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  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 为什么要当CRC(临床协调员)?-资深HR谈SMO行业的发展 1天前
    因为不了解这个行业,不知道博士进这个行业适合什么职位。本人博士是学医药的,会了解临床的东西,但毕竟不是真的做临床
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 为什么要当CRC(临床协调员)?-资深HR谈SMO行业的发展 8天前
    这种岗位或者行业适合博士入吗
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 单抗类似药细胞株筛选分享 11天前
    楼主,你这个我上次听销售也说过。他客户中有些医院实验室也想做这个,原研药太贵,应该全球第一贵吧。然后说放在CHO根本不表达,我估计和你的问题一样的
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 19天前
    蛋白很稳定,二硫键有很多链内的,十几对吧。打开后不会像单抗那样有亚基。100度我准备试一试。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 19天前
    蛋白二硫键有十几对,都是分子内二硫键,就是打开后也不会像抗体一样形成亚基。100度我准备试试看,谢谢老师
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 19天前
    版主请问一下,写给1%对照品如何理解?浓度上样0.1ug?这样还看得到杂带嘛。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 27天前
    第一个明白了,CE是电进样,进样了多少量我也不知道。也是请教了一个老师和我说,一般都是ng级,SDS-PAGE进样10ug了,加上考马斯亮蓝放大了响应。第二个,非还原和还原与CE一样除了buffer不同,都是70度反应10min。所以都算煮过的吧,从SDS-PAGE看,非还原在还原主峰的位置有浅浅的峰,还原在非还原主峰的位置也有浅浅的峰。这我就很诧异了。以前其他蛋白发现,100度煮沸的杂带比例比70度煮的多,所以我们后来都和CE-SDS一样,用70度反应了。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 27天前
    谢谢版主,这讨论的有点少啊。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 28天前
    jackieustc 我对两种方法的对比讲不好。 但是单独对于SDS-PAGE而言,这个方法做为纯度方法挑战挺大,脱染色细节需要把控,需要考虑灰度扫描是否那么可靠?会影响结果。但确实那个地方是有一些东西的。可能与两种方法检测形式有关。 关于非还原的表观分子量好理解,或许就是不怎么展开,还原后更展开,这个遇到过例子。 版主,你是说二硫键没有完全打开的非还原,sdspage跑的更快嘛。但是cesds两个的保留时间一样,说明分子量是一样的。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 28天前
    各位大神,是否有时做其他蛋白时会发现,CE-SDS和SDS-PAGE的结果不一致,杂带数量不一致,主峰纯度不一致的情况。这个应该如何解释。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  发布了新帖 请教CE-SDS和SDS-PAGE分析蛋白纯度的差异 28天前

    CE-SDS和SDS-PAGE都是用于检测蛋白纯度的电泳方法,药典也都有记载,算很常规的操作。但是最近我在做一个蛋白(无糖基化)纯度分析时就发现了这么个问题。还原(红色)和非还原(蓝色)CE-SDS结果见下图,我这里已经把蛋白提高到20 g/L,最终上样的浓度是5 g/L。积分下来纯度都是100%,出峰时间几乎一样。也就是说,还原和非还原分子量一样,而且没看到杂带。下面这个是SDS-PAGE结果,从左到右依次为3个还原操作,Marker,3个非还原操作。点样浓度10ug/孔。胶浓度10%。两个一对比就发现问题了,第一CE-SDS的纯度是100%,是怎么改积分参数都没有其他峰积出来,而SDS-PAGE结果扫描软件就能扫到杂带,非还原有部分聚体,还原有一些低分子量的。第二是SDS-PAGE怎么非

  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 构建IgG1单抗时重链亚型的选择,如G1m1、G1m2、G1m3、G1m17等 52天前
    人鼠嵌合的鼠的意思吧
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 成像毛细管等电聚焦分析技术(iCIEF)检测单抗电荷异质性 352天前
    你好,请问这个文章中。抗体2加了20微升1%TEMED,而抗体1则不用。请问这里20微升1%TEMED起什么作用?什么情况下加这个东西,是怎么考虑的?还请不吝赐教,非常感谢
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 抗体糖型的工艺调节相关文献 352天前
    在ggghhhh大神里看到了,我们实验室写的文章。我帮忙做了里面很多数据。当时师兄还有很多糖代谢的数据,本来可以写着很多代谢动力学数据的,可惜急着毕业要发文章,最后写成了纯工艺优化的文章(加多少什么效果)。   
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 抗体糖型的工艺调节相关文献 352天前
    ggghhhh大神已经发的非常全面了。在增强N-糖基化延伸的添加剂里,ManNAc作为唾液酸的直接前体虽然有效,但是成本太高没人会用的。其他糖类前体添加时,得考察好细胞有没有相应高亲和的转运子,km值多少,这样可以指导添加量。此外很多糖类和葡萄糖是共用转运子的,会影响葡萄糖的代谢,产量细胞代谢都可能受影响,需要充分考虑。BMS作者*********li,也就是ggghhhh发的文章中“Understanding and Controlling Sialylation in a CHO Fc-Fusion Process”这个团队。他们发了很多关于调节融合蛋白糖型的文章,糖皮质激素,IGF之类的,都值得借鉴。抱歉,文献管理不当有点乱,也很忙暂时没时间找。以后正好看到了再上传。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 交流贴:讨论一下上游细胞工艺开发的挑战? 352天前
    是的,我们目前对于细胞的行为仍不甚了解。细胞里面到底发生了什么,仍然是摸瞎子。希望领导们也能像你这么想就好了。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  加入了调查派 519天前
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 蛋白超滤技术相关知识整理(个人整理,欢迎交流补充) 550天前
    非常感谢,另外还有一个问题请教一下,新买来的超滤管都是装在自封袋里的。需要立刻放到20%酒精里吗?我们一般是使用过后再放到20%酒精里。新的就让它呆在袋子里
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 蛋白超滤技术相关知识整理(个人整理,欢迎交流补充) 563天前
    你好,看了你的帖子收益匪浅。有两个问题请教。1,超滤离心管一般工作的离心转速是多少?我一般12000rpm,冷冻离心。2,确实碰到某些蛋白,在超滤后沉淀了。应该是高浓度下不稳定。那么还有没别的方式对蛋白进行浓缩和除盐。蛋白溶液体积只有几百微升的样子,想浓缩3-4倍。
  • 申花鲨鱼
    申花鲨鱼  回复了帖子 国内研究抗体的实验室推荐 646天前
    华东理工大学谭文松老师课题组,是偏向做应用的。基本课题都是横向课题,优化抗体生产工艺,了解工艺与产品质量的关系。不做上游,也不做动物实验,毒理学,就和genetech amgen那种process development部门差不多,

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