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  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 请教,用随机6核苷酸进行反转录长度的问题 170天前
    关于反转录、随机引物,学习了不少,谢谢各位大神的普及!
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 疑难求解:为什么cDNA模板量少了CT值反而低? 348天前
    引物和模板量的问题吧
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 环状RNA (circRNA)【技术答疑】交流贴-每天定时答疑 372天前
    求助。自己设计的环状RNA引物,跑qPCR并跑溶解曲线,模板是我梯度稀释的cDNA,1/10, 1/20,1/40,1/80,1/160,1/320,1/640。结果溶解曲线单峰,但不同浓度样品的CT值却没有什么差别(都在32到35之间),双复孔差异很大,无法计算扩增效率。请问各位大神有没有遇到过这种情况?同时跑了内参GAPDH,正常。
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  :求助。自己设计的环状RNA引物,跑qPCR并跑溶解曲线,模板是我梯度稀释的cDNA,1/10, 1/20,1/40,1/80,1/160,1/320,1/640。结果溶解曲线单峰,但不同浓度样品的CT值却没有什么差别(都在32到35之间),双复孔差异很大,无法计算扩增效率。请问各位大神有没有遇到过这种情况?同时跑了内参GAPDH,正常。
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 Western Blot前煮蛋白对结果真的没影响吗? 618天前
    在管盖上用锥子扎个孔,这样蒸汽就可以散出,就不会发生爆管和进水的现象了。
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 免疫组化背景深没有阳性表达 1004天前
    楼主后来是怎么解决的,我做的鼠心脏组织,也是背景深,阳性染色不明显。已经把5%BSA封闭时间提到了1h,3%过氧化氢孵育时间20min,抗体浓度降到了1:250。仍然不理想,DAB染1min就已经出现棕色,但是阳性染色还是不太容易看到。
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 如何降低免疫组化背景??? 1010天前
    wh2008,请问您最后是怎么解决的?
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 常见免疫组化难题集锦 1036天前
    楼主写的很详细,我想问一下灭活内源性过氧化物酶的过氧化氢4度没有避光保存,一个月后还能用吗?
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 最近做免疫组化的心得体会 1036天前
    楼主图片很好看,今天刚做过免疫组化,也是第一次做,用老板一个月前回收的DAB染色,染色染了6分钟,用回收的苏木素染了2分钟,显微镜下观察,视野中全是黄色。老板亲自做时DAB染了5分钟,我用的是回收的,怕染不上,就多染了一分钟,结果竟然这样,是不是染过了?
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  加入了调查派 1423天前
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 请教动物组织中提取RNA并保存的具体步骤,谢谢 1447天前
    楼上的为什么要把Trizol分开来加呢?我也是用同样的方法,将组织放在玻璃匀浆器中研磨,我的100mg组织每次加2mlTrizol,但是每次提完RNA后都降解了。查了很多资料,也改进了不少,问题还是不知道出在哪里?
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 动物总RNA的提取 1447天前
    再补充一句,我也怀疑过是不是我的试剂出问题了,但是用同样的方法同样的试剂去提细胞中的RNA都能提出来。所以,问题是不是还是出在我的组织研磨的过程中,我该怎么改进呢?我也试过用液氮研磨的,非常不好研磨,因为心室被冻之后非常硬,在研钵中研磨组织块总是飞溅,好不容易研磨完了,结果提出来...
  • 错落的琴键1
    错落的琴键1  回复了帖子 动物总RNA的提取 1447天前
    你好,我就是用同样的方法提的小鼠心室中的RNA,但是每次提完跑电泳时总是降解,5s超级亮,28s和18s非常微弱,请问能不能帮我分析一下我的问题出在哪里?谢谢了! 方法:1、脱臼处死小鼠,开胸,取心脏,PBS中冲洗干净,剪下下三分之一心脏(心室的位置)放入Ep管中,投入液氮中,准...

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