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  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 细菌外膜蛋白定量问题 183天前

    各位大神好,我用试剂盒提取了细菌外膜蛋白,想定量,用wb常用的 BCA法,可是加入染液后就可以看到白色混浊,感觉不靠谱,请问大神,这种情况下要怎么处理,把蛋白样品从1/5变成更稀能不能解决问题

  • 爽朗的赖赖赖
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 体外转录需要在启动子前加保护碱基么,一般加多少,加什么碱基 273天前

    体外转录需要在启动子前加保护碱基么,一般加多少,加什么碱基?我准备用pcr产物做模板,各位大神给我点指导吧。

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 有没大神做过RIP实验,求指教呀呀呀,然后有没推荐的RIP试剂盒 278天前
    最贵的就算是这个试剂盒和抗体了,阴性对照用和感兴趣抗体同源的IGg,这个试剂盒有,仪器就要弄个强的磁力架,其他没啥特殊的。
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 想做蛋白质和RNA相互作用的EMSA,求问RNA探针的设计要点 332天前

    各位大神,我想做蛋白质和RNA相互作用的EMSA,但周围没人做过,木有底气,想问问RNA探针的设计要点,预料中的蛋白质和RNA结合的目的序列大概8bp那样子,那我的探针需要设计多长合适,需要体外转录长的,还是找公司合成不用那么长的

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 有没大神做过RIP实验,求指教呀呀呀,然后有没推荐的RIP试剂盒 332天前
    做第四遍了,第三遍感觉有一丢丢成功的趋势,准备再整整
  • 爽朗的赖赖赖
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 最近用6his标签纯化试剂盒纯化我的重组蛋白,发现有杂带,求指教 359天前

    各位大神,我最近用6his标签纯化试剂盒纯化我的重组蛋白后发现除了我要的蛋白外还有杂带,而且比较单一,变性跑的蛋白质,如果说纯化没洗干净的话应该很多条带,暂不考虑,可能是二聚体没整干净,也可能是之前和这个蛋白相结合的其他蛋白给一块整下来?想不懂,各位大神知道这是啥情况么,怎么去掉它呢,我想用30kD超滤管不知道能不能去掉,不过我这个蛋白纯化是要有活性的,它本来就可能是二聚体啥存在,超滤管会不会把它也给清了?

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 有没大神做过RIP实验,求指教呀呀呀,然后有没推荐的RIP试剂盒 359天前
    一塌糊涂,Millipore的试剂盒是做细胞的,我整细菌,试剂盒的裂解液裂解都裂不掉,想方设法中。
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 求问细菌做westernblot用啥内参合适? 467天前

    近期要做个westernblot,就是做细菌的,看资料说要有内参比较好发文章,但是网上找一下好多内参抗体说明那都没提到细菌,就怕不能用在细菌上,**各位大神有啥推荐的

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 有没大神做过RIP实验,求指教呀呀呀,然后有没推荐的RIP试剂盒 467天前
    在你没回复之前我找来找去就找到Millipore的试剂盒,最近刚刚到货,贵得很,不知道能不能成要不然早看到你的回复的话我就可以对比对比了
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 有没大神做过RIP实验,求指教呀呀呀,然后有没推荐的RIP试剂盒 509天前

    不久后要做RIP实验,有没做过的大神来指教一下呀,首先我准备买试剂盒做,就是RIP(RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit)试剂盒,各位大神有什么推荐的试剂盒么,我问来问去,没问出啥,就来这请教各位大神啦,然后这个实验有没特别需要注意的地方呢?谢谢!,

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 引物设计碰到麻烦呀 615天前
    谢谢大神,哈哈,那我先自己试一试,实在不行再找找公司帮忙设计
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 引物设计碰到麻烦呀 615天前
    谢谢大神,那我先自己试一试啦
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 引物设计碰到麻烦呀 617天前
    谢谢大神,不过,我问实验室师姐,实验室引物一般在华大基因那搞的,说没有帮忙设计的我又不知道其他哪些能帮忙设计的,于是,这几天找了些引物设计的资料看了看,然后把目的片段两端放宽些,找到primer软件评价接近八十分的准备搞来试一试,不知道能成不,不过还有一个问题,我是准备扩增之后酶切的,扩增片段上游有个本来就有的酶切位点,下游没有,我就准备引物上加上酶切位点,然后这个引物的tm是按照加酶切位点前算还是按加后的算,还是说pcr时先按没加时算之后再按加后算大神你知道不
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 primer premier 6.00 安装与激活 622天前
    哈哈,要用管理员运行,可以直接在c盘搜索cmd.exe这个,然后右击以管理员运行,再搞
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 引物设计碰到麻烦呀 623天前
    哈哈,谢谢大神,还有这种操作的呀,我还不知道,哈哈哈哈
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  发布了新帖 引物设计碰到麻烦呀 624天前

    各位大神,我实验要copy个基因,用来做表达载体的,因此这个扩增片段是明确而且不能乱改的,因此我引物就只能是它两端那,可是软件说这引物有二聚体,错配,发夹结构,呀呀呀,看得我心里好没底,引物二聚体我可以再提纯,错配听说用高保真酶能控制少一些,但是发夹这个我不知道咋处理,这个发夹是软件说有还是看几率,通过什么来判断几率,碰到我这种情况该如何解决呢,我想来想去,搞不懂因此来请教大家。

  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 求pWH1266质粒的相关信息 628天前
    谢谢大神,太感谢你了,这个mRNA反转录也是原来的设想,并没做,而且当初设想也只是按cds做引物copy而已,因为cDNA序列我也不知道,能知道有的序列也只是cds,现在想想没啥必要,这个原核生物基因没有内含子,也没必要从cDNA入手了,至于这个菌的启动子,NCBI里头有这个菌的序列,但是各个基因都没说启动子,这个鲍曼不动杆菌可能信息太少了,我前几天用NCBI看pbr322质粒序列它就有写启动子在哪之类的,这种就很清晰,看这个鲍曼的序列就只有说哪里是cds,想想也只能硬着头皮这么做了,谢谢大神的指导,刚开始搞实验方案就这么头大,接下来四处收集物资,然后做实验等希望能顺利些,再次谢谢大神
  • 爽朗的赖赖赖
    爽朗的赖赖赖  回复了帖子 求pWH1266质粒的相关信息 629天前
    哈哈,谢谢大神,这篇文章我看过,它的基因是整一个完整的,比较好办但是我这个基因在NCBI里头找不到完整的,它写的gene和cds一样的序列没有前面的启动子,sd序列,也没后面的终止子,我又不确定哪段是,因此才想把它先前那个蛋白之后的序列到这个基因这整一段都copy下来(这两者之间应该就包括启动子,sd序列了),尾巴的话怕带上后面基因启动子就到终止密码子那就好了,用这样一段替换掉质粒原有蛋白前大半部分序列,后面部分原有蛋白没sd段也表达不了(应该没啥影响),后面接上质粒原来的终止子,嗯,想法就是这样,就是不知道可行不想来想去好像也只能这么搞了,接下来先找找物资啥的

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