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【原创】蛋白表达纯化平台合作

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高质量预染蛋白marker批发出售

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高质量蛋白marker批发出售

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  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 分子筛不能有效分离酶切后的融合蛋白 541天前
    你这种分子量差别,只存在理论上用分子筛分开的可能性,在实际的操作,或者常规的实验室里面,想用分子筛分开是不可能的。一般至少5倍以上才推荐用分子筛,否则后续的操作比较费劲。 不知你说的酶切后再过亲和柱去标签为啥不行,当然可能原因很多,除非你是包涵体变复性后再做的酶切,否则个人...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 哪里有提供蛋白纯化服务 546天前
    这样的公司有很多啊,有好有坏,基本是不保证活性的,当然,保证活性的话,价格更贵!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 蛋白纯化 546天前
    这种情况下,原因有很多种。 不知你用的是酵母还是昆虫,还是哺乳动物细胞。 你所说的不结合镍柱,一般的话,这种表达量不会很大,普通的SDS-PAGE常规检测是看不出来的,从上样和流出。 只能推断你是没有得到目的蛋白,所以说没有结合。 一般好多情况下怕his包裹在蛋白结构...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 原核表达蛋白 570天前
    这个怎么说呢,主要看蛋白有没有活性吧,用原核表达纯化。还要看你想要的什么活性。 有活性的话会一部分形成聚体,这个你可以通过非还原胶来看。当然你检测有没有表达的话,用还原胶来看,大多数情况下都是以单体的大小表达的。 祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 十万火急~~~~~~~变性蛋白挂在ni柱上洗不下来~~~~~ 656天前
    那你切胶回收蛋白都可以免疫兔子做抗体啊,祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 蛋白质加buffer煮后放常温会降解吗? 662天前
    做WB还是最好冻起来,有降解什么的,到时候信号放大什么的,结果会不一致,祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 十万火急~~~~~~~变性蛋白挂在ni柱上洗不下来~~~~~ 662天前
    这个问题,大家都很常见啊,主要还是看你后续的用途啊,制备抗体,那其实包涵体多洗洗,可能比你用镍株纯化得到的还纯(由于你纯化得率很低,可能看起来很纯,其实不然);如果做有活性的,测活用,那这个就涉及到怎么复性,你这样做,由于蛋白大量聚集沉淀在柱子上,再变复性什么的,得到有活性的蛋白...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 17kd的转膜条件 662天前
    这个有些时候是不能省的,个人觉得还是分开转最好,还有就是最好用12%的胶,或者13%的胶,转膜条件嘛,差不多就是湿转,恒压100V,60-70min,祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 WB,250KD大分子蛋白的转膜条件 662天前
    这么大的一般建议是100mA横流湿转过夜(16-20小时),冰浴中进行。就按照你的转膜缓冲液,是可以得。 祝好! 当然,如果蛋白更大的,得跑琼脂糖胶了,然后再转膜!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 蛋白纯化 709天前
    你这个问题其实可以很简单化,要看活性,那就直接拿超声破碎后离心上清测活,看活性大概有多少,流出液有多少活性,以及洗脱液的活性,看活性蛋白主要集中在哪个部分? 如果流出液活性很少,那说明不结合的蛋白本身就没有活性,那就是MBP只是让一部分蛋白可溶了,但结构不对,也没活性,也不挂柱。...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 困扰了一年的蛋白表达问题,求帮助,快崩溃了。 780天前
    可能就是不稳定啊,没有用过哎。
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 困扰了一年的蛋白表达问题,求帮助,快崩溃了。 783天前
    打错了,是不太好表达啊。如果WB没有看到全长,只看到GFP的条带的话,说明后面翻译不下去了,或者提前终止了。要么降解了,不知你的WB杂带多吗?如果比GFP蛋白大的上面还有条带,又比融合蛋白小,说明你的目的蛋白不太稳定,不太好表达。总之就一句话,你的技术没问题,GFP都表达了。还...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 如何提高BL21(DE3)细胞中蛋白的表达量? 795天前
    WB才有很微弱的条带,个人觉得基本上应该是没有表达,不知道你那个WB的背景怎样,杂带多吗?如果有杂带多的话,估计就是非特异性条带了。 这种情况下,你再怎么优化个人觉得没有啥意义。 应该尝试不同的表达菌,或者优化下基因序列,最有效的应该是选择一段进行表达。 祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 原核蛋白表达,总是在沉淀中,怎么解决? 795天前
    我们可以做这方面的实验服务,优化蛋白可溶表达纯化! 祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 困扰了一年的蛋白表达问题,求帮助,快崩溃了。 795天前
    这个怎么说呢,WB检测不到HIS的信号,理论上应该是没有表达的,当然我不知道你这个样品是怎么处理的,是直接上清检测还是也检测了细胞裂解物,还有就是不知道你这个蛋白是不是膜蛋白? 至于你说EGFP表达了,看到荧光了,说明你的技术是没问题的,WB检测到GFP表达,请问你这个条带位置是...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 配胶插梳子之后变成锯齿状了 909天前
    胶凝的不好而已,上面有人已经说了天气冷,很简单,将TEMED的量加倍即可,下次你再做的时候加8-10ul的TEMED就行了。
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 做WB的困惑 935天前
    170kD蛋白湿转的话,我们常规的90mA转膜过夜,或者100V转膜2.5小时。你的这个转膜的条件很少用到啊。太温和了呵呵
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 为什么我的beta-actin跑出来会连在一起 935天前
    主要还是样品有关啊,你的样品应该是组织样品啊, 如果只检测actin的话,可以减少上样量,还有就是用1Xloading稀释样品后再上样,那样会好看很多。 至于你下面这个原因,应该不是没转好啊,还是样品的问题啊,用loading稀释后会好些,当然看实验需要啊,有些蛋白必须浓度高才能...
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 已经上图,请各位战友帮忙! 935天前
    检查一下你浓缩胶和分离胶缓冲液的PH值吧,电泳的原理其实很简单啊。你的蛋白就没能进分离胶。 最有可能原因就是pH值得问题啊。如果是样品处理问题的话,你的marker也应该跑的很好啊,可marker 在浓缩胶就分开了,也没进入分离胶,所有很大程度上是PH值得问题,祝好!
  • 蛋白之安基
    蛋白之安基  回复了帖子 肠激酶 sigma 生工 935天前
    我们的肠激酶是真核表达纯化的,效果个人觉得不错啊,当然我们自己说没有用啊,当然可以购买啦。具体的可以给我发信息。祝好!

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