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  • 白云苍狗PNSU
    白云苍狗PNSU  发布了新帖 链霉菌的接合转移 1天前

    有没有做接合转移比较精通的师兄师姐啊,我在按照毕业师兄的步骤做的时候最后一步涂布硫链丝菌肽后没到两三天MS板上就长了针尖状的白点,感觉并不像单菌落,重复了五六遍了,抗生素浓度也调整过,但还是一样,有没有大神指导一下啊,下面是接合步骤(1)    将重组表达质粒pSET152-ecbD导入E.coli ET12567/pUZ8002,转化子E.coli ET12567/pUZ8002/pSET152-ecbD作为供体菌;(2)    供体菌接种于LB液体培养基(含有50 μg/mL卡那霉素25 μg/mL氯霉素和50 μg/mL安普霉素)中 ,37℃ 培养过夜;(3)    按1:50的比例接种于含相同抗性的新鲜的LB液体培养基中,继续培养至OD600=0.4~0.6;(4)    离心收集菌

  • 白云苍狗PNSU
    白云苍狗PNSU  发布了新帖 变铅青链霉菌的培养 13天前

    想问一下有没有师兄师姐知道的变铅青链霉菌的菌落形成形态和生长过程菌落颜色的变化啊

  • 白云苍狗PNSU
    白云苍狗PNSU  发布了新帖 有用ET12567做过接合转移的,我想请教一下 31天前

    最近做接合转移pjtu1278转化ET,但是我的是在三抗板(Amp.Kan.Cm)上24h长的很少,挑单菌落菌p验证转化成功了,但是挑单菌落接三抗试管后长的非常慢,24h试管还不是很浑浊,有没有大神知道啊,是不是ET12567本来生长速度就很慢啊?但是24h也应该差不多了啊

  • 白云苍狗PNSU
    白云苍狗PNSU  发布了新帖 关于DH5α感受态转化的问题想请教一下站里的大神 63天前

    最近在做高拷贝数质粒的转化,在双酶切无目的基因连接后,转化DH5α,操作都是按照师兄的毕业论文与酶的说明书来的,涂抗性板后第二天有一块板长了密密麻麻,一块很稀疏,两个板分别挑菌,进行菌p,全部为假阳性,所以我就开始排查:1、菌落pcr体系与操作程序有无问题,于是对一个阳性菌落进行pcr成功p出目的条带,所以基本可以排除2、感受态有无问题,感受态保藏-80度冰箱当时为了保险起见还去借了一根确认可以使用的,所以基本也可以排除3、抗性板有无失活,是前天晚上新倒的氨苄板应该没问题的4、我又做了一步将阳性质粒导入感受态,涂板,挑菌pcr,依旧无任何条带只有很亮的引物二聚体,我现在的问题是明明抗性板上长了,为何挑菌一直p不出来?求大神解答

  • 白云苍狗PNSU
    白云苍狗PNSU  回复了帖子 【专题讨论】原核表达条件优化! 114天前
    谢谢大佬分享

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