,因为这种方法非常有效的使蛋白质变性,酶类失活。然而,尽管苯酚可以有效的使蛋白变性,但是不能够抑制RNase的活性,而且其也是含有...
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 PCR后电泳后面模糊的一片,是什么原因呀,求助呀! 3040天前
    非特异性扩增,没事的,你只要切胶回收就好了。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 定量pcr的数据重复性不好 怎么办啊? 3040天前
    多做附孔,注意细节操作。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 PCR条带总是跑不好,不知道问题出在哪,请大家帮忙看看,感激不尽 3040天前
    这个问题应该出在加样孔上,建议: 将所有的器材刷干净,溶胶的容器,制胶槽,特别是梳子,不要带水。加完eb后摇匀。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 毕赤酵母GS115分离纯化 3040天前
    YPD固体培养基,划线,30摄氏度培养48h。然后挑形态正常的菌落。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 ***各位同学,做western出现白色的目的条带,是什么原因啊。 3040天前
    那个根本不是条带,你的暗盒夹太脏了,导致本底很杂。建议换个新的吧。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 小鼠肝脏总RNA提取! 3040天前
    上面2条带就是28s和18s,最下面的那条带是5s,5s过亮,说明rna有所降解,不知你干什么用,要求不高的话,你的rna还可以用。要求高的话就难说了。
  • 906003500
    906003500  回复了帖子 DNA提取试剂盒 3040天前
    如果你买的是完整的试剂盒,那么里面应该有所需的全部试剂,但有些试剂盒里面的有些常用化学试剂需要自己准备,或者添加,比如洗涤用的乙醇,就需要自己用去离子水配置75%乙醇。

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客